一株產幾丁質酶的枯草芽孢桿菌及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明的目的是提供一株產幾丁質酶的枯草芽孢桿菌其應用，所述產幾丁質酶枯草芽孢桿菌經等離子體誘變獲得，具有更高的幾丁質酶酶活力和蛋白酶酶活力，可作為發酵劑、益生菌和防腐劑，廣泛應用于酶制劑和食品工業。本發明的枯草芽孢桿菌的保藏編號為CGMCC No.9166。本發明的菌株具有較高的幾丁質酶酶活力和蛋白酶酶活力，且該菌株營養需要簡單，繁殖力強，可作為發酵劑、益生菌和防腐劑，應用前景廣闊。CGMCC No.91662014.05.14
【專利說明】-株產幾T質酶的枯草芽抱桿菌及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于微生物應用【技術領域】，具體涉及一株產幾下質酶枯草芽抱桿菌及其應 用。
【背景技術】
[0002] 幾下質酶（Chitinase)能催化降解甲殼素（幾下質）生成幾下寡糖，幾下寡糖具 有水溶性，是甲殼素、殼聚糖產品的升級產品，對腐敗菌的抑制效果顯著，是性能優良的天 然食品防腐保鮮劑。同時，幾下寡糖還具有能促進有益微生物（如雙歧桿菌、乳酸菌）的生 長，改善腸道微生物菌群，提高機體免疫力，促進肝脾抗體形成、促進巧及礦物質的吸收、降 血脂、去除氧負離子自由基延緩衰老、抑制腫瘤細胞生長等功能，可應用于醫藥、功能性食 品、化妝品等領域。
[0003] 我國有廣闊的海岸線和大面積水產養殖基地，幾下質資源豐富，但開發利用率低， 生產水平不高，產品檔次低，造成資料浪費的同時也造成了環境污染。而生產幾下寡糖就 是一條利用幾下質開發高附加值產品的一條重要途徑。目前，幾下寡糖的生產主要有化學 降解法和生物酶法兩種方法；但化學降解法成本高，不易控制，產物聚合度較低（生物活性 低）且多為單糖，應用價值不高，而且會帶來的嚴重的酸污染，其使用受到嚴格限制。而生 物酶法具有催化效率高，反應溫，具有特異性，易控制，可生成不同聚合度的幾下寡糖，具有 良好的應用前景，但一個限定因素就是需要具有高幾下質酶酶活性的微生物。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供一株產幾下質酶的枯草芽抱桿菌其應用，所述產幾下質酶枯 草芽抱桿菌經等離子體誘變獲得，具有更高的幾下質酶酶活力和蛋白酶酶活力，可作為發 酵劑、益生菌和防腐劑，廣泛應用于酶制劑和食品工業。
[0005] 本發明一方面提供了一株枯草芽抱桿菌炬acillus subtilis)PLall9,于2014年 5月14日保藏于北京市朝陽區北辰西路1號院3號的的中國微生物菌種保藏管理委員會普 通微生物中也，保藏編號為CGMCC No. 9166。
[0006] 本發明的枯草芽抱桿菌可應用于酶制劑、菌制劑、防腐劑和制備幾下寡糖。
[0007] 本發明的另一方面提供了含有上述枯草芽抱桿菌的郵頭醬。
[0008] 所述的郵頭醬，制備過程為；郵頭清洗打漿，接入枯草芽抱桿菌化all9,經半固態 發酵，加入香辛料，制得郵頭醬成品。
[0009] 上述枯草芽抱桿菌可作為益生菌生產菌制劑，制備過程為：郵殼烘干，粉碎打漿， 接入枯草芽抱桿菌PLall9,經半固態發酵，加入奶粉和藏糖，制得枯草芽抱桿菌菌制劑。
[0010] 本發明還提供一種幾下質酶的制備方法，是用上述的枯草芽抱桿菌化all9接種 到培養基中發酵后制備的；其中培養基組成如下：膠體幾下質12g/L、豆稍9. 5g/L、蛋白腺 5g/L、酵母膏 4g/L、KH2PO4O. 3g/L、葡萄糖 0. 5g/L、M拆〇4 ? 7&0 0. 6g/L g/L、FeS〇4 ? 7&0 0. Olg/L、ZnS〇4〇. Olg/L。最佳發酵條件為；溫度為35°C、轉速為180r/min、接種量為4%、 初始抑為7. O、發酵時間為4她。
[0011] 本發明經等離子體誘變篩選到一株枯草芽抱桿菌化all9。該菌株具有較高的幾下 質酶酶活力和蛋白酶酶活力，且該菌株營養需要簡單，繁殖力強，可作為發酵劑、益生菌和 防腐劑，應用前景廣闊。
【具體實施方式】
[0012] 下面結合實施例對本發明進行詳細的描述。
[0013] 實施例1 ;枯草芽抱桿菌化al 19的選育及其產酶條件優化
[0014] 1、出發菌株的枯草芽抱桿菌篩選自郵頭富集過的±壤，經青島農業大學食品微生 物實驗室鑒定、保藏，具有產幾下質酶和蛋白酶能力。
[001引 2、培養基
[001引 （1)富集培養基（g/L);牛肉膏3,蛋白腺10,化Cl 5,抑7.0。
[0017]似分離培養基（g/L);膠體幾下質 2. 5, M拆〇4 ? 7&0 0. 5, ^HPO"皿2?〇4〇. 3， FeS〇4*7H2〇 0. 01，（畑4)25〇43,瓊脂 20。抑 7. 0，12rC，滅菌 20min。
[001引 做搖瓶篩選培養基（產酶培養基）（g/L);膠體幾下質10,豆稍10,蛋白腺5,酵 母膏 5, K2HPO4O. 7, KH2PO4O. 3,葡萄糖 1，M拆04 ? 7&00. 5, FeS04 ? 7&0 0. 01，ZnS040. 01。抑 7. 0,121°C，滅菌 20min0
[0019] 3、等離子體誘變選育
[0020] 取出發菌株枯草芽抱桿菌，加入富集培養基，37C培養2化，梯度稀釋至IO6C化/ 血，常溫等離子體誘變處理lOmin，將誘變后菌液涂布于分離培養基，于37C培養72h，挑 取菌落典型且圈徑比較大菌株，進行重復分離純化，本次實驗共獲得12株菌株，并分別依 次命名為PLallU PLall2、化all3至化al22。將純化得到的菌株接種到搖瓶篩選培養基， 測試各菌株在37°C、180r/min培養72h時上述12株菌的幾了質酶和蛋白酶活力，其中菌 株化all9的幾了質酶酶活力最高，達到1. 92 + 0. 02U/mU且兼具產蛋白酶，蛋白酶活力 95. 6抓/mL (表 1)。
[0021] 表1 ;12株菌在7化幾下質酶及蛋白酶酶活力實驗結果
[0022]
【權利要求】
1. 一株枯草芽孢桿菌，其特征在于，所述的枯草芽孢桿菌的保藏編號為CGMCC No.9166。
2. 權利要求1所述的枯草芽孢桿菌在制備于酶制劑、菌制劑、防腐劑或制備幾丁寡糖 中的應用。
3. -種蝦頭醬，其特征在于，所述的蝦頭醬的制備過程如下：將蝦頭清洗打漿，接入權 利要求1所述的枯草芽孢桿菌，經半固態發酵，加入香辛料，制得蝦頭醬成品。
4. 一種菌制劑，其特征在于，所述的菌制劑的制備過程如下：將蝦殼烘干，粉碎打漿， 接入權利要求1所述的枯草芽孢桿菌，經半固態發酵，加入奶粉和蔗糖，制得枯草芽孢桿菌 囷制劑。
5. -種幾丁質酶的制備方法，其特征在于，所述的制備方法，是用權利要求1所述的枯 草芽孢桿菌接種到培養基中發酵后制備的；其中培養基組成如下：膠體幾丁質12g/L、蛋白 胨 5g/L、酵母膏 4g/L、KH2P04 0. 3g/L、葡萄糖 0. 5g/L、MgS04*7H20 0. 6g/L g/L、FeS04*7H20 0.01g/L、ZnS04 0.01g/L。最佳發酵條件為：溫度為35°C、轉速為180r/min、接種量為4%、 初始pH為7. 0、發酵時間為48h。
【文檔編號】C12R1/125GK104357361SQ201410643071
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年11月14日 優先權日:2014年11月14日
【發明者】李靜, 譚海剛, 王鳳舞 申請人:青島農業大學