本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種具有增強機體免疫力的富鋅豌豆小肽及其制備方法。
背景技術：
免疫力是人體自身的防御機制，是人體識別和消滅外來侵入的任何異物(病毒、細菌等)，處理衰老、損傷、死亡、變性的自身細胞以及識別和處理體內突變細胞和病毒感染細胞的能力。現代免疫學認為，免疫力是人體識別和排除“異己”的生理反應，人體內執行這一功能的是免疫系統。免疫力低下的身體易于被感染或患癌癥，各種原因使免疫系統不能正常發揮保護作用，在此情況下，極易招致細菌、病毒、真菌等感染，因此免疫力低下最直接的表現就是容易生病。因經常患病，加重了機體的消耗，所以一般有體質虛弱、營養不良、精神萎靡、疲乏無力、食欲降低、睡眠障礙等表現，生病、打針吃藥便成了家常便飯。每次生病都要很長時間才能恢復，而且常常反復發作。長此以往會導致身體和智力發育不良，還易誘發重大疾病。深層原因是免疫力低下或免疫力不健全。當人體免疫功能失調，或者免疫系統不健全時，下列問題就會反復發作：感冒反復發作、扁桃體炎反復發作、哮喘反復發作、支氣管炎反復發作、肺炎反復發作、腹瀉反復發作，所以千萬不可小視。提高免疫力比較簡單地是平時多注意補鋅，日常的飲食中多吃像核桃、蛋黃、生蠔、海產品等鋅豐富的食物。
豌豆味甘、性平，歸脾、胃經，具有益中氣、止瀉痢、調營衛、利小便、消癰腫、解乳石毒之功效。對腳氣、癰腫、乳汁不通、脾胃不適、呃逆嘔吐、心腹脹痛、口渴泄痢等病癥，有一定的食療作用。豌豆是一種營養性食品，蛋白含量為22％。豌豆中所含的膽堿有助于防止動脈硬化；所含植物血球凝集素與萊豆、扁豆所含凝集素的作用類似，能凝集人體的紅細胞，促進有絲分裂；能激活腫瘤病人的淋巴細胞，產生淋巴毒素，對各種動物細胞有非特異性的傷害作用。因此，豌豆特別適合免疫力低下的人群食用。
肽，是源于蛋白、優于蛋白的多功能化合物，是當前國際最熱門的研究課題和極具發展前景的功能因子。肽是由兩個或兩個以上氨基酸通過肽鍵共價連接形成的聚合物，蛋白質不完全水解的產物也是肽，一般地將2肽～10肽(2肽由2個氨基酸構成，n肽由n個氨基酸構成)或相對分子質量小于2000d的肽稱為寡肽或小肽(如谷胱甘肽)，將10個以上氨基酸組成的稱為多肽。小肽可由蛋白質經酶解等方式獲得，與蛋白質相比具有以下優點：①小肽是體現信息的信使，具有多種人體代謝和生理調節功能：有促進免疫、激素調節、抗菌、抗病毒、降血壓、降血脂等作用；②小肽活性更高，在微量和低濃度的情況下，能發揮更高的生理作用；③小肽分子量小，易消化吸收，食用安全性極高。
微量元素又稱痕量元素，雖然在人體內的含量并不多，但是與人的生存和健康息息相關，對人的生命起至關重要的作用。它們的攝入過量、不足、不平衡或缺乏都會不同程度地引起人體生理的異常或發生疾病。微量元素最突出的作用是與生命活力密切相關，僅僅像火柴頭那樣大小或更少的量就能發揮巨大的生理作用。值得注意的是這些微量元素通常情況下必須直接或間接由土壤供給，但大部分人往往不能通過飲食獲得足夠的微量元素。這每種微量元素都有其特殊的生理功能。盡管它們在人體內含量極小，但它們對維持人體中的一些決定性的新陳代謝卻是十分必要的。一旦缺少了這些必需的微量元素，人體就會出現疾病，甚至危及生命。比較明確的是約30％的疾病直接是微量元素缺乏或不平衡所致。
鋅是人體必需的微量元素，但不能在體內合成，只能依靠外來食物提供。鋅是人體許多重要酶的組成成分，在蛋白質和核酸的合成、維護紅細胞的完整性以及在造血過程中都起著重要作用，是促進生長發育的關鍵元素，尤其對兒童大腦神經系統的發育至關重要。鋅可提高免疫能力，缺鋅可造成機體內一些免疫功能降低，如呼吸道容易反復感染，皮膚易生苔癬等。要想讓我們的生命之花常開，我們就應該攝取足夠的鋅元素。
富鋅豌豆小肽不僅能更進一步提高鋅元素的吸收率，而且還能使人體攝入兩類物質(小肽和微量元素)，各自并協同發揮提高機體免疫力的作用。
技術實現要素：
本發明的第一目的在于提供一種具有增強機體免疫力作用的富鋅豌豆小肽，本發明的第二目的是提供該富鋅豌豆小肽在制備用于增強機體免疫力的食品、保健食品及藥品中的應用。
本發明目的第一目的是這樣實現的：
一種具有增強機體免疫力作用的富鋅豌豆小肽，其特征在于采用以下工藝步驟制備：
富鋅豌豆小肽的制備：將氯化鋅(或葡萄糖酸鋅，或乳酸鋅)溶于去離子水配制成濃度為10～15mg/ml的溶液，按溶液與豌豆蛋白比例8～12:1的比例加入豌豆蛋白，攪拌均勻，加熱煮沸10～15分鐘，待冷卻至約30～50℃，以稀鹽酸調節ph值1.0～3.0，加入0.5～2％胃蛋白酶，保溫1～3小時，調節ph值7.0～9.0，加入0.5～2％胰蛋白酶，保溫3～5小時，煮沸10～15分鐘，離心，沉淀棄去，上清液通過相對分子質量為3kd的超濾膜超濾，透過液加于da201-c大孔吸附樹脂柱上，以水洗脫，棄去水洗液，再以50～90％(v/v)乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并繼續濃縮至相對密度為1.10～1.15(60℃)，噴霧干燥(進風溫度為180～200℃，出風溫度為90～100℃)，收集噴干粉，即得富鋅豌豆小肽。經檢測，富鋅豌豆小肽肽含量為60％～90％，鋅的富集率＞95％。
經過上述方法制備的富鋅豌豆小肽，用于制備成下述制劑：
(1)按富鋅豌豆小肽:玉米油:蜂蠟:卵磷脂比例為10:35:4:1混合物料，經研磨，制備成軟膠囊劑；
(2)按富鋅豌豆小肽:聚乙二醇400:丙二醇比例為10:38:2混合物料，經研磨，制備成軟膠囊劑；
(3)富鋅豌豆小肽，加入常規輔料，制備成口服液、膠囊劑、片劑、顆粒劑。
但本發明不限于上述劑型。制劑工藝所用的輔料可以用其他常規的輔料代替，如淀粉、糊精、糖粉、蜂蜜、甘油、羧甲基纖維素鈉等；富鋅豌豆小肽也可與其他藥用物質合用，共同達到增強機體免疫力的作用。
本發明的第二目的是提供上述富鋅豌豆小肽的用途，其具有增強機體免疫力的作用，其可用于制備提高免疫力的食品、保健食品及藥品。
本發明的有益效果是：本發明富鋅豌豆小肽，制備簡便，成本低廉；豌豆小肽與微量元素協同發揮提高機體免疫力的作用，同時具有毒副作用小、無耐藥性、不易殘留等優點，達到綠色食品純天然的要求，能獲得良好的社會效益和經濟效益。
藥效試驗
為進一步驗證本發明富鋅豌豆小肽的提高免疫力的作用，發明人進行了藥效學試驗驗證，試驗方法及結果如下：
(1)對小鼠游泳時間的影響
①受試藥物及動物
富鋅豌豆小肽，自制，含豌豆小肽(以總肽量計)為82.7％，含鋅3.08％。臨用前采用無菌去離子水配成一定濃度藥液，灌胃給藥。
豌豆小肽，自制，含豌豆小肽(以總肽量計)81.9％。臨用前采用無菌去離子水配成一定濃度藥液，灌胃給藥。
葡萄糖酸鋅(食品級，純度＞98％)。臨用前采用無菌去離子水配成一定濃度藥液，灌胃給藥。
昆明種小鼠，spf級，雌性，體重18～22g，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，動物合格證號：2015000515110。
②試驗方法及結果
取小鼠，隨機分成4組，每組10只，分別為：富鋅豌豆小肽組(30mg/kg)、豌豆小肽組(30mg/kg)、葡萄糖酸鋅組(6.5mg/kg)、空白對照組，連續灌胃給予7d，2次/d，并于末次給藥1h后將各組小鼠尾部按其體重1/10負重，然后分別投入一直徑50cm，水深40cm，水溫(16±1)℃容器中觀察各組動物游泳時間，并以沉入水底為觀察指標。結果見表1。
表1對小鼠游泳時間的影響(x±s)
注：與空白對照組比較，*p<0.o5，**p<0.o1。
以上試驗結果表明：富鋅豌豆小肽組小鼠的游泳時間與空白對照組比較差異有顯著性差異(p<0.o1)；豌豆小肽組和葡萄糖酸鋅組小鼠的游泳時間與空白對照組比較有顯著性差異(p<0.05)。說明富鋅豌豆小肽能顯著延長小鼠游泳時間。
(2)對小鼠免疫器官重量的影響
①受試藥物及動物同上。
②試驗方法及結果
取小鼠，隨機分成4組，每組10只，分別為：富鋅豌豆小肽組(30mg/kg)、豌豆小肽組(30mg/kg)、葡萄糖酸鋅組(6.5mg/kg)、空白對照組，連續灌胃給予10d，2次/d，并于末次給藥1h后將各組小鼠脫頸椎處死，剖取胸腺和脾臟分別稱重，得出臟器指數。結果見表2。
表2對小鼠免疫器官重量的影響(x±s)
注：與空白對照組比較，*p<0.o5，**p<0.o1。
以上試驗結果表明：富鋅豌豆小肽組小鼠的胸腺和脾臟指數與空白對照組比較差異有顯著性差異(p<0.o1)；豌豆小肽組和葡萄糖酸鋅組小鼠的胸腺和脾臟指數與空白對照組比較有顯著性差異(p<0.05)。說明富鋅豌豆小肽能顯著提高胸腺和脾臟指數。
具體實施方式
下面列舉實施例，進一步說明本發明，各實施例僅用于說明本發明，并不限制本發明：
實施例1
富鋅豌豆小肽的制備：將氯化鋅(或葡萄糖酸鋅，或乳酸鋅)溶于去離子水配制成濃度為12mg/ml的溶液，按溶液與豌豆蛋白比例10:1的比例加入豌豆蛋白，攪拌均勻，加熱煮沸15分鐘，待冷卻至約45℃，以稀鹽酸調節ph值2.0，加入1.5％胃蛋白酶，保溫2小時，調節ph值8.0，加入1.0％胰蛋白酶，保溫4小時，煮沸15分鐘，離心，沉淀棄去，上清液通過相對分子質量為3kd的超濾膜超濾，透過液加于da201-c大孔吸附樹脂柱上，以水洗脫，棄去水洗液，再以75％(v/v)乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并繼續濃縮至相對密度為1.12(60℃)，噴霧干燥(進風溫度為180～200℃，出風溫度為90～100℃)，收集噴干粉，即得富鋅豌豆小肽。
實施例2
富鋅豌豆小肽的制備：將氯化鋅(或葡萄糖酸鋅，或乳酸鋅)溶于去離子水配制成濃度為14mg/ml的溶液，按溶液與豌豆蛋白比例8:1的比例加入豌豆蛋白，攪拌均勻，加熱煮沸10分鐘，待冷卻至約50℃，以稀鹽酸調節ph值3.0，加入2％胃蛋白酶，保溫3小時，調節ph值7.5，加入2％胰蛋白酶，保溫5小時，煮沸10分鐘，離心，沉淀棄去，上清液通過相對分子質量為3kd的超濾膜超濾，透過液加于da201-c大孔吸附樹脂柱上，以水洗脫，棄去水洗液，再以60％(v/v)乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并繼續濃縮至相對密度為1.15(60℃)，噴霧干燥(進風溫度為180～200℃，出風溫度為90～100℃)，收集噴干粉，即得富鋅豌豆小肽。
實施例3
取實施例1方法所得的富鋅豌豆小肽100g，按富鋅豌豆小肽:玉米油:蜂蠟:卵磷脂比例為10:35:4:1混合物料，經研磨30分鐘，以明膠、純化水、甘油、氧化鐵黑按100:100:40:1比例制作軟膠囊囊皮膠液，控制膠盒溫度40～50℃，保溫罐35～45℃，噴體溫度30～40℃，壓制成軟膠囊，每粒內容物重0.45g，17℃～27℃冷風干燥3～5h定型，洗丸、干燥、選丸、包裝，制備成軟膠囊成品。
實施例4
取實施例1方法所得的富鋅豌豆小肽100g，按富鋅豌豆小肽:聚乙二醇400:丙二醇比例為10:38:2混合物料，經研磨30分鐘，以明膠、純化水、甘油、氧化鐵黑按100:100:40:1比例制作軟膠囊囊皮膠液，控制膠盒溫度40～50℃，保溫罐35～45℃，噴體溫度30～40℃，壓制成軟膠囊，每粒內容物重0.45g，17℃～27℃冷風干燥3～5h定型，洗丸、干燥、選丸、包裝，制備成軟膠囊成品。
實施例5
取實施例2方法所得的富鋅豌豆小肽100g，加淀粉至總量為200g，混合均勻，流化床造粒，填裝膠囊，包裝，制備成膠囊成品。