本發明涉及生物酵素，尤其是液態發酵法果蔬生物酵素。
背景技術：
果蔬生物酵素是益生菌和酵素的復合制劑，是一種微生態免疫營養制劑，是由多種氨基酸構成,具有生理活性的蛋白質,它能迅速到達人體內提前老化和菌群失調的區域，活化、再生細胞，平衡腸道菌群，維護黏膜免疫屏障，抑制各種有害菌的產生和孳長，促進人體長期保持年輕健康的狀態；它能在體溫下使體內本不會發生的化學反應或很難發生的生化反應加速進行；人體的新陳代謝，能量攝取，成長和繁殖等生命現象，都必須通過酵素的幫助才能完成，是一種生命活動中不可或缺的媒介物質。
果蔬生物酵素在人體內的主要作用分為以下幾方面：
l.消炎抗菌：果蔬生物酵素能夠促進血液中白血球裂解增殖，誘發強化白血球的抗菌功能，從而起到消炎抗菌的作用。
2.激活細胞：能夠促進機體細胞新陳代謝，加速細胞裂變增生，活化細胞，延緩衰老，保持旺盛的體力。
3.血液凈化：能夠分解、代謝血液垃圾和引發機體炎癥某些的病毒，改善機體內部環境，清除體內垃圾，使血液保持健康狀態，促進全身血液循環。
4.促進營養物質分解吸收：催化、分解食物，幫助促進食物的消化，加速各類營養素的吸收，增強體質。
5.調節菌群平衡，建立免疫屏障：果蔬生物酵素能夠促進體內有益菌的優化生長，從而抑制有害菌，調節機體菌群平衡，增強機體免疫功能，使各類消化系統疾病能夠提前康復。
6.清除氧化自由基：由于果蔬生物酵素發酵過程中，特別是隨著后酵陳貯期的延長，溶液中多酚類物質倍增，抗氧化能力得到顯著提高，對各類氧化自由基清除能力呈逐漸增加趨勢，有顯著的機體抗衰老功效。
長期以來,果蔬生物酵素一直以家庭作坊式手工工藝在民間使用，對工業化生產技術鮮有成熟工藝，其工藝技術也沒有引起人們的足夠重視，隨著對果蔬生物酵素資源開發研究的不斷深入,人們發現,它具有高度開發價值和極高營養保健價值。
目前市場上也有工業化生產生物酵素，比如：
文獻一：中國專利申請號201210216324X公開的一種植物精華酵素及其制備方法，它是將所選的水果和蔬菜洗凈、晾干、切碎、磨漿后，依次加入水、糖和酒，攪拌，自然發酵后過濾去渣，得原液；在原液中加入水和糖，拌勻，進行第一次增氧曝氣培養，獲得一次擴大發酵液；在一次擴大發酵液中加入水和糖，拌勻后進行第二次增氧曝氣、發酵培養，得二次擴大發酵液；在二次擴大發酵液中加入水和糖，拌勻后，第三次增氧曝氣、發酵培養；再加入全部微量元素，拌勻，第四次增氧曝氣，得植物精華酵素。
該文獻制備方法中，由于在洗凈、晾干過程中，單純的強調洗凈水果蔬菜，造成了水果果皮、蔬菜表面果蔬酵素天然微生物群系的破壞，發酵過程中容易造成由于果蔬酵素天然微生物群系、益生菌群系的破壞，而使得引起水果蔬菜腐敗菌系在溫度適宜條件下快速繁殖，從而造成水果蔬菜發酵液酸敗，造成發酵液出現酸臭味和綠色、灰黑色、橘黃或棕紅色腐敗菌系霉斑或菌斑的出現，同時，發酵液中添加了酒的成分，一是影響發酵原液的口感，二是果蔬酵素發酵本身屬于好氣性發酵，添加酒的成分后，會因果蔬酵素天然微生物群系中醋酸菌的作用，使酒轉化為醋酸，從而破壞果蔬酵素自然發酵的有機物成分，降低了發酵溶液的PH值，容易導致果蔬酵素天然微生物群系因PH值下降過快引起發酵菌類早衰，造成果蔬酵素發酵不徹底。
另外，該文獻中描述的自然發酵原液，是過濾出果蔬渣后的一次發酵液，過早地過濾出果蔬渣，容易導致果蔬渣中的膳食纖維、天然礦物質、甾類、黃酮類等有益成分不能夠在后發酵階段中不能夠被充分轉化利用，降低了果蔬酵素發酵液的營養物質含量；其次，該文獻中描述的一次、二次、三次、四次增氧曝氣發酵，只是在過濾出果蔬渣的果蔬發酵原液增加水和糖類物質，這樣只能會增加發酵液的有機酸類含量，甚至還會產生對人體有害的高級醇類，同時，由于不斷的增加水和糖類物質，不但造成發酵液PH值不斷上升、糖類得不到有效轉化、果蔬酵素益生菌類早衰，還導致了果蔬自然發酵原液有效成分和營養物質含量的降低，根本不會得到富含各種氨基酸、具有生理活性的特殊蛋白質以及活性酶類的果蔬生物酵素。
文獻二：中國專利申請號2014100990092公開了一種微生態果蔬酵素制備方法，以嗜酸乳桿菌、凝結芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、釀酒酵母、屎腸球菌和雙歧桿菌6種益生菌中的4～6種，在含有紅糖，甘草和鮮紅薯為組份的培養基里培養，再通過含有紅糖和甘草的稀釋培養液進行活化培養，制成的微生態制劑為發酵劑，來發酵新鮮水果蔬菜和中草藥的果漿。
文獻二的制備方法中，使用的是嗜酸乳桿菌、凝結芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、釀酒酵母、屎腸球菌和雙歧桿菌六種發酵菌類中的4-6種，但是，該6種發酵菌類中，只有嗜酸乳桿菌、凝結芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌和雙歧桿菌對果蔬生物酵素發酵有直接有效的促進作用，同屬于果蔬酵素天然發酵益生菌類范疇，而其中的釀酒酵母、屎腸球菌不利于果蔬酵素的發酵。
雖然屎腸球菌對人體腸系菌群具有調控作用，但是在一定條件下可致感染，屎腸球菌引起尿路感染、腹腔、盆腔感染、敗血癥，同時，腸球菌還極易形成耐藥性，腸球菌能產生有害化學物質，破壞DNA，進而引起促發直腸癌的基因活動，腸球菌在發酵狀態下會生成一種叫“超氧化物”的氧分子，這種氧分子會破壞周圍細胞的DNA，國際益生菌協會(International Probiotics Association)和世界衛生組織(WHO)均建議：益生菌中不宜使用腸球菌！目前最新的益生菌產品如東海藥業生產的阿泰寧、寶樂安、爽舒寶等都不含有腸球菌。
果蔬生物酵素中有利于發酵的酵母菌主要是接合酵母屬、畢赤酵母等，接合酵母屬淀粉酶活力較強、耐高滲透壓、活性蛋白酶類產生能力強，畢赤酵母是甲醇營養型酵母中的一類能夠利用甲醇作為唯一碳源和能源的酵母菌，能夠有效降低果蔬酵素原料(特別是水果)中果膠含量高產生的甲醇含量，提高果蔬生物酵素的質量；然而，文獻二使用的發酵菌種中是釀酒酵母，而釀酒酵母只會利用果蔬中的還原糖類轉化為酒精，在有氧發酵條件下，酒精被醋酸菌轉化為醋酸，降低了發酵溶液的PH值，容易導致果蔬酵素天然微生物群系因PH值下降過快引起發酵菌類早衰，造成果蔬生物酵素發酵不徹底。
另外，人體正常代謝中，有6000余種生化反應參與人體代謝，需要大量、多種生物活性酶類、具有生物活性的特殊蛋白質、自然界中無數種果蔬酵素益生菌類參與其中，其中，不乏超氧化歧化菌類、雙歧桿菌類、乳酸菌類、曲霉、接合酵母屬、畢赤酵母等發酵益生菌，單純的依靠嗜酸乳桿菌、凝結芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、釀酒酵母、屎腸球菌和雙歧桿菌六種發酵菌類中的4-6種，無法保證果蔬生物酵素發酵代謝生成多種生物活性酶類、具有生物活性的特殊蛋白質，更無法保證果蔬酵素天然微生物群系、益生菌群系的菌群多樣性，降低了果蔬生物酵素的生物活性功能。
文獻三：中國專利申請號2015103714652公開了一種蘋果微生物酵素及其制備方法，屬于酵素的制備領域。其制備方法為：(1)將蘋果用質量分數為30％的鹽水清洗干凈，置于陰涼處瀝干水分，備用；(2)將黑糖用紫外線消毒5-10s；(3)將步驟(1)中的蘋果除籽切塊裝入無菌反應器中，將步驟(2)中的黑糖按照蘋果質量的10.5-12.5％的質量加入到蘋果中，將穩定劑按照蘋果質量的1.5-2.0％的質量加入到蘋果中，得到混合物；(4)向步驟(3)中的混合物添加酵母菌；(5)密封、發酵。
文獻三的制備方法，由于蘋果和黑糖都經過了滅菌處理，水果表面攜帶的果蔬酵素天然微生物群系、益生菌群系被全部殺滅、破壞，另外，果蔬生物酵素是一種在果蔬酵素天然微生物群系、益生菌群系作用下的有氧生物發酵過程，而文獻三描述的發酵過程是將蘋果除籽切塊裝入無菌反應器中，添加酵母菌密封、發酵，是一種在單一酵母菌種作用下的無氧發酵過程，利用文獻三的制備方法，只會發酵生成含有酒精和少量有機酸的蘋果釀造酒類，不會發酵生成人體代謝所需要的多種生物活性酶類、具有生物活性的特殊蛋白質類，以及可以起到消炎抗菌、激活細胞、凈化血液作用的發酵類生物活性物質。
其次，文獻三描述的發酵方法，單純依靠酵母菌作為發酵菌種進行無氧發酵，本質上不符合果蔬生物酵素發酵需要自然界中無數種果蔬酵素益生菌類參與其中，果蔬酵素天然微生物群系、益生菌群系的菌群多樣性混合有氧發酵的生化機理，本質上不會得到對人體有多種益生作用果蔬生物酵素。
文獻四：中國專利申請號2015105557016公開了一種基于接種菌種進行發酵制備水果酵素的方法，包括：選料、剝皮切片、調整糖度、滅菌、添加改性發酵液、發酵和過濾；其中，改性發酵液是在天然發酵液中接種有改性菌種，所述改性菌種選自米曲霉、酵母菌、嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌中的至少一種。
文獻四的制備方法，同文獻二、文獻三在背景技術上有諸多相似之處，只不過各自選用的發酵菌種，或者說文獻中描述的改性菌種、改性發酵液品種不同，但是，本質上都是對水果表面攜帶的果蔬酵素天然微生物群系、益生菌群系被全部殺滅、破壞，然后接種入一種或幾種所謂改性菌種，或者用所謂改性菌種培養的改性發酵液進行發酵。
由于都經過了滅菌處理，水果表面攜帶的果蔬酵素天然微生物群系、益生菌群系被全部殺滅、破壞，另外，果蔬生物酵素是一種在果蔬酵素天然微生物群系、益生菌群系作用下的有氧生物發酵過程，而文獻四描述的發酵過程是將水果剝皮切片、調整糖度、滅菌、添加改性發酵液、發酵和過濾，所述改性菌種也只是選自米曲霉、酵母菌、嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌中的至少一種，是在單一或幾種菌種作用下的發酵過程，利用文獻四的制備方法，選擇米曲霉作為菌種，只會將果蔬生物酵素發酵原料中的淀粉質、纖維質物質代謝為糖類和屈指可數的幾種酶類；利用酵母菌，只會發酵生成含有酒精和少量有機酸的釀造酒類；利用嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌作為菌種，只會發生乳酸菌發酵一類的生化反應，其代謝產物也主要是乳酸，然而，人體正常代謝中，有6000余種生化反應參與人體代謝，需要大量、多種生物活性酶類、具有生物活性的特殊蛋白質、自然界中無數種果蔬酵素益生菌類參與其中，其中，不乏超氧化歧化菌類、雙歧桿菌類、乳酸菌類、曲霉、接合酵母屬、畢赤酵母等發酵益生菌，單純的依靠選自米曲霉、酵母菌、嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌中的至少一種作為發酵菌種，無法保證果蔬生物酵素發酵代謝生成多種生物活性酶類、具有生物活性的特殊蛋白質，更無法保證果蔬酵素天然微生物群系、益生菌群系的菌群多樣性，降低了果蔬生物酵素的生物活性功能，不會發酵生成人體代謝所需要的多種生物活性酶類、具有生物活性的特殊蛋白質類以及可以起到消炎抗菌、激活細胞、凈化血液作用的發酵類生物活性物質。
其次，文獻四描述的發酵方法，單純依靠選自米曲霉、酵母菌、嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌中的至少一種作為發酵菌種，本質上不符合果蔬生物酵素發酵需要自然界中無數種果蔬酵素益生菌類參與其中，果蔬酵素天然微生物群系、益生菌群系的菌群多樣性混合有氧發酵的生化機理，本質上不會得到對人體有多種益生作用果蔬生物酵素。
技術實現要素：
為了克服現有技術的不足，本發明立足于當地豐富的天然果蔬資源，以工業化手段將天然果蔬資源轉化為一種具有營養保健價值的果蔬生物酵素。
本發明同時提供利用所制備的果蔬生物酵素生產系列營養食品的方法，如：新型發酵型營養果蔬生物酵素飲料、新型營養果蔬生物酵素酒等。
為達到上述目的，本發明中果蔬生物酵素具體工藝步驟如下：
第一步：天然果蔬生物酵素發酵菌種的選育及擴大培養
第1.1步：將電導率在30us/cm以下的純凈水加熱到100℃，并保持微沸5分鐘，自然冷卻后，將其自然曝氣24小時以上，備用。
第1.2步：將自然成熟度8成左右的水果或蔬菜(簡稱果蔬)用流水沖洗干凈、自然干燥后，在保持分切刀具及接觸水果的所有物品無菌狀態下刨切成薄片，并將水果中部果核、籽實剔除，以保持水果自然果香味；
要求：水果、蔬菜清洗之前，必須剔除腐爛果實和干枯蔬菜葉片，水果、蔬菜流水沖洗過程中，只能沖洗掉表面浮塵和雜質，生長正常的水果果皮和蔬菜外表上自然帶有的淡粉狀表面護膜、生物蠟質狀表面護膜不能破壞，其表面護膜中的活性菌類是果蔬酵素生產過程中主要的天然微生物群系、益生菌群系的菌群來源；
第1.3步：按照重量百分比為黑糖∶果蔬薄片∶純凈水＝1∶3∶10的比例，將黑糖充分溶解于第1.1步制備的純凈水中，然后與果蔬薄片一起置于通風攪拌式培養罐中混合均勻，并注意將果蔬切片完全浸漬在黑糖純凈水溶液中，保持溶液溫度在30±2℃條件下，進行天然果蔬生物酵素發酵菌種的選育及擴大培養，要求每間隔2小時，對培養液通風攪拌15分鐘，待天然果蔬生物酵素發酵菌種培養液表面布滿平滑狀白色微生物菌膜，培養液表面不再出現氣體泡沫溢出，果蔬切片自然沉降到通風攪拌式培養罐底部，培養液呈現自然澄清的棕黃色至紅棕色時，天然果蔬生物酵素發酵菌種培養液即告培養完成，培養時間一般在30天以上。
第二步：果蔬生物酵素發酵原料的預處理
第2.1步：純凈水的預處理
將電導率在30us/cm以下的純凈水加熱到100℃，并保持微沸5分鐘，自然冷卻后，將其自然曝氣24小時以上，備用；
第2.2步：果蔬生物發酵用果蔬原料的預處理
將自然成熟度8成左右的果蔬洗凈自然干燥后剔除果核、果仁、籽實，進行打漿，漿液粒度要求最大粒度直徑不超過9毫米；
第三步：果蔬生物酵素接種發酵
第3.1步：接種
按照重量百分比為黑糖∶果蔬漿液∶純凈水＝1∶3∶10的比例，稱取三者在通風攪拌式發酵罐中混合均勻成為待發酵混合溶液，并按照重量百分比為待發酵混合溶液∶天然果蔬生物酵素發酵菌種培養液＝10∶1的比例，稱取培養成熟的天然果蔬生物酵素發酵菌種培養液，保持溶液溫度在35±2℃條件下進行接種，并充分攪拌混合均勻；
第3.2步：前發酵
將充分攪拌混合均勻的待發酵果蔬漿液與天然果蔬生物酵素發酵菌種培養液混合液，在35±2℃溫度條件下，進行通風攪拌發酵，發酵過程中，必須每間隔2小時，對發酵液通風攪拌15分鐘，待天然果蔬生物酵素發酵液表面布滿平滑狀白色微生物菌膜，發酵液表面不再出現氣體泡沫溢出，果蔬渣汁自然沉降到通風攪拌式培養罐底部，發酵液呈現自然地棕黃色至紅棕色時，天然果蔬生物酵素發酵液前發酵完成，前發酵時間一般為60天以上；
第3.3步：中期發酵
待前發酵完成后，發酵液中已基本上只出現少量發酵氣體，繼續保持品溫在35±2℃，進行中期發酵，中期發酵期間，只需每天開啟發酵罐一次，并通風攪拌30分鐘即可，待發酵液表面呈現加厚狀表面平滑的白色或微黃色片狀微生物菌膜，發酵液上層出現自然澄清發酵液，此時，中期發酵完成，中期發酵時間一般為120天；
第3.4步：后酵陳貯
中期發酵完成后，無需對發酵液做保溫發酵處理，將果蔬生物酵素發酵液打入后酵陳貯罐，依靠自然環境進行后酵陳貯在2年以上，后酵陳貯期間不得再進行通風攪拌；
第3.5步：倒罐澄清
后酵陳貯滿2年后，將發酵成熟、自然澄清的果蔬生物酵素發酵液放出打入過濾澄清罐，將下部自然沉降、含有大量果渣的果蔬生物酵素發酵液回收，可以作為發酵菌種，在新一輪次的果蔬生物酵素發酵過程中使用；
第3.6步：過濾澄清
將打入過濾澄清罐后的果蔬生物酵素發酵液進行離心沉降分離和過濾后，即可得到澄清有光澤、色澤呈棕黃色至紅棕色、發酵成熟的果蔬生物酵素溶液；
第3.7步：低溫貯存
將過濾澄清得到的果蔬生物酵素溶液打入低溫存貯罐中，在10-15℃低溫條件下存貯，即可得到發酵成熟、隨用隨取的高活性果蔬生物酵素溶液。
經檢驗，本發明果蔬生物酵素技術性能參數為：
(1)依據國標GB/T12456《食品中總酸的測定》，總酸度(以檸檬酸計)：≥10.0g/L飲料；
(2)總酚(以沒食子酸計)：≥1.5g/L飲料；
(3)依照飲料外觀口感檢測標準進行判定，本發明外觀：呈棕黃色至紅棕色自然愉悅的色澤，澄清透明有光澤；本發明口感：有自然愉悅的水果(或蔬菜)復合香氣及發酵帶來的愉悅的有機酸復合香氣，酸甜適口，口感舒適、潤滑，組織形態均勻細膩。
上述總酚含量的測定方法：
試劑：(1)鎢酸鈉——鉬酸鈉混合溶液：稱取50.0g鎢酸鈉，12.5g鉬酸鈉，用350ml水溶解到1000ml的回流瓶中，加入25ml磷酸及50ml鹽酸，充分混勻，小火加熱回流兩小時，再加入75g硫酸鋰、25ml蒸餾水、數滴溴水，然后繼續沸騰15min(至溴水完全揮發為止)，冷卻后，轉入500ml容量瓶定容，過濾，至棕色瓶中保存，使用時稀釋一倍。
(2)75g/L碳酸鈉溶液：稱取37.5g無水碳酸鈉溶于250ml溫水中，混勻，冷卻，稀釋至500ml，過濾到儲液瓶中備用。
(3)沒食子酸標準儲備液：準確稱取0.1100g一水合沒食子酸，溶解并定容至100ml，此溶液沒食子酸質量濃度為1000mg/L,在冰箱中2—3℃可保存五天。
(4)沒食子酸標準使用液：分別稱取1000mg/L的沒食子酸標準儲備液0、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml和5.0ml至100ml容量瓶中，定容，溶液質量濃度為0、10.0mg/L、20.0mg/L、30.0mg/L、40.0mg/L、50.0mg/L。
分析步驟：(1)標準曲線的繪制：吸取0、10.0mg/L、20.0mg/L、30.0mg/L、40.0mg/L、50.0mg/L的沒食子酸標準使用液各1.0ml，分別加5.0ml水，1.0ml鎢酸鈉——鉬酸鈉混合溶液和3.0ml碳酸鈉溶液，混勻，沒食子酸標準溶液濃度分別為0、1.0mg/L、2.0mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L、5.0mg/L，顯色，放置2小時，以標準曲線的“0”管為空白，在765nm波長下測定標準溶液的吸光度，以沒食子酸濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。
(2)樣品的測定：吸取1.0ml試樣提取液，分別加入5.0ml水，1.0ml鎢酸鈉——鉬酸鈉混合溶液和3.0ml碳酸鈉溶液，顯色，放置2小時，以標準曲線的“0”管為空白，在765nm波長下測定試樣溶液的吸光度，根據標準曲線求出試樣溶液的多酚濃度，以沒食子酸計，如果吸光度值超過5.0mg/L沒食子酸的吸光度時，將樣品提取液稀釋后重新測定。
計算多酚含量的公式：X＝(c×10×A)/(m×1000)
X—試樣中多酚含量，g/L；
C—試樣測定液中沒食子酸的濃度，mg/L；
1000—試樣測定液濃度由mg/L換算成g/L的換算系數；
10—試樣測定液定容體積，ml；
A—樣品稀釋倍數；
m—試樣體積，ml。
利用本發明的果蔬生物酵素制備營養果蔬生物酵素飲料的工藝為：
按照果蔬生物酵素溶液：濃縮蘋果汁：白砂糖：80℃凈化水＝2:1:1:16的質量比例，將果蔬生物酵素溶液、濃縮蘋果汁、白砂糖和80℃凈化水混合定容，然后加入蘋果酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、安賽蜜、三氯蔗糖、果汁飲料復合穩定劑、異Vc鈉以及食品添加劑進行調配，經乳化剪切、高壓均質后高溫灌裝，然后殺菌消毒，冷卻即可。
利用本發明的果蔬生物酵素制備營養果蔬生物酵素酒的工藝為：
選擇酒精度在45％VOL左右的白酒，經除濁澄清后，添加占酒精度在45％VOL左右的白酒10wt％的果蔬生物酵素溶液調配，然后調整酒精度在35％VOL，經低溫除濁、機械過濾澄清、高分子膜精濾、低溫陳貯，最后在低溫條件下添加占總重量0.02‰天然水果精油，混合均勻、精濾灌裝既成成品。
本發明的優點是：
其一，本發明在生物發酵過程中，充分利用水果果皮或蔬菜表面攜帶的果蔬酵素天然微生物群系、益生菌群系，采用傳統生物發酵工藝，同時結合現代生物技術進行天然果蔬生物酵素發酵菌種的選育及擴大培養，保證了果蔬生物酵素天然微生物群系、益生菌群系的菌群多樣性，確保了發酵代謝生成多種生物活性酶類、具有生物活性的特殊蛋白質、多酚類還原物質的數量，提高了果蔬生物酵素的生物活性功能。
其二，果蔬生物酵素發酵過程中，采用前發酵、中期發酵期間有氧發酵，后發酵陳貯期間保持自然溫度進行長期后酵陳貯相結合的方式，能夠將野生酵母菌種代謝產生的酒精成分代謝為有機酸類，并且有效促進了果蔬生物酵素在后酵陳貯期間各種生物活性酶類、具有生物活性的特殊蛋白質、多酚類還原物質的生成和富集，提高了果蔬生物酵素發酵制品的質量。
其三，采用傳統自然優選工藝，培養含有多樣性果蔬生物酵素天然微生物群系、益生菌群系的菌群，結合前發酵、中期發酵、后酵陳貯、過濾澄清、低溫貯存等工藝，有效建立了果蔬生物酵素工業化生產工藝流程模塊化，保障了果蔬生物酵素工業化轉化途徑的連續性和工業推廣持續性，奠定了果蔬生物酵素行業工業化發展的基礎。
其四，后酵陳貯期間分離出的果渣及濃度較大的底層發酵液，可以作為后續發酵工藝的自然優選微生物菌種，用于后續果蔬生物酵素的連續性發酵，能夠有效提高果蔬生物酵素生產過程前期菌種選育培養的可靠性，同時，降低了果蔬生物酵素菌種選育培養成本，另外，分離出的果渣還可以后續加工成果蔬生物酵素粉以及果蔬生物酵素農作物噴灑劑、果蔬生物酵素洗滌劑等多種果蔬生物酵素制品，提高了果蔬生物酵素發酵制品利用率的同時，還降低了生產廢棄物排放，提高了工業環保水平。
其五，將發酵制得的果蔬生物酵素溶液應用于食品工業，生產果蔬生物酵素功能保健飲料、果蔬生物酵素營養保健酒，為消費者提供了新型功能性營養食品，同時，拓展了果蔬生物酵素發酵制品的工業轉化領域，為果蔬生物酵素行業的規模化、集約化、多樣化、深層次工業轉化開辟了廣闊發展前景。
具體實施方式
下面通過實例詳細說明本發明的技術方案。
本發明果蔬生物酵素的制備方法為：
第一步：稱取黑糖10公斤，將其充分溶解于經過殺菌、自然曝氣處理的100公斤純凈水中，然后，稱取已經切成厚度不超過3㎜的薄片并剔除果核、籽實的山杏15公斤和鴨梨15公斤，與充分溶解后的黑糖純凈水溶液在200升通風攪拌式培養罐中混合均勻，并注意將水果切片完全浸漬在黑糖純凈水溶液中，保持溶液溫度在30±2℃條件下，進行天然果蔬生物酵素發酵菌種的選育及擴大培養，培養過程中，必須每間隔2小時，對培養液通風攪拌15分鐘，以利于天然菌種充分接觸培養液，加速菌種的繁殖。待選育、擴培8-10天左右，可以明顯看到培養液表面出現白色菌膜或者白色菌類斑點，發酵液自然氣味呈現有機酸類與水果自然果香的復合香氣，發酵液呈現自然澄清的棕黃色至紅棕色時，說明天然果蔬生物酵素發酵菌種已經正常生長繁殖。繼續通風培養30天，待天然果蔬生物酵素發酵菌種培養液表面布滿平滑狀白色微生物菌膜，培養液表面不再出現氣體泡沫溢出，水果(或蔬菜)切片自然沉降到通風攪拌式培養罐底部，培養液呈現自然澄清的棕黃色至紅棕色時，天然果蔬生物酵素發酵菌種培養液即告培養完成。
第二步：將自然成熟度8成左右的山杏和鴨梨用清水漂洗干凈，瀝干水分，然后，用破碎打漿機將洗凈瀝干的水果進行打漿，并同時剔除果核、果仁、籽實，打漿的粒度直徑要求通過打漿篩網進入到水果漿液中的最大粒度直徑不超過9毫米。
按照重量百分比為黑糖∶水果漿液∶純凈水＝1∶3∶10的比例，稱取黑糖100公斤，然后，將其充分溶解于經過殺菌、自然曝氣處理的1000公斤純凈水中，然后，稱取已經打成漿液并剔除果核、籽實的水果300公斤，與充分溶解后的黑糖純凈水溶液在2000升通風攪拌式發酵罐中混合均勻，并按照重量百分比為待發酵混合溶液∶發酵菌種培養液＝10∶1的比例，稱取培養成熟的發酵菌種培養液140公斤，保持溶液溫度在35±2℃條件下進行接種、通風攪拌發酵，發酵過程中，必須每間隔2小時，對發酵液通風攪拌15分鐘，以利于天然菌種充分接觸發酵液，加速菌種的繁殖、發酵，前發酵周期為60天以上。
第三步：前發酵完成后，發酵液中已基本上只出現少量發酵氣體，繼續保持品溫在35±2℃，進行中期發酵，中期發酵期間，只需每天開啟發酵罐一次，并通風攪拌30分鐘即可，中期發酵時間為120天，中期發酵完成后，無需對發酵液做保溫發酵處理，將果蔬生物酵素發酵液打入后酵陳貯罐，依靠自然環境進行后酵陳貯，后酵陳貯時間要求在2年以上，后酵陳貯期間不得再進行通風攪拌。
第四步：后酵陳貯滿2年后，在后酵陳貯罐中部左右的側放料管，將發酵成熟、自然澄清的果蔬生物酵素溶液放出，打入過濾澄清罐進行機械過濾，下部自然沉降、含有大量果渣的果蔬生物酵素發酵液，可以作為發酵菌種，在新一輪次的果蔬生物酵素發酵過程中使用，在后酵陳貯罐側放料管放出的發酵成熟、自然澄清的果蔬生物酵素發酵液，打入過濾澄清罐后，首先高速離心沉降設備進行離心沉降分離，分離出的澄清液再用硅藻土過濾機進行機械過濾，過濾完畢后，再用微孔膜直徑在0.1-0.2μm的高分子膜過濾設備進行精細過濾，即可得到澄清有光澤、色澤呈棕黃色至紅棕色、發酵成熟的果蔬生物酵素溶液。
第五步：為保持果蔬生物酵素溶液發酵過程產生的各類生物活性酶類、益生菌類、生物活性氨基酸類、多酚類還原性物質的活性，以及各類活性物質對人體機能的功能性和免疫力，將機械過濾澄清后的果蔬生物酵素溶液打入低溫存貯罐中，然后將果蔬生物酵素溶液溫度降溫至10-15℃，并保持低溫存貯，即可得到發酵成熟、隨用隨取的高活性果蔬生物酵素溶液。
利用上述果蔬生物酵素制備功能性營養飲料的方法為：
稱取100公斤果蔬生物酵素溶液、50公斤濃縮蘋果汁、50公斤白砂糖，用80℃凈化水稀釋定容至1噸溶液，然后，加入蘋果酸0.5公斤、檸檬酸2公斤、檸檬酸鈉0.5公斤，加入安賽蜜0.15公斤、三氯蔗糖0.03公斤，加入果汁飲料復合穩定劑2.5公斤，加入異Vc鈉0.2公斤，并添加適量食用香精等食品添加劑進行調配；調配好的飲料經乳化剪切后，用高壓均質機保持20～25MPa工作壓力，在60～65℃條件下對飲料進行高壓均質，均質后的飲料在配料罐中加熱至85℃以上，然后進行高溫灌裝；灌裝好的飲料在全自動噴淋式巴氏殺菌機上，控制殺菌溫度90-92℃、殺菌時間12分鐘條件下進行殺菌，然后冷卻、烘瓶、貼標、打碼、檢驗、包裝，制得果蔬生物酵素功能性營養飲料。
利用上述果蔬生物酵素制備功能性保健酒的生產工藝為：
首先選擇符合國家標準GB/T10781.1《濃香型白酒》優級標準、貯存期滿5年以上、酒精度在65％VOL以上的優質濃香型白酒基礎酒，用純凈水降度至45％VOL左右，用活性炭分子篩過濾設備吸附去除因降度析出的混濁狀高分子不飽和酸酯，然后在澄清后的白酒中添加入占降度白酒總重量10％的果蔬生物酵素溶液，調整果蔬生物酵素功能性保健酒酒精度在35％VOL，將調整好酒精度的果蔬生物酵素功能性保健酒降低溫度至-5℃以下，保持24小時以上，在此溫度條件下進行低溫硅藻土機械過濾，然后，用0.2微米孔徑的高分子膜過濾設備精濾，精濾完成、澄清透明的果蔬生物酵素功能性保健酒，保持15-20℃條件下，低溫陳貯30天以上，低溫陳貯期滿后，在此溫度條件下，添加入果蔬生物酵素功能性保健酒總重量0.02‰的天然萃取蘋果精油，充分混勻，檢測各項技術指標合格后，進行灌裝，即得到果香與酒香馥郁、天然果蔬生物酵素風味獨特的果蔬生物酵素功能性保健酒。