刺參雜交育種中種參的選擇方法
【專利摘要】本發明公開了刺參雜交育種中種參的選擇方法，包括如下步驟：（1）采捕并篩選優良種參；（2）篩選出的種參放入蓄養池蓄養后，通過控制種參密度、水溫和水質進行種參的促熟培育；（3）對開始進入繁殖期的種參進行小產實驗，刺激種參排精、排卵，鑒別雌雄，并同時抑制其大量排放，將雌雄個體置于不同的培育池中分別培育；（4）重新培養種參兩天，于第三天根據需要定量選擇雌雄個體，分別置于容器中使其大量排放，獲得獨立的精液及卵子；（5）雜交育種或家系培育。本發明所述方法既提高了卵的受精率，減少了大規模育苗生產中種參的浪費，又提高了受精率的雜交率，避免了同一品系刺參精子、卵子的結合，為刺參雜交選育提供了技術支持。
【專利說明】刺參雜交育種中種參的選擇方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種刺參雜交育種中種參的選擇方法。
【背景技術】
[0002]刺參因其營養價值高而名列“海產八珍”之首，隨著育苗技術的突破，刺參養殖業迅猛發展，現已發展成為山東省海水養殖單品種產值最高的種類。由于對其不同性狀的需求，各大科研院校及生產單位利用生物技術手段，培養出具有“多刺”、“耐高溫”等優良性狀的刺參，但在選育過程中也遇到了一些問題。
[0003]刺參因外觀大致相同，肉眼難以分辨雌雄，而在進行雜交育種、建立家系培育時又需要單個雌雄個體，且精液與卵子不能無計劃混合，這就導致在進行試驗時，需要準備幾倍乃至十幾倍的種參，進行蓄養、促熟，排放時，每個容器放置一頭種參，以大量人員觀察種參的排放情況，以鑒別雌雄，同時進行實驗。此舉的弊端在于因事先無法判斷雌雄，從而造成大量種參的浪費，消耗了大量人力物力。并且由于工作量大、人員多，常常忙中出錯，而種參排放精卵的不同步性，又常常導致實驗無法順利進行。
【發明內容】
[0004]本發明要解決的技術問題是提供一種刺參雜交育種中種參的選擇方法，所述方法旨在通過采取預先使種參小產的方法，有效地挑選種參的雌雄個體，再采用物理方法抑制精、卵排放；待進行實驗時，已分開的雌雄個體分別單獨排放精、卵，此時可有針對性地進行雜交或家系培育，從而解決傳統育種方式存在的弊端。
[0005]一種刺參雜交育種中種參的選擇方法，包括如下步驟:
[0006]( I)采捕并篩選優良種參；
[0007](2)篩選出的種參放入蓄養池蓄養一段時間后，通過控制種參密度、水溫和水質進行種參的促熟培育；
[0008](3)對開始進入繁殖期的種參進行小產實驗，刺激種參排精、排卵，鑒別雌雄，并同時抑制其大量排放，將雌雄個體置于不同的培育池中分別培育；
[0009](4)重新培育種參兩天，于第三天根據需要定量選擇雌雄個體，分別置于容器中使其大量排放，獲得獨立的精液及卵子；
[0010](5)雜交育種或家系培育。
[0011]本發明所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其中步驟(I)具體為:
[0012]采捕:于每年的陽歷11月份，當自然海區的海水水溫達到10_12°C時，在野生刺參的優良棲息環境中進行采捕；所述優良棲息環境海區的水深在5-10m，底質為沙泥和礫石
底，海藻資源豐富；
[0013]篩選:對種參進行種質質量檢測，篩選出身體健壯、活力好、無疾病、無損傷，體型呈圓筒形、黃瓜狀、背面稍隆起，腹面平坦、管足密集，參齡3年以上、體重250g以上的種參。
[0014]本發明所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其中步驟(2)中的蓄養和促熟培育過程具體為:
[0015]蓄養:將篩選出的優良種參置于蓄養池中蓄養，密度為15-20頭/m3，蓄養池內的溶氧濃度為5-8mg/ml ；
[0016]促熟培育:采捕的種參轉移至培育池，以自然水溫蓄養，陰歷I月中旬水溫一般在2-30C，保持2-3d，此后以1°C /d的速率開始升溫，上升至6°C，恒溫培育6_8d，再以0.5°C /d的速率上升至10°C，恒溫培育6-8d，繼續以0.50C /d的速率上升至15°C后恒溫待產。
[0017]本發明所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其中所述促熟培育過程中每日換水1-3次，每次換水量為池水的40-60%，所換的水是漲潮期間的優質海水，并經過濾砂處理；
[0018]促熟過程中，投喂粉狀飼料及海泥的混合物，重量比為飼料:海泥=1:6_8，其中所述飼料投喂量占池中種參重量的3-5%。
[0019]本發明所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其中所述步驟(3)具體為:當種參出現產卵征兆時，進行小產實驗:
[0020]A.將培育池內的海水放空，對種參進行陰干刺激l_2h ;
[0021]B.將種參集中到幾個網箱內，種參鋪滿網箱底部即可，網箱放置在空池中，然后向培育池內注入新鮮海水，使網箱中的種參感受到水流的刺激，水流速度控制在1-1.5米/秒，流水刺激0.5-1小時；
[0022]C.將培育池內的水溫控制在21_22°C，待產；
[0023]小產實驗刺激種參排精、產卵，當發現有排放現象，迅速鑒別雌雄，并將雌雄個體的種參分別揀入兩個不同的培育池中，并在當晚在所述兩個培育池上方以200W燈泡照射，同時將池水溫度降至15-17°C，抑制種參繼續排放排精卵。
[0024]本發明所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其中所述產卵征兆為:多頭種參集中在池角；部分種參快速向池壁水表層處移動；軀體上半部離開池壁，不停地搖擺；生殖孔封閉，顏色加深。
[0025]本發明所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其中步驟(4)具體為:小產實驗鑒別雌雄后重新培育，在兩天內將兩個培育池的溫度逐漸升至18°C待產；第三天根據需要定量選擇雌雄個體，于18:00-20:00再次通過陰干、升溫、加快水流流速方式進行刺激，然后分別置于單獨容器中使其排放，獲得獨立的精液及卵子。
[0026]本發明所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其中所述陰干、升溫、加快水流流速刺激方法與小產實驗中的刺激方法相同。
[0027]本發明所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其中步驟(5)中雜交育種或家系培育過程中，根據實驗要求有計劃地進行受精，種參產卵受精后，受精卵密度控制在I個/ml，池水溫度控制在21-22°C。
[0028] 本發明刺參雜交育種中種參的選擇方法與現有技術不同之處在于:
[0029]本發明所述方法通過采取預先使種參小產的方法，有效地挑選種參的雌雄個體，再采用物理方法抑制精、卵排放；待進行實驗時，已分開的雌雄個體分別單獨排放精、卵，此時可有針對性地進行雜交或家系培育，從而解決傳統育種方式存在的大量種參浪費，消耗大量人力物力、常常忙中出錯，種參排放精卵的不同步等弊端，且不影響規模化生產，同時可避免因精子過多造成多精受精的現象。在正式雜交育苗生產中，可以有針對性地選擇不同品系不同數量的雌雄種參進行配套雜交育種。這樣既提高了卵的受精率，減少了大規模育苗生產中種參的浪費，又提高了受精率的雜交率，避免了同一品系刺參精子、卵子的結合，為刺參雜交選育提供了技術支持。
【具體實施方式】
[0030]實施例1
[0031]1、采捕與篩選
[0032](I)采捕:每年的陽歷11月份，當自然海區的海水水溫達到10_12°C時，在野生刺參的棲息優良環境中進行采捕，采捕海區的水深在5-10m，底質為沙泥和礫石底，大葉藻、鼠尾藻、馬尾藻等海藻資源豐富；
[0033]潛水員潛水采捕時，需要注意以下事項:
[0034]①一次采捕的數量不能過多，盡可能減少刺激，避免刺參受積壓導致機械損傷；
[0035]②潛水員、操作人員手上或船只、工具等不能接觸油潰；
[0036]③保持船上暫養槽內水質清新，及時換水；
[0037]④采捕的刺參避免強光照射。
[0038](2)篩選:種參采捕后，進行種質質量檢測，主要包括外觀指標(體形、肉刺、步足等)，篩選出身體健壯、活力好、無疾病、無損傷，體型呈圓筒形、黃瓜狀、背面稍隆起，腹面平坦、管足密集，參齡3年以上、體重250g以上的優良種參；
[0039]解剖觀察檢測種參性腺發育是否成熟，如果種參未充分成熟，即便通過陰干、流水、升溫等方法刺激種參也不可能產卵。如達到以下條件，則表明性腺發育已經成熟，可以進行種參的培養:解剖觀察性腺飽滿膨脹，生殖腺各分枝隨發育成熟而逐漸變粗，主分枝直徑成熟時可達1.5-3.0mm,個別的可達3.0mm以上。雌性生殖腺呈桔紅色，卵粒肉眼可見，刺破后可自由散開；雄性生殖腺呈乳黃色或乳白色，刺破后可流出乳白色精漿。顯微鏡下卵黃及細胞質透明，卵粒形狀整齊；個體平均懷卵量達到300~500萬粒,少數個體超過800萬粒。
[0040]2、蓄養及促熟培育
[0041](I)蓄養:將采捕的種參置于蓄養池中進行蓄養，蓄養期間種參在蓄養池內的密度控制在15頭/m3,蓄養池內的溶氧濃度控制在5mg/ml。
[0042](2)促熟培育:于翌年陰歷一月中旬將蓄養的種參放入培育池中，有計劃性地使培育水逐漸升溫，以促進種參的性腺發育，具體為:種參入培育池后水溫控制在2°C，保持2d，此后以1°C /d的速率上升至6°C，恒溫培育6d后，以0.5°C /d的速率上升至10°C，恒溫培育6d，繼續以0.50C /d的速率上升至15°C時恒溫待產。
[0043]促熟過程中每日換水3次，每次換水量為池水的60%，所換的水是海水漲潮期間的優質海水，并且經過濾砂處理。
[0044]促熟過程中，投喂粉狀配合飼料及海泥的混合物，飼料投喂量占池中種參重量的3%，其中配合飼料與海泥按重量比為1:6混合。所述配合飼料的成分以海菜為主，輔以扇貝邊和酵母，所述海菜包括鼠尾藻、馬尾藻和海帶。
[0045]3、對種參進行小產實驗
[0046](I)產卵征兆[0047]根據種參促熟的生物學積溫，采用解剖的方法觀察種參性腺發育情況，當種參的活動出現下述行為時，標志刺參即將產卵:多頭種參集中在池角；部分種參快速向池壁水表層處移動；軀體上半部離開池壁，不停地搖擺；生殖孔封閉，顏色加深。
[0048](2)小產實驗
[0049]對開始進入繁殖期的種參進行小產實驗，具體操作步驟如下:
[0050]①將培育池內海水放空，種參進行陰干刺激Ih ；
[0051]②將培育池(此時也稱作產卵池)內注入新鮮海水，加大海水流動速度，增強水流刺激，水流流速為1.5米/秒，流水刺激I小時；
[0052]③將培育池(產卵池)內的水溫逐步升高至21.5°C,恒溫待產；
[0053]以上述方式刺激種參排精、產卵，當發現有排放現象，迅速鑒別雌雄，將雌雄個體的種參分別揀入不同的兩個培育池中，當晚池子上方以200W燈泡照射，池水溫度降至
16°C，以此抑制種參繼續排放排精卵。
[0054](3)將兩個培育池中的池水溫度在兩天內逐漸升溫至18°C待產，不需投餌；在第三天根據需要定量選擇雌雄個體，于18:00-20:00再次通過陰干、升溫、加快水流流速方式進行刺激，然后分別置于單獨容器中使其排放，一般情況21:00左右種參便會出現大量排放，獲得獨立的精液及卵子。
[0055]所述陰干、升溫、加快水流流速刺激方法與小產實驗中的刺激方法相同。
[0056]4、根據需要進行雜 交育種或家系培育試驗。
[0057]根據實驗要求有計劃地進行受精，種參產卵受精后，受精卵密度控制在I個/ml，池水溫度控制在21.5 °C。
[0058]實施例2
[0059]蓄養密度為20頭/m3，蓄養池內的溶氧濃度為8mg/ml ；
[0060]促熟培育過程的升溫方式具體為:種參入培育池后水溫控制在3°C，保持3d，此后以l°c /d的速率上升至6°C，恒溫培育8d后，以0.50C /d的速率上升至10°C，恒溫培育8d，繼續以0.5°C /d的速率上升至15°C時恒溫待產。促熟過程中每日換水I次，每次換水量為池水的50%，所換的水是海水漲潮期間的優質海水，并且經過濾砂處理。促熟過程中，投喂粉狀飼料及海泥的混合物，飼料投喂量占池中種參重量的5%，其中配合飼料與海泥按重量比為1:8混合。
[0061]小產實驗具體為:①將培育池內海水放空，種參進行陰干刺激2h ;②將種參集中到幾個網箱內，種參鋪滿網箱底部即可，網箱放置在空池中，然后向培育池內注入新鮮海水，使網箱中的種參感受到水流的刺激，水流速度控制在I米/秒，流水刺激0.8小時；③將產卵池內的水溫逐步升高至21°C，待產。
[0062]抑制種參繼續排放排精卵時池水溫度為15°C，雜交育種或家系培育中種參產卵受精后，池水溫度控制在22.5 0C。
[0063]其他同實施例1。
[0064]實施例3
[0065]蓄養密度為18頭/m3，蓄養池內的溶氧濃度為7mg/ml ；
[0066]促熟培育過程的升溫方式具體為:種參入培育池后水溫控制在2°C，保持3d，此后以l°c /d的速率開始升溫，上升至6°C，恒溫培育7d后，以0.5°C /d的速率上升至10°C，恒溫培育7d，繼續以0.5°C /d的速率上升至15°C時恒溫待產。促熟過程中每日換水2次，每次換水量為池水的40%，所換的水是海水漲潮期間的優質海水,并且經過濾砂處理。促熟過程中，投喂粉狀飼料及海泥的混合物，飼料投喂量占池中種參重量的4%，其中飼料與海泥按重量比為1:7混合。
[0067]小產實驗具體為:①將培育池內海水放空，種參進行陰干刺激1.5h ;②將種參集中到幾個網箱內，種參鋪滿網箱底部即可，網箱放置在空池中，然后向培育池內注入新鮮海水，使網箱中的種參感受到水流的刺激，水流速度控制在1.2米/秒，流水刺激0.5小時；
[0068]③將培育池內的水溫逐步升高至22°C，恒溫待產。
[0069]抑制種參繼續排放排精卵時池水溫度為17°C，雜交育種或家系培育中種參產卵受精后，池水溫度控制在22 °C。
[0070]其他同實施例1。[0071]以上所述的實施例僅僅是對本發明的優選實施方式進行描述，并非對本發明的范圍進行限定，在不脫離本發明設計精神的前提下，本領域普通技術人員對本發明的技術方案作出的各種變形和改進，均應落入本發明權利要求書確定的保護范圍內。
【權利要求】
1.刺參雜交育種中種參的選擇方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)采捕并篩選優良種參； (2)篩選出的種參放入蓄養池蓄養后，通過控制種參密度、水溫和水質進行種參的促熟培育； (3)對開始進入繁殖期的種參進行小產實驗，刺激種參排精、排卵，鑒別雌雄，并同時抑制其大量排放，將雌雄個體置于不同的培育池中分別培育； (4)重新培育種參兩天，于第三天根據需要定量選擇雌雄個體，分別置于容器中使其大量排放，獲得獨立的精液及卵子； (5)雜交育種或家系培育。
2.根據權利要求1所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其特征在于:步驟(I)具體為: 采捕:于每年的陽歷11月份，當自然海區的海水水溫達到10-12°c時，在野生刺參的優良棲息環境中進行采捕；所述優良棲息環境海區的水深在5-10m，底質為沙泥和礫石底，海藻資源豐富； 篩選:對種參進行種質質量檢測，篩選出身體健壯、活力好、無疾病、無損傷，體型呈圓筒形、黃瓜狀、背面稍隆起，腹面平坦、管足密集，參齡3年以上、體重250g以上的種參。
3.根據權利要求2所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其特征在于:步驟(2)中的蓄養和促熟培育過程具體為: 蓄養:將篩選出的優良種參置于蓄養池中蓄養，密度為15-20頭/m3，蓄養池內的溶氧濃度為5-8mg/ml ； 促熟培育:采捕的種參轉移至培育池，以自然水溫蓄養，陰歷I月中旬水溫在2-3°C，保持2-3d，此后以1°C /d的速率開始升溫，上升至6°C，恒溫培育6-8d，再以0.5°C /d的速率上升至10°C，恒溫培育6-8d，繼續以0.50C /d的速率上升至15°C后恒溫待產。
4.根據權利要求3所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其特征在于:所述促熟培育過程中每日換水1-3次,每次換水量為池水的40-60%，所換的水是漲潮期間的優質海水，并經過濾砂處理； 促熟過程中，投喂粉狀配合飼料及海泥的混合物，重量比為飼料:海泥=1:6-8，其中所述配合飼料投喂量占池中種參重量的3-5%;所述配合飼料的成分以海菜為主，輔以扇貝邊和酵母，所述海菜包括鼠尾藻、馬尾藻和海帶。
5.根據權利要求1或2或3或4所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其特征在于:所述步驟(3)具體為:當種參出現產卵征兆時，進行小產實驗: A.將培育池內的海水放空，對種參進行陰干刺激l_2h； B.將種參集中到多個網箱內，種參鋪滿網箱底部即可，網箱放置在空池中，然后向培育池內注入新鮮海水，使網箱中的種參感受到水流的刺激，水流速度控制在1-1.5米/秒，流水刺激0.5-1小時； C.將培育池內的水溫控制在21-22°C，待產； 小產實驗刺激種參排精、產卵，當發現有排放現象，迅速鑒別雌雄，并將雌雄個體的種參分別揀入兩個不同的培育池中，并在當晚在所述兩個培育池上方以200W燈泡照射，同時將池水溫度降至15-17°C，抑制種參繼續排放排精卵。
6.根據權利要求5所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其特征在于:所述產卵征兆為:多頭種參集中在池角；部分種參快速向池壁水表層處移動；軀體上半部離開池壁，不停地搖擺；生殖孔封閉，顏色加深。
7.根據權利要求5所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其特征在于:步驟(4)具體為:小產實驗鑒別雌雄后重新培育，在兩天內將兩個培育池的溫度逐漸升至18°C待產；第三天根據需要定量選擇雌雄個體，于18:00-20:00再次通過陰干、升溫、加快水流流速方式進行刺激，然后分別置于單獨容器中使其排放，獲得獨立的精液及卵子。
8.根據權利要求7所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其特征在于:所述陰干、升溫、加快水流流速刺激方法與小產實驗中的刺激方法相同。
9.根據權利要求1所述的刺參雜交育種中種參的選擇方法，其特征在于:步驟(5)中雜交育種或家系培育過程中，根據實驗要求有計劃地進行受精，種參產卵受精后，受精卵密度控制在I個/ml，池水溫 度控制在21.5-22.5°C。
【文檔編號】A01K61/00GK103461224SQ201310322705
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年7月29日 優先權日:2013年7月29日
【發明者】王亮, 鄒士方, 王增東, 梁文恒, 劉永旗, 王靜, 代文匯 申請人:山東安源水產股份有限公司