本發明屬于食品加工領域，涉及酶法制備抗炎肽飲料，特別涉及的是一種皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料及其制備方法。
背景技術：
：生物體長期暴露于不同來源的活性氧和自由基中，過多的活性氧和自由基會引起細胞內氧化還原失衡，導致氧化應激，進而誘發體內炎癥，同時激活炎癥細胞分泌促炎細胞因子導致組織損傷、蛋白變性從而影響機體健康。研究表明，許多疾病都是由炎癥引起的，如炎癥性腸病、冠狀動脈粥樣硬化、阿爾茲海默癥等。因此，尋找一種外源性的抗炎劑是治療炎癥介導疾病的一種重要手段。抗炎肽是一類對生物體有益的生物活性肽，其通過綜合調控細胞因子的分泌、炎癥介質合成釋放和炎癥信號通路調節機體炎癥反應。適當攝入具有抗炎活性的物質可以降低體內促炎因子的含量，防止炎癥的產生。常見的用于治療炎癥的藥物有很多，例如青霉素、頭孢、糖皮質激素類物質等，但都具有一定的副作用如依賴性、抗藥性和過敏性等。天然抗炎劑相對比較安全，具有治療或輔助治療炎癥的作用。中醫古籍《醫林纂要探源》記載皮蛋“瀉肺熱、醒酒、去大腸火、治瀉痢。能散、能斂”；生活中，人們也一直把皮蛋作為一種良好的“去火”涼性食品。我們率先采用現代的實驗方法與技術手段證實了皮蛋酶解多肽具有明顯的抗炎活性。飲料是大眾熟知并且普遍接受的口感豐富、食用方便、易于保藏的一種液體食品。飲料大致分為碳酸飲料、果蔬汁飲料以及功能性飲料等。其中功能性保健飲料其原料多為天然植物提取物、中草藥、菌類提取物、礦物質、海產品提取物以及功能性添加劑，以皮蛋為蛋白源酶解得到的抗炎肽作為飲料的原料在國內外未涉及。目前，酶解蛋白制備生物活性肽的研究主要集中在抗氧化肽上。cn105254714a中公開了一種酶解乳酪蛋白制備抗氧化肽的方法，該方法通過離子交換柱層析進行分離、脫鹽和濃縮。cn105820229a中公開了一種酶解鴨胗蛋白制備抗氧化肽的方法，該方法通過加入0.4％-0.6％的蛋白酶進行水解。cn105648005a中公開了一種酶解雙髻鯊軟骨蛋白制備抗氧化肽的方法，該方法經離子交換樹脂層析、凝膠柱層析和反相高效液相色譜純化。但是關于抗炎肽的研究以及以皮蛋蛋白為源性的抗炎肽飲料等產品均未涉及。技術實現要素：本發明的目的在于提供一種可降低體內促炎因子含量，防止炎癥產生，具有預防和輔助治療炎癥的皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料及其制備方法。本發明的技術方案是：將皮蛋蛋白加水均質后過濾、蛋白酶水解、凍干成多肽凍干粉，再將其制成溶液，脫色后添加無花果水提物、甜味劑、增稠劑、酸味劑、果汁等充分溶解后混合攪拌均勻，均質、灌裝、殺菌、包裝成皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料。本發明所述的一種皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料的制備方法是：(1)將檢驗合格、清洗、消毒后的皮蛋去殼，取皮蛋蛋白，按質量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均質，過濾，調節濾液ph至1.5-11，濾液加熱至35-60℃；(2)向步驟(1)所得蛋白溶液中加入蛋白酶，水解，滅酶、冷卻、離心，取上清液冷凍干燥，制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)將皮蛋蛋白酶解多肽粉制成質量濃度為1％-5％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，調節多肽溶液ph至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保溫吸附1h，過濾，收集濾液；(4)向步驟(3)所得濾液中加入0.1％-0.5％無花果水提物、0.002％-12％的甜味劑、0.03％-0.25％的增稠劑、0.1％-0.5％的酸味劑和0.5％-2.5％的果汁后均質，灌裝、殺菌、包裝成成品飲料。步驟(2)中所述的蛋白酶可以是堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶等其中的一種或兩種以上。蛋白酶的添加量為50萬u-200萬u/l蛋白液、水解時間為90-180min、酶解溫度為35-60℃。在90℃滅酶10min，6000r/min離心15min。步驟(4)所述無花果水提物的制備方法是將無花果以質量比為1∶1.5浸泡在水中24h，沸水煮制1h，紗布過濾，濾液真空濃縮，濃縮液冷凍干燥得到無花果水提物粉末。步驟(4)的甜味劑可以是白砂糖、麥芽糖、果糖、甘草酸銨、甘草酸一鉀、甘草酸三鉀、乳糖醇、木糖醇、麥芽糖醇、山梨糖醇、赤蘚糖醇、羅漢果糖苷、安賽蜜、三氯蔗糖、索馬甜、甜菊糖苷、甜蜜素、紐甜、阿力甜、阿斯巴甜、天門冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸、異麥芽酮糖等其中的一種或兩種以上。步驟(4)的增稠劑可以是卡拉膠、果膠、黃原膠、槐豆膠、海藻酸鈉、刺云實膠、醋酸酯淀粉、瓜爾膠、海藻酸鉀、淀粉磷酸酯鈉、β-環狀糊精、可溶性大豆多糖、亞麻籽膠、皂莢糖膠、阿拉伯膠、甲基纖維素、結冷膠、聚丙烯酸鈉、磷酸酯雙淀粉、明膠、羥丙基二淀粉磷酸酯、瓊脂、羥丙基甲基纖維素、酸處理淀粉、羧甲基纖維素鈉、氧化淀粉、氧化羥丙基淀粉、乙酰化二淀粉磷酸酯、乙酰化雙淀粉己二酸酯、海藻酸丙二醇酯、聚葡萄糖等其中的一種或兩種以上。步驟(4)的酸味劑可以是檸檬酸、蘋果酸、乳酸、磷酸、酒石酸、抗壞血酸、葡萄糖酸鈉、琥珀酸等其中的一種或兩種以上。步驟(4)的果汁可以是橙汁、蘋果汁、草莓汁、檸檬汁等其中的一種或兩種以上。步驟(4)所述的殺菌是在85℃下進行15min。本發明的優點在于：1.本發明制備得到的皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料可以降低體內促炎因子的含量，幫助機體抵抗炎癥；同時與藥物相比，食物可以長期食用，對于預防和輔助治療如炎癥性腸病等具有幫助。2.本發明制備得到的皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料添加了無花果水提物，飲料澄清透明、酸甜適宜，口感柔滑細膩，消費者接受度較高。附圖說明圖1為皮蛋蛋白酶解多肽在tnf-α誘導的caco-2細胞模型中的抗炎作用結果。具體實施方式對本發明將通過以下實施例作進一步的說明。實施例1：一種皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料的制備方法，包括如下步驟：(1)將檢驗合格、清洗、消毒后的皮蛋去殼，取皮蛋蛋白，按質量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均質，過濾，調節濾液ph至10，濾液加熱至60℃；(2)向步驟(1)所得的蛋白溶液中加入150萬u堿性蛋白酶/l蛋白溶液，水解120min后90℃滅酶10min，冷卻至室溫，6000r/min離心15min后棄沉淀取上清液，將酶解液冷凍干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)將皮蛋蛋白酶解多肽粉制成質量濃度為3％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，將多肽溶液ph調節至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保溫吸附1h，過濾，收集濾液；(4)向步驟(3)所得濾液中加入0.3％無花果水提物、10％的白砂糖、0.1％皂莢糖膠、0.03％亞麻籽膠、0.2％的蘋果酸和0.5％的蘋果汁后均質，灌裝、85℃殺菌15min，包裝成抗炎肽飲料。實施例2：一種皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料的制備方法，包括如下步驟：(1)將檢驗合格、清洗、消毒后的皮蛋去殼，取皮蛋蛋白，按質量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均質，過濾，調節濾液ph至8，濾液加熱至55℃；(2)向上述步驟所得的蛋白溶液中加入75萬u堿性蛋白酶/l蛋白溶液和25萬u木瓜蛋白酶/l蛋白溶液，水解180min后90℃滅酶10min，冷卻至室溫，6000r/min離心15min后棄沉淀取上清液，將酶解液冷凍干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)將皮蛋蛋白酶解多肽粉制成質量濃度為3％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，將多肽溶液ph調節至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保溫吸附1h，過濾，收集濾液；(4)向步驟(3)所得濾液中加入0.1％無花果水提物、6％的白砂糖、0.1％果膠、0.2％的蘋果酸和1.5％的蘋果汁后均質，灌裝、85℃殺菌15min，包裝成抗炎肽飲料。實施例3：一種皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料的制備方法，包括如下步驟：(1)將檢驗合格、清洗、消毒后的皮蛋去殼，取皮蛋蛋白，按質量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均質，過濾，調節濾液ph至7，濾液加熱至50℃；(2)向上述步驟所得的蛋白溶液中加入50萬u木瓜蛋白酶/l蛋白溶液和50萬u中性蛋白酶/l蛋白溶液，水解180min后90℃滅酶10min，冷卻至室溫，6000r/min離心15min后棄沉淀取上清液，將酶解液冷凍干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)將皮蛋蛋白酶解多肽粉制成質量濃度為2％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，將多肽溶液ph調節至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保溫吸附1h，過濾，收集濾液；(4)向步驟(3)所得濾液中加入0.5％無花果水提物、8％的木糖醇、0.15％槐豆膠、0.05％酒石酸、0.15％檸檬酸和1.5％的檸檬汁后均質，灌裝、85℃殺菌15min，包裝成抗炎肽飲料。實施例4：一種皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料的制備方法，包括如下步驟：(1)將檢驗合格、清洗、消毒后的皮蛋去殼，取皮蛋蛋白，按質量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均質，過濾，調節濾液ph至8，濾液加熱至40℃；(2)向上述步驟所得的蛋白溶液中加入200萬u胰蛋白酶/l蛋白溶液，水解90min后90℃滅酶10min，冷卻至室溫，6000r/min離心15min后棄沉淀取上清液，將酶解液冷凍干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)將皮蛋蛋白酶解多肽粉制成質量濃度為4％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，將多肽溶液ph調節至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保溫吸附1h，過濾，收集濾液；(4)向步驟(3)所得濾液中加入0.3％無花果水提物、8％的麥芽糖、0.25％黃原膠、0.2％的乳酸和0.5％的草莓汁后均質，灌裝、85℃殺菌15min，包裝成抗炎肽飲料。實施例5：一種皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料的制備方法，包括如下步驟：(1)將檢驗合格、清洗、消毒后的皮蛋去殼，取皮蛋蛋白，按質量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均質，過濾，調節濾液ph至8，濾液加熱至40℃；(2)向上述步驟所得的蛋白溶液中加入25萬u木瓜蛋白酶/l蛋白溶液和25萬u胰蛋白酶/l蛋白溶液，水解180min后90℃滅酶10min，冷卻至室溫，6000r/min離心15min后棄沉淀取上清液，將酶解液冷凍干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)將皮蛋蛋白酶解多肽粉制成質量濃度為5％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，將多肽溶液ph調節至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保溫吸附1h，過濾，收集濾液；(4)向步驟(3)所得濾液中加入0.2％無花果水提物、0.01％阿力甜、0.1％果膠、0.2％的蘋果酸和0.5％的檸檬汁后均質，灌裝、85℃殺菌15min，包裝成抗炎肽飲料。實施例6：一種皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料的制備方法，包括如下步驟：(1)將檢驗合格、清洗、消毒后的皮蛋去殼，取皮蛋蛋白，按質量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均質，過濾，調節濾液ph至9，濾液加熱至60℃；(2)向上述步驟所得的蛋白溶液中加入100萬u堿性蛋白酶/l蛋白溶液和50萬u中性蛋白酶/l蛋白溶液，水解150min后90℃滅酶10min，冷卻至室溫，6000r/min離心15min后棄沉淀取上清液，將酶解液冷凍干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)將皮蛋蛋白酶解多肽粉制成質量濃度為3％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，將多肽溶液ph調節至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保溫吸附1h，過濾，收集濾液；(4)向步驟(3)所得濾液中加入0.5％無花果水提物、7％麥芽糖、0.06％卡拉膠、0.1％的蘋果酸和0.5％的草莓汁后均質，灌裝、85℃殺菌15min，包裝成抗炎肽飲料。實施例7：一種皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料的制備方法，包括如下步驟：(1)將檢驗合格、清洗、消毒后的皮蛋去殼，取皮蛋蛋白，按質量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均質，過濾，調節濾液ph至1.5，濾液加熱至37℃；(2)向上述步驟所得的蛋白溶液中加入100萬u胃蛋白酶/l蛋白溶液，水解120min后90℃滅酶10min，冷卻至室溫，6000r/min離心15min后棄沉淀取上清液，將酶解液冷凍干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)將皮蛋蛋白酶解多肽粉制成質量濃度為3％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，將多肽溶液ph調節至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保溫吸附1h，過濾，收集濾液；(4)向步驟(3)所得濾液中加入0.4％無花果水提物、5％的白砂糖、0.01％甜菊糖苷、0.06％卡拉膠、0.1％的蘋果酸和0.5％的橙汁后均質，灌裝、85℃殺菌15min，包裝成抗炎肽飲料。試驗例1：皮蛋蛋白酶解多肽的抗炎活性研究皮蛋蛋白酶解多肽的抗炎活性采用tnf-α誘導的caco-2細胞炎癥模型進行評價。培養好的caco-2細胞加入皮蛋蛋白酶解多肽作用2h，然后加入tnf-α(2ng/ml)誘導4h，收集上清液測定il-8含量。結果如圖1所示，從圖中可以看出添加不同濃度(0.1、0.5、1、2.5、5、10mg/ml)的皮蛋蛋白酶解多肽均能抑制caco-2細胞中促炎細胞因子il-8的分泌，說明皮蛋蛋白酶解多肽具有較好的抗炎活性。試驗例2：皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料的感官評定采用滋味、組織形態、色澤三個指標對實施例制得的皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料進行感官評定，三項指標得分之和即為皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料的感官得分。表1皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料的感觀評分標準表2皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料的感官評定結果指標實施例1實施例2實施例3對比例1對比例2滋味(分)5855561518組織狀態(分)2724252125色澤(分)1091098綜合評分(分9588914551注：1)感官評定人數n＝8。2)感官評定結果四舍五入取整。試驗例3：皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料的穩定性評價將實施例制得的皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料，分別放置在溫度為4℃、25℃、38℃的環境中觀察一個月，記錄沉淀層厚度。表3皮蛋蛋白源性抗炎肽飲料在不同溫度下的沉淀高度(mm)指標實施例1實施例2實施例3對比例1對比例24℃0000.070.0325℃0000.180.1138℃0.050.080.090.320.24本發明所述對比例1未添加無花果提取物，其他同實施例1；本發明所述對比例2與實施例1的不同之處在于：步驟(2)中堿性蛋白酶的添加量為210萬u/l蛋白液、水解時間為80min，步驟(3)中將皮蛋蛋白酶解多肽粉制成質量濃度為6％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液。當前第1頁12