一種高產糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種高產糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及其在白酒釀造中的應用，所述亮白曲霉已于2014年3月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號是CGMCC No.8900。所述菌株能夠同時高產糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，屬于微生物和發酵工程領域。經固態制曲，可以高產糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，增加白酒釀造中淀粉和蛋白的利用率，使用該霉菌可以提高白酒的出酒率并保持較好的風味。CGMCC No. 89002014.03.07
【專利說明】一種高產糖化酶、ct -淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及 其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種亮白曲霉及其應用，特別是一種利用亮白曲霉在提高釀酒過程中 酒精產率工藝中的應用。
【背景技術】
[0002] 細菌、酵母和霉菌是中國白酒釀造過程中的三大類微生物，其中霉菌能夠分泌多 種酶類并降解淀粉、蛋白質等大分子物質，為細菌和酵母的生長和發酵提供物質基礎。霉菌 同時也能夠分泌一些酯化酶和代謝產物，對中國白酒的風味也有一定的影響。中國白酒傳 統釀造過程中是開放式生產，過程中涉及到復雜的霉菌群落；復雜的霉菌群落既能產生了 豐富的酶系，對白酒釀造有著正面貢獻，但一些環境中有害的霉菌也可能被涉及，給白酒產 品的質量帶來了潛在的風險。
[0003] 純種霉菌的篩選和使用已經是行業的一種趨勢，純種霉菌麩曲能夠代替部分大 曲，提高白酒生產的出酒率，控制有害微生物的潛在危險。目前白酒生產中常用的霉菌有河 內白曲霉（Aspergillus kawachii)、米曲霉（Aspergillus oryzae)等，這些篩選的霉菌具 有較高的糖化力，提高了出酒率。但是傳統篩選麩曲霉菌只以糖化酶為指標，所得菌株酶系 較為單一，生產的麩曲白酒的酒質比大曲酒差，通常只能用于生產中低端白酒。
[0004] 糖化酶、α -淀粉酶都能夠降解淀粉，他們的含量和比例會控制發酵進程的速度， 控制發酵溫度過快上升，使得整個微生物群落正常演變，保證白酒發酵的正常進行。白酒釀 造的主要原料高粱的成分除了淀粉之外，蛋白質也是一個重要的成分（8% -10% )，是酵母 細菌生長的重要物質基礎，也是形成風味物質的重要前體。同時，中國白酒發酵體系是一個 偏酸的環境，在發酵結束的時候pH最低能夠達到3. 5,因此酸性蛋白酶也在白酒發酵過程 中起到了重要的作用。
【發明內容】
[0005] 本發明所要解決的技術問題是提供一種高產糖化酶、α -淀粉酶和酸性蛋白酶的 亮白曲霉及其在釀造白酒中的應用，以適應白酒發酵的過程，提高酒精的產率。
[0006] 本發明所得亮白曲霉的ITS rDNA序列，在GenBank中進行Blast對比確定其種屬， 與其同源序列最高的菌株分別為（Aspergillus candidus)，相似度為98%和98%。
[0007] 所述亮白曲霉在PDA培養基上生長，菌落開始為白色，圓形，向四周擴散，然后從 菌落中間開始產生白色孢子，最后整個菌落全部變成白色。菌絲白色，纖細，分生孢子；菌落 背面略帶黃色。本菌株適應性很強，孢子在PDA培養及平板上30°C萌發，培養3d，菌落直徑 為4.2_6.5cm。上述亮白曲霉（Aspergillus candidus)于2014年3月7日保藏至中國微 生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC No. 8900,保藏地址為北京 市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所。
[0008] 本發明菌株高產糖化酶、α -淀粉酶和酸性蛋白酶，其發酵工藝為：
[0009] 種子（PDA)培養基：馬鈴薯先洗凈去皮，再稱取200g馬鈴薯切成小塊，加水煮爛 (煮沸20-30min)用八層紗布過濾，加20g瓊脂，葡萄糖20g，再補足水分至1000毫升，121 °C 滅菌20min冷卻后貯存備用；
[0010] 發酵培養基：稱取新鮮麩皮（或者其他粉碎原料）并加水，使水分含量約為50%， 121°C 滅菌 20min ;
[0011] 種子培養方法：挑取一環亮白曲霉的孢子，接種于種子培養基斜面，30°C培養 3d-7d ；
[0012] 發酵培養方法：250ml錐形瓶裝培養基20g，將活化的孢子懸浮液接入滅過菌的發 酵培養基并使最終濃度為5 X 106個/g麩皮，30°C靜止培養48h-72h。
[0013] 測定酶活如下：
[0014]
【權利要求】
1. 一種高產糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉（Aspergillus candidus), 于2014年3月7日保藏于微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.8900〇
2. 權利要求1所述亮白曲霉（Aspergillus candidus)在白酒釀造中的應用。
3. 權利要求2所述的應用，其特征在于所述亮白曲霉高產糖化酶、α -淀粉酶和酸性蛋 白酶，能增加白酒釀造中淀粉和蛋白的利用率，改善出酒率。
4. 權利要求2或3所述的應用，其特征在于可以將活化的亮白曲霉孢子懸浮液接種至 固體培養基，接種濃度為1-5 % w/w，在25-35°C環境中固態發酵32-72h，制成固態菌制劑， 再將固態菌制劑作為種子接種到曲池中進行擴大培養24-72h，二級種子按照5-20 % w/w接 種量加入白酒生產中。
5. 權利要求2所述的應用，其特征在于可以將活化的亮白曲霉孢子懸浮液接種于滅菌 的液態培養基，接種濃度為1-5% w/w，25-35°C培養24h-72h，制成液態菌制劑，再將液態菌 制劑作為種子接種到曲池中進行擴大培養24-72h，二級種子按照5-20% w/w接種量加入白 酒生產中。
6. 權利要求4所述的應用，其特征在于，固態原料培養基，原料包括高粱、麩皮、小麥、 大麥、豌豆、大米、玉米、糯米、青稞或其組合。
7. 權利要求5所述的液體培養基，其特征在于，液態培養基為原料提取物，原料包括： 高粱、麩皮、小麥、大麥、豌豆、大米、玉米、糯米、青稞或其組合。
8. 權利要求2所述的應用，其特征在于所述亮白曲霉以固態接種或者液態接種的形式 加入。
9. 權利要求2所述的應用，其特征在于所述亮白曲霉可以將白酒出酒率從20-28%提 高到25-33%，淀粉利用率提高3% -5%，并保持酒的風味。
【文檔編號】C12N1/14GK104250618SQ201410187376
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2014年5月5日 優先權日:2014年5月5日
【發明者】徐巖, 吳群 申請人:江南大學