抗原結合膚的足跡內。
[0104] 表位可W是構象的或線性的。構象表位是由來自于線性多膚鏈的不同節段的空間 上郵連的氨基酸產生。線性表位是由多膚鏈中的相鄰氨基酸殘基產生的表位。構象和非構 象表位的不同之處可能在于在存在變性溶劑的情況下，與前者而不是后者的結合喪失。
[0105] 在獨特的空間構象下，表位典型地包括至少3個且更通常至少5或8至10個氨基酸。 可W在簡單免疫測定法中驗證識別相同表位的抗體，所述免疫測定法顯示一種抗體阻斷另 一種抗體與祀抗原結合，例如"綁定(binning)"的能力。
[0106] 在一些實施方案中，所述抗體是全長。"全長抗體"在本文中意指組成抗體的天然 生物學形式的結構，包括可變區和恒定區，包括一個或多個如本文中所概述的修飾。
[0107] 可選地，所述抗體可W具有多種結構，包括但不限于抗體片段、單克隆抗體、雙特 異性抗體、微抗體、結構域抗體、合成抗體(在本文中有時被稱為"抗體模擬物"）、嵌合抗體、 人源化抗體、抗體融合物(有時被稱為"抗體綴合物"）和各自相應的片段。
[010引抗體片段
[0109] 在一個實施方案中，所述抗體是抗體片段。特別感興趣的是包含Fc區、Fc融合物和 重鏈恒定區（CH1 -較鏈-C肥-C冊)此外還包括恒定重區融合物的抗體。
[0110] 特定抗體片段包括但不限于（i)由化、VHXL和CH1結構域組成的化b片段；（ii)由 VH和CHI結構域組成的Fd片段；（iii)由單一抗體的化和VH結構域組成的Fv片段；（iv)由單 一可變組成的dAb片段(Ward等，1989，化ture 341:544-546，W全文引用的方式并入）；（V) 分離的CDR區；（Vi)包含兩個連接的化b片段的二價片段F(ab〇2片段；（vii)單鏈Fv分子 (scFv)，其中VH結構域和VL結構域由允許運兩個結構域締合W形成抗原結合位點的膚連接 子連接（Bird 等，1988, Science 242:423-426;Huston 等，1988， Proc.化tl. Acad. Sci.U.S. A. 85:5879-5883，W全文引用的方式并入）；（viii)雙特異性單 鏈Fv(W003/11161，W引用的方式并入在此）；和（ix)通過基因融合構建的多價或多特異性 片段。二抗體"或 "Ξ 抗體"（Tomlinson 等，2000，Methods Enzymol. 326:461-479 ;W094/ 13804 ;Holliger 等，1993，Proc.化 tl. Acad. Sci.U.S. A. 90:6444-6448，全部 W 全文引用的 方式并入）。抗體片段可W經修飾。舉例來說，分子可W通過并入連接VH和化結構域的二硫 橋加 W穩定(Reiter等，1996，NaUire Biotech. 14:1239-1245，W全文引用的方式并入）。 [0川]嵌合和人源化抗體
[0112]在一些實施方案中，支架組分可W是來自于不同的物種的混合物。因而，如果蛋白 質是抗體，則所述抗體可W是嵌合抗體和/或人源化抗體。一般來說，"嵌合抗體"和"人源化 抗體"是指組合了來自多于一個物種的區域的抗體。舉例來說，"嵌合抗體"在傳統上包含來 自于小鼠（或在一些情況下大鼠）的可變區和來自于人類的恒定區。"人源化抗體"一般是指 可變結構域框架區交換為人類抗體中所發現的序列的非人類抗體。一般來說，在人源化抗 體中，除了CDRW外的整個抗體是由人類來源的多核巧酸編碼，或除了其CDR內W外與此種 抗體同一。將CDR(其中一些或全部是由起源于非人類生物體的核酸編碼)移植到人類抗體 可變區的β片框架中W產生抗體，其特異性由移植的CDR決定。所述抗體的產生描述于例如 W 下文獻中：W092/11018; Jones ,1986,Nature 321:522-525 ;Verhoeyen等，1988， Science239:1534-1536,所述文獻W全文引用的方式并入。通常需要選定的受體框架殘基 至相應的供體殘基的"回復突變重新獲得初始移植構建體所喪失的親和力(美國專利號 5,530，101;美國專利號5,585,089;美國專利號5,693,761;美國專利號5,693,762;美國專 利號6，180,370;美國專利號5,859,205;美國專利號5,821，337;美國專利號6,054,297;美 國專利號6，407，213，所有專利都W引用的方式并入）。人源化抗體最適宜還將包含免疫球 蛋白恒定區（典型地為人類免疫球蛋白恒定區）的至少一部分，且因此典型地將包含人類化 區。還可W使用具有經過基因工程改造的免疫系統的小鼠來產生人源化抗體。Roque等， 2004，Biotechnol. Prog. 20:639-654，所述文獻W全文引用的方式并入。用于人源化和重構 非人類抗體的多種技術和方法在本領域中是眾所周知的。（參見Tsurushita和Vasquez， 2004,Humanization of Monoclonal Antibodies,Molecular Biology of B Cells,533- 545，Elsevier Science(USA)和其中所引用的參考文獻，所述文獻全部W全文引用的方式 并入）。人源化方法包括但不限于W下文獻中所描述的方法:Jones等，1986,化ture 321: 522-525 ;Riechmann等，1988，化ture 332: 323-329 ;Ve;rhoeyen等，1988，Science，239 : 1534-1536;Queen等，1989，Proc 化tl Acad Sci'USA 86:10029-33;He等，1998， J. Immunol. 160:1029-1035 ;&;rte;r等，1992, Proc 化tl Acad Sci USA 89:4285-9 ;Pres1:a 等，1997，(Mincer Res. 57(20) :4593-9;Gorman等，1991 'Proc.Natl .Acad. Sci .USA88:4181- 4185;0'Connor等，1998，Protein Eng 11:321-8,所述文獻全部W全文引用的方式并入。降 低非人類抗體可變區的免疫原性的人源化或其他方法可W包括表面重建法，如例如 Roguska等，1994，Proc.化11. Acad. Sci . USA 91:969-973中所描述，所述文獻W全文引用的 方式并入。在一個實施方案中，親本抗體已進行了親和力成熟，如本領域中已知。基于結構 的方法可W用于人源化和親和力成熟，舉例來說，如美國序列號11/004,590中所描述。基于 選擇的方法可W用于對抗體可變區進行人源化和/或親和力成熟，包括但不限于W下文獻 中所描述的方法:Wu 等，1999, J. Mol. Biol. 294:151-162 ;Baca 等，1997, J. Biol.化 em. 272 (16):10678-10684;Rosok等，1996,J.Biol.Chem.271(37):22611-22618;Rader等，1998， Proc.化tl.Acad.Sci.USA 95:891〇-8915;Krauss等，2003，P;rotein lingineering 16(10): 753-759,所述文獻全部W全文引用的方式并入。其他人源化方法可能包括僅移植CDR的一 部分，包括但不限于W下文獻中所描述的方法：美國序列號09/810,510; Tan等，2002， J. Immunol. 169:1119-1125;De 化 scalis 等，2002, J. Immunol. 169:3076-3084,所述文獻全 部W全文引用的方式并入。
[0113] 在一個實施方案中，所述抗體是微抗體。微抗體是包含與CH3結構域連接的scFv的 最小化抗體樣蛋白質。化等，1996，Cancer Res. 56:3055-3061，該文獻W全文引用的方式并 入。在一些情況下，scFv可W連接于Fc區，并且可W包括一些或整個較鏈區。
[0114] Toso抗體和變體
[011引如本文中所使用，術語"Toso抗體"是指結合Toso或結合Toso配體的任何抗體，包 括包含本文中所描述的任何序列和其變體的抗體。
[0116] 在某些方面，本發明的Toso抗體包括包含如圖1中和W下表1和表2中所提供的CDR 序列的抗體。
[0117] 表1 :Toso抗體的CDR序列-重鏈 [011引
[0119]
[0120]
[0121]
[0122]
[0123]
[0124] 在其他實施方案中，本發明的Toso抗體包含如圖1中所提供的CDR序列的變體。一 般來說，如本文中所描述，變體可W包括任何數目的修飾，只要蛋白質的功能仍存在即可。 也就是說，在利用包含如圖1中所提供的序列的任何抗體的CDR產生的氨基酸變體的情況 下，舉例來說，抗體仍將特異性結合Toso或Toso配體。類似地，舉例來說，如果用化區產生氨 基酸變體，則變異抗體將維持所述抗體的具體應用或適應癥所需的受體結合功能。
[0。5] 然而，一般來說，由于一般利用1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個氨基酸取代，正如通常 發生的那樣，所W目標是利用最少數目的修飾來改變功能。在一些情況下，存在1至5個修 飾，而1至2、1至3和1至4也用于多個實施方案中。
[0126] 在一些實施方案中，在本發明的Toso抗體的一個或多個CDR中進行如圖及表1 和表2中所提供的一個或多個氨基酸修飾。一般來說，任何單一CDR中僅有1或2或3個氨基酸 被取代，并且一般在一組CDR內進行不超過4、5、6、7、8、9或10個變化。然而，應了解，特定抗 體的任何CDR中無取代、1、2或3個取代的任何組合可W獨立地且任選地與任何其他取代組 厶 1=1 〇
[0127] 在一些情況下，CDR中的氨基酸修飾被稱為"親和力成熟"。"親和力成熟"抗體是與 不具有那些變化的親本抗體相比在一個或多個CDR中具有一個或多個變化，由此改善抗體 對抗原的親和力的抗體。在一些情況下，盡管很少，但可能需要降低抗體對其抗原的親和 力，但運一般不是優選的。
[0128] 可W進行親和力成熟W使抗體對抗原的結合親和力與"親本"抗體相比增加至少 約10%至50%-100%-150%或更多或1至5倍。優選的親和力成熟抗體將對祀抗原具有納摩 爾或甚至皮摩爾的親和力。親和力成熟抗體是通過已知的程序來產生。參見例如Marks等， 1992，Biotechnology 10:779-783，其描述了通過可變重鏈(￥^和可變輕鏈(￥〇結構域改 組來進行親和力成熟。CDR和/或框架殘基的隨機誘變描述于例如W下文獻中：Barbas等， 1994，Proc.化t.Acad.Sci，USA91:3809-3813;Shier等，1995，Gene 169:147-155;化Iton 等，1995, J. Immunol. 155:1994-2004; Jackson 等，1995, J. Immunol. 154(7): 3310-9;和 化 wkins 等，1992, J.Mol. Biol. 226:889-896。
[0129] 可選地，可W在本發明抗體的一個或多個CDR中進行"沉默"，例如不顯著改變抗體 對抗原的親和力的氨基酸修飾。運些可能出于多種原因而進行，包括優化表達(如可W對編 碼本發明抗體的核酸進行）。
[0130] 因此，本發明的CDR和抗體的定義內包括變異CDR和抗體；即，本發明的抗體可W在 抗體 3b7、k-2-5、5/7k5、5/7kl、5/7k6、5/l^L24、5/15kL26、5/l^L30、k-4.15、k-4.16、k- 4.18、k-4.20、k-4.17、L-1-13、lR^r3、K3-22、k-2-48、K3-24、5/15L28、5/151cL19、k-5.10、 k-2-42、lR2kr30、Kl、L1、k-2-32a-8.2、k8.6、k8.17 的一個或多個CDR 中包括氨基酸修 飾，其重鏈和輕鏈序列提供于圖1中。另外，氨基酸修飾還可W獨立地且任選地在CDR外的區 域，包括框架區和恒定區中進行。
[0131] 在一些實施方案中，本發明的Toso抗體（在本文中也稱為"抗Toso"或"抗Toso抗 體"）包含變異Fc結構域。如本領域中已知，抗體的化區與許多Fc受體和配體相互作用，從而 賦予被稱為效應功能的一系列重要的功能性能力。運些Fc受體包括但不限于(在人類)中化 丫 RKCD64)，包括同種型Fc 丫 RIa、Fc 丫 Rib和化丫 RIc;Fc 丫 RII (CD32)，包括同種型Fc 丫 RIIa(包括同種異型H131和R131)、化丫 Rllb(包括化丫 RIIb-1和化丫 Rnb-2)和化丫 RIIc; W及化丫 RIII(CD16)，包括同種型Fc 丫 RIIIa(包括同種異型V158和F158,與抗體依賴性細 胞毒性(ADCC)相關）和Fc 丫 RIIIb(包括同種異型Fc 丫 RIIIb-NAl和Fc 丫 RIIIb-NA2)、FcRn (新生兒受體）、Clq(設及補體依賴性細胞毒性(CDC)的補體蛋白）和化化(設及血清半衰期 的新生兒受體）。可W如例如W下文獻中所概述在一個或多個位置上進行合適的修飾:US 2004/013210、US 2005/0054832、US 2006/0024298、US 2006/0121032、US 2006/0235208、 US 2007/0148170、美國專利號6,737,056、美國專利號7,670,600、美國專利號6,086,875， 所有文獻都W全文引用的方式明確并入，且具體來說是能增加與化受體的結合的特定氨基 酸取代。
[0132] 在其他方面，本發明的Toso抗體包含圖1中所提供的任何全長重鏈或輕鏈序列。在 其他實施方案中，本發明的Toso抗體包含具有與圖1中所提供的任何全長重鏈或輕鏈序列 具有約 70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 和 100 %序列同一性的序列。
[0133] 在其他方面，本發明的Toso抗體包含了涵蓋如圖1W及表1和表2中所提供的CDR序 列的共有序列。所述共有序列可W通過比對CDR序列和通過使用可得自公開數據庫的工具 來鑒別。
[0134] 在示例性實施方案中，本發明的Toso抗體包含含有W下共有序列的重鏈CDR1:G- X1-TFS-X2-Y-X3，其中X