專利名稱：一種爪哇根結線蟲效應基因Mj-nulg，相關蛋白及應用的制作方法
技術領域：
本發明屬生物基因工程技術領域，具體涉及一種爪哇根結線蟲效應基因相關蛋白及應用。
背景技術：
根結線蟲是一類非常重要的植物寄生線蟲，廣泛分布于世界各地，能侵染超過3000種不同植物。根結線蟲每年造成大概770億美元的經濟損失，隨著作物復種指數的提高和設施農業的發展，根結線蟲的發生和危害將會不斷的加劇。由于根結線蟲的根內寄生、寄主范圍廣泛的特性以及抗根結線蟲種質資源的缺乏限制了化學防治、輪作和抗病育種等
防治方法在控制根結線蟲危害中的應用。因此，尋找其他有效的防治根結線蟲的方法是植物生產所長期面臨的艱巨任務。RNA干擾技術(RNAi)的出現使得開發更為有效的防治根結線蟲的方法成為可能。RNAi能通過靶向抑制根結線蟲特定基因功能而限制根結線蟲侵染、寄生和繁殖因而能高效地減少根結線蟲的危害而且對其他非靶標生物較為安全。RNAi現象最早在秀麗小桿線蟲中發現，隨后在植物、無脊椎動物和脊椎動物中都相繼發現了這種現象。RNAi技術通過dsRNA特異性的降解靶mRNA，影響或抑制該目的基因功能，從而影響該種生物的生長、發育、繁殖甚至能殺死該種生物。該技術相比其他防治方法的最大優點是能定向作用于特定的某種(某類)害蟲而不會影響在該生境中的其他生物。應用農桿菌介導的病毒誘導的基因沉默(VIGS)技術相對于傳統的使用組織培養方法獲得RNAi轉基因植株更加簡單快速，使得我們并不需要通過復雜的組培方法就可快速獲得抗線蟲植株。
發明內容
本發明的目的在于提供一種新的爪哇根結線蟲效應基因Mj-nulg。本發明的另一目的是提供上述爪哇根結線蟲效應基因 的相關蛋白MJ-NULG。本發明的又一目的是提供上述爪哇根結線蟲效應基因的應用。本發明通過以下技術方案實現上述目的
一種爪睡根結線蟲javanica)效應基因其核苷酸序列如SEQID NO: 1 3任意一條所示。其中SEQ ID NO: I為全基因序列(包括5’端非編碼區、3’端非編碼區、內含子和外顯子)，SEQ ID NO: 2為編碼區序列(包括內含子和外顯子)，SEQ ID NO: 3為編碼序列(即cDNA序列，僅為外顯子)。在嚴格條件下與上述爪哇根結線蟲效應基因 雜交且編碼與爪哇根結線蟲寄生相關蛋白的DNA分子，或者與上述爪哇根結線蟲效應基因貧有90%以上同源性且編碼根結線蟲寄生相關蛋白的DNA分子，也在本發明的保護范圍之內。所述嚴格條件為可在0. 1XSSC、0. 1% SDS的溶液中，65°C條件下雜交并洗膜。
一種爪哇根結線蟲效應蛋白MJ-NULG，其氨基酸序列如SEQ ID N0:4所示，或該氨基酸序列經過一個或一個以上氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加并且與爪哇根結線蟲寄生相關的衍生蛋白。為了使爪哇根結線蟲效應蛋白MJ-NULG便于純化，可以在該序列(SEQ ID N0:4)的氨基末端或羧基末端連接上特定的標簽，所述特定標簽為5飛個精氨酸，或2 12個組氨酸，或如SEQ ID NO: 5所示序列，或如SEQ ID NO:6所示序列，或如SEQ ID NO: 7所示序列。如表I，但不限于表I :
權利要求
1.一種爪哇根結線蟲效應基因 ，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID N0:f3任意一條所示。
2.一種爪哇根結線蟲效應蛋白MJ-NULG，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID N0:4所示。
3.在嚴格條件下與權利要求I所述爪哇根結線蟲效應基因 雜交且編碼與爪哇根結線蟲寄生相關蛋白的DNA分子。
4.與權利要求I所述爪哇根結線蟲效應基因 具有90%以上同源性且編碼爪哇根結線蟲寄生相關蛋白的DNA分子。
5.一種爪哇根結線蟲效應蛋白MJ-NULG，其特征在于在SEQ ID N0:4所示氨基酸序列 的氨基末端或羧基末端連接有特定標簽，所述特定標簽為5飛個精氨酸，或2 12個組氨酸，或如SEQ ID NO:5所示序列，或如SEQ ID NO:6所示序列，或如SEQ ID NO:7所示序列。
6.—種重組表達載體,其特征在于由出發載體的多克隆位點插入權利要求I所述爪睡根結線蟲效應基因 ，或該基因的部分外顯子片段如SEQ ID NO:8 10任一所示序列構建而成。
7.—種重組基因表達盒，其特征在于含有權利要求I所述爪哇根結線蟲效應基因Mj~nulg0
8.轉基因細胞系，其特征在于含有權利要求I所述爪哇根結線蟲效應基因
9.一種重組菌，其特征在于含有權利要求I所述爪哇根結線蟲效應基因
10.權利要求I所述爪哇根結線蟲效應基因 在制備轉基因植物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種爪哇根結線蟲效應基因Mj-nulg，相關蛋白及應用，屬于生物基因工程技術領域。本發明的效應基因Mj-nulg核苷酸序列如SEQIDNO:1-3所示，其相關蛋白MJ-NULG的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示。本發明用qPCR研究基因在線蟲不同階段表達情況；用免疫定位方法證明MJ-NULG蛋白在線蟲背食道腺并被分泌到植物細胞中，定位在細胞核上；設計該基因過表達載體，轉化到擬南芥中，發現轉基因擬南芥更易感染根結線蟲；設計病毒誘導重組RNAi載體，將該載體導入植物，在植物中產生Mj-nulg的dsRNA，該植株能顯著抑制根結線蟲的寄生。通過本發明可獲得強抗根結線蟲的植物。
文檔編號C12N15/63GK102653763SQ20121012581
公開日2012年9月5日 申請日期2012年4月26日 優先權日2012年4月26日
發明者卓侃, 廖金鈴, 林柏榮 申請人:華南農業大學