1是F、D或Y，X2是N、D或S，且X3是A、G、W或N。
[0135] 在其他實施方案中，本發明的Toso抗體包含含有W下共有序列的重鏈CDR2:I-X1- PSG-X2-T-X3，其中 XI 是S、D或 Y，X2是 G或 D，且X3是 T或 P。
[0136] 在其他實施方案中，本發明的Toso抗體包含含有W下共有序列的輕鏈CDR1:Q-S- X1-S-X2-Y，其中 XI 是V或 I，且X2是S、D或 N。
[0137] 在其他實施方案中，本發明的Toso抗體包含含有W下共有序列的輕鏈CDR3 : QQ- X1-Y-X2-TP-X3-T，其中XI是F、R或S，X2 是N、G、T、S或I，且X3 是L、I、E或 C。
[0138] 如應了解，盡管用于鑒別針對特定蛋白質的抗體的方法在本領域中是已知的，但 并非所述方法中所鑒別的所有抗體都會結合目標蛋白質。因此，本發明的一個方面是鑒別 結合Toso的抗體與不結合Toso的抗體的不同，參見例如圖1的來自于結合Toso的抗體的抗 體重鏈和輕鏈序列，與圖2中的不結合Toso的抗體重鏈和輕鏈序列相對。
[0139] 在其他方面，本發明提供了一種表達載體，其編碼與本文中所描述的任何序列一 致和與圖1中所提供的任何序列一致的抗體或蛋白質。
[0140] 在其他方面，本發明提供了一種制造與本文中所描述的任何序列一致和與圖1中 所提供的任何序列一致的抗體或蛋白質的方法，所述方法包括提供包含編碼該抗體或蛋白 質的核酸的細胞，其中在適合于表達所述抗體或蛋白質的條件下培養所述細胞。
[0141] 在其他方面，本發明提供了一種治療Toso相關疾病的方法，所述方法包括用與本 文中所描述的任何序列一致和與圖1中所提供的任何序列一致的抗體或蛋白質治療有需要 的受試者。
[0142] 在其他方面，本發明的抗體用于多種應用，包括Toso相關疾病的診斷和其治療。
[014引 對Toso抗體的其他修飾
[0144] 除W上概述的任何修飾和變體W外，可W進行其他修飾。舉例來說，分子可W通過 并入連接VH和化結構域的二硫橋加 W穩定（Reiter等，1996,化ture Biotech. 14:1239- 1245,全文且具體來說與分子(包括抗體)的修飾相關的所有教導內容出于所有目的W引用 的方式并入）。另外，可如W下所概述對抗體進行多種共價修飾。
[0145] 抗體的共價修飾包括在本發明的范圍內，且一般但并不總是在翻譯后進行。舉例 來說，通過使抗體的特定氨基酸殘基與能夠與所選側鏈或者N或C末端殘基反應的有機衍生 化劑反應將抗體的若干種類型的共價修飾引入所述分子中。
[0146] 最通常使半脫氨酷殘基與α-面代乙酸醋（和相應的胺），諸如氯乙酸或氯乙酷胺反 應，得到簇甲基或簇酷胺基甲基衍生物。半脫氨酷殘基還可W通過與漠 Ξ氣丙酬、α-漠-β- (5-咪挫基)丙酸、氯乙酷基憐酸醋、Ν-烷基馬來酷亞胺、3-硝基-2-化晚基二硫化物、甲基2- 化晚基二硫化物、對氯隸苯甲酸、2-氯隸基-4-硝基苯酪或氯-7-硝基苯并-2-氧雜-1，3-二 挫等等反應來進行衍生化。
[0147] 另外，半脫氨酸上的修飾特別適用于抗體-藥物綴合物(ADC)應用，如W下進一步 描述。在一些實施方案中，抗體的恒定區可W經過工程改造 W含有一個或多個特別具有"硫 醇反應性"的半脫氨酸，W便允許更具特異性地且更受控制地放置藥物部分。參見例如美國 專利號7，521，541，W全文引用的方式并入本文中。
[0148] 通過在pH 5.5至7.0下與焦碳酸二乙醋反應對組氨酷殘基進行衍生化，因為運種 試劑對組氨酷側鏈具有相對特異性。對漠苯甲酯甲基漠也有用;所述反應優選地在0.1M二 甲腫酸鋼中在抑6.0下進行。
[0149] 使賴氨酷和氨基末端殘基與班巧酸或其他簇酸酢反應。利用運些試劑的衍生化具 有逆轉賴氨酷殘基的電荷的作用。用于衍生化含α-氨基的殘基的其他合適的試劑包括亞氨 酸醋，諸如甲基化晚亞胺甲醋;憐酸化唉醒;化唉醒;氯棚氨化物;Ξ硝基苯橫酸;0-甲基異 脈;2，4-戊二酬;和利用乙醒酸的轉氨酶催化反應。
[0150] 通過與一種或若干種常規試劑反應來修飾精氨酷殘基，其中有苯甲酯甲醒、2,3- 下二酬、1,2-環己二酬和巧Ξ酬。精氨酸殘基的衍生化需要在堿性條件下進行反應，因為存 在高地a的脈官能團。此外，運些試劑可能與賴氨酸基團W及精氨酸ε-氨基反應。
[0151] 可對酪氨酷殘基進行特定修飾，特別感興趣的是通過與芳族重氮化合物或四硝基 甲燒反應將光譜標記引入酪氨酷殘基中。最通常分別使用Ν-乙酷基咪挫和四硝基甲燒來形 成0-乙酷基酪氨酷物質和3-硝基衍生物。使用1251或1311對酪氨酷殘基進行艦化W制備經 過標記的蛋白質W用于放射免疫測定法，W上所描述的氯胺Τ法是合適的。
[0152] 通過與碳化二亞胺(R/ -N = C = N--R/ )反應對簇基側基(天冬氨酷或谷氨酷)進行 選擇性修飾，其中R和R/任選地是不同的烷基，諸如1-環己基-3-(2-嗎嘟基-4-乙基)碳化二 亞胺或1-乙基-3-(4-氮陽離子-4,4-二甲基戊基)碳化二亞胺。此外，通過與錠離子反應將 天冬氨酷和谷氨酷殘基轉化成天冬酷胺酷和谷氨酷胺酷殘基。
[0153] 利用雙官能試劑的衍生化可用于使抗體與水不溶性支撐基質或表面交聯W用于 多種方法W及下文所描述的方法。通常使用的交聯劑包括例如1，1-雙（二疊氮乙酷基)-2- 苯乙燒、戊二醒、N-徑基班巧酷亞胺醋，例如與4-疊氮基水楊酸的醋，同型雙官能亞氨酸醋， 包括二班巧酷亞胺基醋，諸如3,3/-二硫雙(班巧酷亞胺基丙酸醋)和雙官能馬來酷亞胺，諸 如雙-N-馬來酷亞胺基-1,8-辛燒。諸如3-[(對疊氮基苯基)二硫]丙酷胺甲醋的衍生化劑產 生能夠在光的存在下形成交聯的光活化中間物。可選地，諸如漠化氯活化的碳水化合物的 反應性水不溶性基質和美國專利號 3,969,287、3,691，016、4，195，128、4,247,642、4,229， 537和4,330,440中所描述的反應性底物可用于蛋白質固定，所述專利全部W全文引用的方 式并入。
[0154] 谷氨酷胺酷和天冬酷胺酷殘基經常脫去酷胺基而成為相應的谷氨酷和天冬氨酷 殘基。可選地，運些殘基在輕度酸性條件下進行脫酷胺。運些殘基的任一種形式都在本發明 的范圍內。
[0155] 其他修飾包括脯氨酸和賴氨酸的徑基化、絲氨酷或蘇氨酷殘基的徑基的憐酸化、 賴氨酸、精氨酸和組氨酸側鏈的日-氨基的甲基化（T.E. Creighton, Proteins: Structure and Mole州lar P;rope;rties，W.H.Freeman&Co.，San Francisco,第79-86頁[1983]，W全文 引用的方式并入）、N末端胺的乙酷化和任何C末端簇基的酷胺化。
[0156] 另外，如本領域技術人員應了解，標記(包括巧光、酶、磁性、放射性等)可W全部添 加至抗體(W及本發明的其他組合物）。
[0157] 另一種類型的共價修飾是糖基化變化。在另一個實施方案中，本文中所公開的抗 體可W經修飾W包括一種或多種工程改造的糖形。如本文中所使用的"工程改造的糖形"意 指共價連接至抗體的碳水化合物組成，其中所述碳水化合物組成在化學上不同于親本抗體 的碳水化合物組成。工程改造的糖形可用于各種目的，包括但不限于提高或降低效應功能。 [015引工程改造的糖形可W通過本領域中已知的多種方法來產生(Umafta等，1999,化t Biotechnol 17:176-180;Davies等，2001，Biotechnol Bioeng 74:288-294;Shields等， 2002，J Biol Chem277:26733-26740;aiinkawa等，2003,J Biol Chem 278:3466-:3473;US 6,602,684；USSN 10/277,370；USSN 10/113,929；PCX WO 00/61739A1；PCX WO 01/ 29246A1;PCT WO 02/31140Al;PCT WO 02/30954A1，全部W全文引用的方式并入；（ PotelHgen頓技術[Biowa，Inc .，Princeton，NJ]; GlycoMAb駁糖基化工程改造技術 [Glyca;rt BiotechnologyAG，Zii;rich，Switze;rland])。運些技術中有許多是基于控制共價 連接至Fc區的海藻糖基化和/或平分型寡糖的水平，例如通過在各種工程改造或其他生物 體或細胞系（例如Lec-13C冊細胞或大鼠雜交瘤YB2/0細胞）中表達IgG、通過調節設及糖基 化途徑的酶(例如即Τ8[α1，6-海藻糖基轉移酶巧日/或m-4-N-乙酷基葡萄糖氨基轉移酶III [Gn ΤΠΙ])、或通過在已經表達IgG之后修飾碳水化合物。舉例來說，Seattle Genetics的 "糖工程改造的抗體"或"SEA技術"通過添加能抑制在產生期間發生海藻糖基化的經修飾的 糖而起作用；參見例如20090317869, W全文引用的方式并入在此。工程改造的糖形典型地 是指不同的碳水化合物或寡糖;因此抗體可W包括工程改造的糖形。
[0159] 可選地，工程改造的糖形可W指包含不同的碳水化合物或寡糖的IgG變體。如本領 域中已知，糖基化模式可W取決于蛋白質的序列（例如，存在或不存在W下所討論的特定糖 基化氨基酸殘基)或產生蛋白質的宿主細胞或生物體。W下討論特定的表達系統。
[0160] 多膚的糖基化典型地是經N連接或經0連接。N連接是指碳水化合物部分連接于天 冬酷胺殘基的側鏈。Ξ膚序列天冬酷胺-X-絲氨酸和天冬酷胺-X-蘇氨酸(其中X為除脯氨酸 外的任何氨基酸)是用于碳水化合物部分至天冬酷胺側鏈的酶連接的識別序列。因此，多膚 中的運些Ξ膚序列中的任一者的存在產生了潛在糖基化位點。經0連接的糖基化是指糖N- 乙酷基半乳糖胺、半乳糖或木糖之一連接至徑基氨基酸，最常見的是絲氨酸或蘇氨酸，但也 可W使用5-徑基脯氨酸或5-徑基賴氨酸。
[0161] 糖基化位點至抗體的添加宜通過改變氨基酸序列W使其含有上述Ξ膚序列中的 一個或多個來實現(對于經N連接的糖基化位點）。所述改變還可W通過將一個或多個絲氨 酸或蘇氨酸殘基添加至起始序列或者通過W-個或多個絲氨酸或蘇氨酸殘基取代來進行 (對于經0連接的糖基化位點）。為方便起見，抗體氨基酸序列優選地通過DNA層面上的變化 來改變，尤其是通過使編碼祀多膚的DNA在預選的堿基處突變W使得產生將翻譯成所需氨 基酸的密碼子。
[0162] 增加抗體上的碳水化合物部分的數目的另一種手段是糖巧與蛋白質的化學或酶 促偶聯。運些程序的有利之處在于其不需要在宿主細胞中產生具有糖化能力W用于N連接 或0連接的糖基化的蛋白質。取決于所使用的偶聯模式，糖可W連接于(a)精氨酸和組氨酸； (b)游離簇基；（C)游離硫氨基，諸如半脫氨酸的硫氨基；（d)游離徑基，諸如絲氨酸、蘇氨酸 或徑基脯氨酸的徑基；（e)芳族殘基，諸如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的芳族殘基;或(f)谷 氨酷胺的酷胺基。運些方法描述于W0 87/05 330W及Aplin和Wriston，1981，CRC Crit.Rev.Biochem.，第259-306頁中，兩者W全文引用的方式并入。
[0163] 去除起始抗體上所存在的碳水化合物部分(例如翻譯后）可W用化學或酶促方式 實現。化學去糖基化需要使蛋白質暴露于化合物Ξ氣甲橫酸或等效化合物。運種處理導致 除連接糖(N-乙酷基葡萄糖胺或N-乙酷基半乳糖胺）W外的大部分或所有糖裂解，而留下多 膚完好無損。化學去糖基化由Hakimuddin等，1987，Arch. Biochem. Bio地ys. 259:52及Edge 等，1981，411曰1.81〇油6111.118:131描述，運兩者^全文引用的方式并入。多膚上的碳水化合 物部分的酶促裂解可W通過如化otakura等，1987，Meth. Enzymol. 138:350所描述使用各種 內切糖巧酶和外切糖巧酶來實現，該文獻W全文引用的方式并入。可W通過如Duskin等， 1982, J.Biol. Chem. 257:3105所描述使用化合物衣霉素來防止潛在糖基化位點處的糖基 化，該文獻W全文引用的方式并入。衣霉素阻斷蛋白質-N-糖巧鍵聯的形成。
[0164] 抗體的另一種類型的共價修飾包括用例如得自于化ktar化erapeutics的2005- 2006陽G Ca化log(可在化ktar網站獲得）美國專利號4,640,835、4,496,689、4,301，144、4， 670,417、4,791，192或4，179,337中所闡述的方式將抗體連接于各種非蛋白質聚合物，包括 但不限于各種多元醇，諸如聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧化締，所述文獻全部W全文引用的方 式并入。另外，如本領域中已知，氨基酸取代可W在抗體內的各種位置上進行W促進諸如 PEG的聚合物的添加。參見例如美國公布號2005/0114037A1，其W全文引用的方式并入。 巧1巧]III.調節Toso活性的方法
[0166] 在一個方面，本發明設及調節Toso活性的方法。在一個實施方案中，調節Toso活性 的方法包括抑制Toso活性。在其他實施方案中，調節Toso活性的方法包括增加 Toso活性。
[0167] 在一些實施方案中，本發明的方法包括直接調節Toso活性。在示例性實施方案中， 所述方法包括應用可結合To S 0的試劑，諸如抗體。
[0168] 在其他實施方案中，通過諸多機制的組合來調節Toso活性，例如通過施用包含能 結合Toso的試劑的組合物與包含能結合Toso的同源配體的試劑的組合物或與能結合Toso 的第二試劑的組合。在一個示例性實施方案中，所述組合可W包括但不限于Toso抗體和可 溶性Toso蛋白，諸如2013年3月14日提交的USSN 13/831,031中所描述的可溶性Toso蛋白， 該文獻全文且特別是與可溶性Toso蛋白有關的任何公開內容、權利要求、附圖或其他教導 內容出于所有目的W引用的方式并入在此。
[0169] 如應了解，調節Toso活性的方法可W包括使用本文中所描述的任何組合物的任何 組合，包括如本文中所描述的包含SEQ ID NO. 1-62中的任何一個或多個W及其任何變體或 修飾的抗體。
[0170] V.治療病癥的方法
[0171] 在一個方面且根據任何上述內容，本發明提供了通過用調節Toso活性的組合物治 療有需要的受試者來治