針對toso的抗體的制作方法
【專利說明】針對TOSO的抗體
[0001]相關申請的交叉引用
[000引本申請要求2013年7月3日提交的美國臨時申請號61/842，766的權益，該美國臨時 申請的內容出于所有目的W全文引用的方式明確并入本文中。
[0003] 發明背景
[0004] Toso或化im3(化S細胞調亡誘導分子3)是最初通過在作為化S誘導的調亡細胞死 亡的介體的T細胞白血病細胞系化rkat細胞中進行逆轉錄病毒過度表達篩選而被任選表征 的單跨膜細胞表面受體化it〇shi，Y.等人，Toso，a cell surface,specific regulator of hs-induced apoptosis in T cells. Immunity, 1998.8(4):第461-71 頁）。后續研究已經 表明，Toso是難W捉摸的IgM受體。Toso的表達似乎還與慢性淋己細胞性白血病或化L的特 別侵襲性的形式相關。Toso活性的調節還可能影響免疫系統病癥。
[000引需要能夠調節Toso活性的分子。
[0006] 發明概述
[0007] 相應地，本發明提供了用于調節Toso活性W及治療牽設Toso的疾病和病癥的方法 和組合物。
[000引在一個方面，本發明提供了結合Toso或Toso配體的抗體。
[0009] 在另一個方面，本發明提供了一種抗體，其包含含有SEQ ID N0:l、3、5、7、9、ll、 13、 15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57 中的任一 個的重鏈可變區。
[0010] 在另一個實施方案中，本發明提供了一種抗體，其包含具有與SEQ ID NO: 1、3、5、 7、 9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57中 的任一個具有至少約95%序列同一性的序列的重鏈可變區，其中所述抗體結合Toso。
[0011] 在另一個方面，本發明提供了一種抗體，其包含含有SEQ ID N0:2、4、6、8、10、12、 14、 16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58 中的任一 個的輕鏈可變區。
[0012] 在另一個實施方案中，本發明提供了一種抗體，其包含具有與SEQ ID N0:2、4、6、 8、 10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、：M、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58 中的任一個具有至少約95%序列同一性的序列的輕鏈可變區，其中所述抗體結合Toso。
[0013] 在另一方面，本發明提供了一種抗體，其包含:第一重鏈CDR，其包含表1中所列出 的CDR1序列中的任一個;第二重鏈CDR，其包含表1中所列出的CDR2序列中的任一個;第Ξ重 鏈CDR，其包含表1中所列出的CDR3序列中的任一個;第一輕鏈CDR，其包含表帥所列出的 CDR1序列中的任一個;第二輕鏈CDR，其包含表2中所列出的CDR2序列中的任一個;和第Ξ輕 鏈CDR，其包含表2中所列出的CDR3序列中的任一個，其中所述抗體結合Toso。
[0014] 在另一個方面，本文中所描述的抗體涵蓋人源化抗體。
[0015] 在另一個方面，本發明提供了一種核酸，其編碼與上述抗體中的任一種一致的抗 體。
[0016] 在另一個方面，本發明提供了一種表達載體，其編碼與上述抗體中的任一種一致 的抗體。
[0017] 在另一個方面，本發明提供了一種制造與上述抗體中的任一種一致的抗體的方 法，其中所述方法包括提供包含編碼所述抗體的核酸的細胞的步驟，其中在適合于表達所 述抗體的條件下培養所述細胞。
[0018] 在另一個方面，本發明提供了用于治療Toso相關疾病的方法，所述方法包括用與 上述抗體中的任一種一致的抗體來治療有需要的受試者。
[0019] 附圖簡述
[0020] 圖1提供了結合Toso的抗體的序列。星號表示終止密碼子，其在一些實施方案中可 W通過本領域中已知的蛋白質工程改造方法來去除W允許表達全長序列。
[0021] 圖2提供了不結合Toso的抗體的序列。星號表示終止密碼子，其在一些實施方案中 可W通過本領域中已知的蛋白質工程改造方法來去除W允許表達全長序列。
[002引發明詳述
[0023] 除非另外指出，否則本發明的實施可W采用在本領域技術人員能力范圍內的有機 化學、聚合物技術、分子生物學(包括重組技術）、細胞生物學、生物化學和免疫學常規技術 和描述。所述常規技術包括聚合物陣列合成、雜交、連接、隧菌體展示和使用標記的雜交檢 測。合適的技術的具體說明可W參考下文中的實施例。然而，當然也可W使用其他等同的常 規程序。所述常規技術和描述可見于標準實驗室手冊中，諸如Genome Analysis: A Laboratory Manual Series(第I-IV卷）；Using Antibodies：A Laboratory Manual; Cells:A Laboratory Manual;PCR Primer:A Laboratory Manual;和Molecular Cloning： A Laboratory Manual(都得自于Cold Spring Harbor Laboratory Press) ;Stryer，L. (1995)Biochemistry(第4版)Freeman，New York;Gait，"Oligonucleotide Synthesis：A Practical Approach" 1984，IRL Press，London;Ne1 son和Cox(2000)，Lehninger， Principles of BiochemistiT第3版，W.H.Freeman 化b.，New 化rk，N.Y.;和Be;rg等（2002) Biochemistry,第5版，W.H.Freeman化b.，New化rk，N.Y.，所有文獻都出于所有目的W全 文引用的方式并入本文中。
[0024] 注意，除非上下文另外明確指示，否則如本文中和所附權利要求書中所使用，單數 形式"一個/一種"和"該"包括復數個指示物。因而，舉例來說，提到"聚合酶"是指一種試劑 或運樣的試劑的混合物，并且提到"該方法"包括提到本領域技術人員已知的等同步驟和方 法等等。
[0025] 除非另外定義，否則本文中所使用的所有技術和科學術語都具有與本發明所屬領 域的技術人員通常所理解的含義相同的含義。本文中所提到的所有出版物都出于描述和公 開出版物中所描述的并且可W與目前描述的發明聯合使用的裝置、組合物、制劑和方法的 目的W引用的方式并入本文中。
[0026] 在提供數值范圍時，應理解，除非上下文另外清楚指出，否則介于該范圍的上限與 下限之間、直至下限單位的十分之一的各居中值和該所述范圍內的任何其他所述值或居中 值都涵蓋在本發明內。根據所述范圍中的任何明確排除的界限，運些較小范圍的上限和下 限可W獨立地包括在所述較小范圍中，并且還涵蓋在本發明內。在所述范圍包括一個或兩 個界限的情況下，排除那些所包括的界限中之任一個或兩個的范圍也包括在本發明中。
[0027] 在W下描述中，闡述了許多具體細節W便更透徹地理解本發明。然而，本發明所屬 領域的技術人員應顯而易見，可在不利于運些具體細節中的一個或多個的情況下實施本發 明。在其他情況下，沒有描述本領域技術人員眾所周知的特征和眾所周知的程序W避免使 本發明不清楚。
[0028] 為了可W更全面地理解本申請，W下闡述了若干定義。所述定義意在涵蓋語法等 同物。
[0029] 如本文中所使用，術語"包含"意在指所述組合物和方法包括所述要素，但不排除 其他。"基本上由……組成"當用于定義組合物和方法時應意指不包括對所述組合物或方法 具有任何必要意義的任何其他要素。"由……組成"應意指排除要求保護的組合物的超過痕 量要素的其他成分和實質性方法步驟。由運些過渡術語中的每一個定義的實施方案在本發 明的范圍內。相應地，希望所述方法和組合物可W包括附加步驟和組分，（包含)或可選地包 括不具有重要意義的步驟和組合物(基本上由其組成）或可選地僅意指所述方法步驟或組 合物（由其組成）。
[0030] 所有數字標示，例如pH值、溫度、時間、濃度和分子量，包括范圍，都是可改變(+ )或 (-)增量0.1的近似值。應理解，盡管未必總是明確闡述，但所有數字標示都前綴有術語 。紛'。術語"錄'還包括精確值"X" W及"X"的微小增量，諸如"X+0. Γ或"X-0. Γ。還應理解， 盡管未必總是明確陳述，但本文中所描述的試劑僅僅是示例性的并且所述試劑的等同物在 本領域中是已知的。
[0031] "組合物"可W包括包含試劑或化合物的任何物質，并且還意在涵蓋試劑或化合物 與其他物質的任何組合，包括載體，例如惰性(例如可檢測的試劑或標記)或活性化合物或 組合物，諸如佐劑、稀釋劑、粘合劑、穩定劑、緩沖劑、鹽、親脂性溶劑、防腐劑、佐劑等等。載 體還包括藥物賦形劑和添加劑，蛋白質、膚、氨基酸、脂質和碳水化合物(例如糖，包括單糖、 二糖、立糖、四糖和寡糖;衍生化糖，諸如糖醇、醒糖酸、醋化糖等等;和多糖或糖聚合物），其 可單獨或組合存在，W重量或體積計單獨或組合構成1%至99.99%。示例性蛋白質賦形劑 包括血清白蛋白，諸如人血清白蛋白化SA)、重組人白蛋白（rHA)、明膠、酪蛋白等等。也可W 在緩沖能力方面起作用的代表性氨基酸/抗體組分包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜堿、組 氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半脫氨酸、賴氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、鄉氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨 酸、阿斯己甜等等。碳水化合物類賦形劑還意欲在本發明的范圍內，其實例包括但不限于單 糖，諸如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖等等;二糖，諸如乳糖、薦糖、海藻 糖、纖維二糖等等;多糖，諸如棉子糖、松立糖、麥芽糊精、葡聚糖、淀粉等等;和糖醇，諸如甘 露醇、木糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨醇(葡糖醇)和肌醇。
[0032] 術語藥學上可接受的載體(或介質）可W與術語生物學上相容的載體或介質互換 使用，是指不僅與治療上施用的細胞和其他試劑相容而且在合理醫學判斷的范圍內、適合 用于與人類和動物的組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他并發癥且與合理的效 益/風險比相稱的試劑、細胞、化合物、材料、組合物和/或劑型。適合用于本發明的藥學上可 接受的載體包括液體、半固體(例如凝膠)和固體物質（例如如本領域中已知和本文中更詳 細描述的細胞支架和基質、管板和其他運類材料）。運些半固體和固體材料可W經過設計W 便抵抗在體內降解(非生物可降解），或其可W經過設計W便在體內降解(生物可降解、生物 可侵蝕）。生物可降解材料還可W是生物可再吸收的或生物可吸收的，即，其可W溶解并且 被吸收到體液中（水溶性移植物是一個實例），或被降解并且最終通過轉化成其他物質或通 過天然途徑分解并消除而從體內消除。
[0033] 如本文中所使用，術語"患者"或"受試者"意指動物、哺乳動物或更進一步指人類 患者。僅出于說明的目的，哺乳動物包括但不限于人類、猿、鼠類、牛、馬、豬或綿羊。
[0034] 如本文中所使用，術語"寡核巧酸"或"多核巧酸"是指包含脫氧核糖核巧酸、核糖 核巧酸或其任何組合的短聚合物。寡核巧酸一般是至少約10、15、20、25、30、40、50、60、70、 80、90、100或更多個核巧酸長。寡核巧酸可W用作引物或探針。
[0035] 術語"氨基酸"是指天然存在的和合成的氨基酸，W及W類似于天然存在的氨基酸 的方式起作用的氨基酸類似物和氨基酸模擬物。天然存在的氨基酸是由遺傳密碼編碼的那 些氨基酸，W及稍后經修飾的那些氨基酸，例如徑基脯氨酸、丫-簇基谷氨酸和0-憐酸絲氨 酸。氨基酸類似物是指具有與天然存在的氨基酸相同的基本化學結構的化合物，即，α碳與 氨、簇基、氨基和R基團結合，例如高絲氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亞諷、甲硫氨酸甲基梳。所 述類似物具有經修飾的R基團（例如正亮氨酸)或經修飾的膚主鏈，但保留與天然存在的氨 基酸相同的基本化學結構。氨基酸模擬物是指具有與氨基酸的一般化學結構不同的結構但 W類似于天然存在的氨基酸的方式起作用的化學化合物。
[0036] 如本文中所使用的術語"分離"是指基本上不含其他物質的分子或者生物或細胞 物質，例如大于70 %或80 %或85 %或90 %或95 %或98 %。在一個方面，術語"分離"是指分別 與天然來源中所存在的且允許處理所述物質W實現W其原生或天然狀態下存在時不可實 現的結果（例如重組復制或通過突變處理）的其他DNA或RNA或蛋白質或多膚或細胞或細胞 器或組織或器官分離的核酸(諸如DNA或RNA)，或蛋白質或多膚，或細胞或細胞器，或組織或 器官。術語"分離"還指基本上不含細胞物質、病毒物質或當通過重組DNA技術產生時的培養 基或當化學合成時的化學前驅物或其他化學物質的核酸或膚。此外，"分離的核酸"意指包 括天然情況下不作為片段存在且在天然狀態下不會發現的核酸片段。術語"分離"在本文中 還用于指與其他細胞蛋白質分離的多膚且意在涵蓋經過純化的和重組的多膚，例如純度大 于70 %或80%或85%或90%或95%、98%或99%。術語"分離"在本文中還用于指與其他細 胞或組織分離的細胞或組織且意在涵蓋培養的和工程改造的細胞或組織。
[0037] "重組"核酸是指通過將正常情況下不一起存在的兩個或更多個序列組合而產生 的人工核酸。在一個實施方案中，其是通過出于諸如抗生素抗性的特定目的而將相關DNA引 入現存生物體DNA，諸如細菌質粒中W編碼或改變不同的性狀而產生。"重組"多膚是來源于 重組核酸的多膚。
[0038] 如本文中所使用，術語"引物"是指足W指導基因轉錄的核酸序列。本發明中還包 括足W使啟動子依賴性基因表達可控制、具有細胞類型特異性、組織特異性或可由外部信 號或試劑誘導的那些啟動子元件。
[0039] 在一些實施方案中，啟動子是可誘導啟動子或離散啟動子。可誘導啟動子可W由 諸如溫度或光的化學或物理條件開啟。化學啟動子的實例包括但不限于醇調節的啟動子、 四環素調節的啟動子、類固醇調節的啟動子、金屬調節的啟動子和發病機理相關啟動子。離 散啟動子的實例可見于例如Wolfe等，Molecular lindocr