用于制備低亞硝胺含量煙草的方法

用于制備低亞硝胺含量煙草的方法
【專利摘要】用于制備煙草的方法提供了使用栗子(歐洲板栗(Castanea sativa Mill.))單寧提取物或其級分來減少煙草亞硝胺，通過土壤或直接地在收獲前的煙葉上，或在用于制造成品的煙草收獲后的步驟中，將栗子單寧提取物或其級分應用到田地上的煙草作物，因此，除了減少亞硝胺之外，該方法還增加了抗氧化性和抗自由基的次級代謝物；該方法應用于所有煙草類型，例如煙熏處理的、風干處理的、明火烘烤處理的和日曬處理的煙草。
【專利說明】用于制備低亞硝胺含量煙草的方法
[0001] 發明背景
[0002] 本發明涉及用于制備煙草的方法。
[0003] 更具體地，本發明涉及用于減少煙草特有亞硝胺濃度（TSNA =煙草特有亞硝胺） 的方法。
[0004] 如已知的，亞硝胺被認為是致癌物質（IARC專題論文第89卷），且亞硝胺濃度的減 少是用于減少通常由于煙草消費和特別是來自抽吸的煙草的傷害的研宄和調查的主要目 標。
[0005] 研宄的煙草特有亞硝胺（TSNA)主要有四種：NNN(N2-亞硝基去甲煙堿）、 NNK(4-(甲基亞硝氨基）-1-(3-吡啶基）-1- 丁酮）、NAB(N2-亞硝基假木賊堿）和 NAT (N2-亞硝基新煙堿）。
[0006] 本發明不限制于以上特有亞硝胺，而是通過相似考慮在收獲后期間、通過若干形 成機制、以綠色狀態（green state)或新形成的狀態（neoformed state)存在于煙草中的 所有亞硝胺，所述收獲后期間即從煙草收獲和處理（curing)、和從煙草處理、其發酵或陳化 (ageing)和儲存，直到用于直接消費的熏制的產品或基于煙草的產品的制造階段的期間。
[0007] 由于受溫度、濕度和是在缺氧條件下煙草硝酸鹽還原酶活性原因的細菌控制的在 煙草生物堿和若干氮化合物（硝酸鹽、亞硝酸鹽、NOx)之間的反應形成了以上亞硝胺。
[0008] 亞硝胺問題影響所有煙草類型：風干處理的（air-cured)如白肋（Burley)、 煙熏處理的（flue-cured)如弗吉尼亞淡色（Virginia Bright)和明火烘烤處理的 (fire-cured)如肯塔基（Kentucky)，且這僅提到主要煙草類型并沒有排除其他類型。
[0009] 然而，上述問題已主要在白肋煙草和深色煙草中，作為傾向于引起TSNA的積累的 遺傳因素（所謂的"轉化株"株系，其中煙堿傾向于轉化為去甲煙堿）、農藝學（過量的氮施 肥）、處理條件（特別是在變黃和干燥之間）和儲存（溫度、從葉上除去莖桿等等）的結果 而被研宄。
[0010] 在用于在煙草中減少亞硝胺的產生的可能方法的范圍之內，已經提出了適合于 刺激內源性抗氧化劑物質產品的產生的機械應力誘導方法諸如根的切割[Qi Li等，在 J.Agronomy&Crop Science 192, 267-277 (2006)]，或木質部的環形切口 [Krauss 等，美國 專利 US 2003/0056801]。
[0011] 然而，由于取得的結果的不一致性和與技術方案有關的操作成本，以上調查的結 果沒有發現有用的應用
[0012] 可選地，在（風干處理的）白肋煙草上，通過由UV處理所述煙草已經取得了良好 結果[Krauss等，US 2006/0016125]，所述處理可能旨在提供特定程度的煙葉的清洗以去 除是硝酸鹽還原酶作用原因的細菌。
[0013] 然而，即使在以上情況下，操作和經濟的不實用性阻礙了其傳播。
[0014] 在一些情況下，基于操作的若干方式，還提出了外源性起源抗氧化物質的其他應 用。
[0015] 以上抗氧化物質被認為通過作為相對于亞硝酸鹽的"清潔者"操作來抑制亞硝胺 形成，所述亞硝酸鹽形成于煙草處理和儲存中并促進生成亞硝胺的反應。
[0016] 在這一點上，應當指出綠色煙葉包含可限制TSNA形成的顯著量的生育酚和多酚。
[0017] 例如，在弗吉尼亞淡色煙草中，28. 7%的全部抗氧化能力由綠原酸組成而11. 5% 由蘆丁組成，然而在白肋中，以上比例分別減少到13. 4%和6. 2%。
[0018] 然而，以上物質傾向于在煙草處理中損失：在最初14天在白肋中損失從50 %到 80%，其中綠原酸和蘆丁含量減少到相對于在收獲時含量的少于15% (Li等，2006)。
[0019] 在外源性抗氧化物質的范圍內，專利文獻檢查了與碳酸氫鈉、抗壞血酸、谷胱甘肽 和硒（Krauss等，在2003年3月27日的US 2003/0056801 Al)或阿魏酸及其酯類（Thomas 等，在2012年7月20日的US7, 757, 697B2)組合的未指明的性質的抗氧化混合物，所述抗 氧化混合物在醇溶液和表面活性劑混合物中應用于煙草收獲前的操作和煙草收獲后的操 作兩者中。
[0020] 然而，專利發明到目前為止沒有產生商業化工藝，這是由于應用制備方式和其成 本，還涉及藥物程度的抗氧化物質的使用，還不能提供從技術和經濟結果的觀點上可開發 的處置工藝。
[0021] 該實踐性結果在第242屆ACS國家會議中得到進一步強調，該會議在美國丹 佛（科羅拉多州）于2011年8月28日用題目為"Carcinogenic nitrosamines in U. S. cigarettes: Three decades of remarkable neglect by the tobacco industry (在 美國香煙中的致癌性亞硝胺：煙草工業明顯忽視的三十年）"的文獻啟動了其工作，其中特 別提到 "apparent lack of effort to control the levels of these carcinogens in cigarette tobacco and smoke by the cigarette manufacturers (香煙制造商明顯缺少 控制在香煙煙草和煙霧中的這些致癌物的水平的努力）"。
[0022] 發明概述
[0023] 本發明的目的在于提供用于制備克服了以上提及的現有技術缺點的煙草的方法。
[0024] 在上述目標的范圍內，本發明的主要目的在于提供具有抗氧化特征的基于使用植 物性質提取物或其標準化的級分的這樣的煙草制備方法。
[0025] 根據本發明的一個方面，通過下述用于制備煙草的方法實現以上提及的目的和目 標以及將在下文中變得更加明顯的其他目標：所述方法的特征在于所述方法包括使用栗子 (chestnut)單寧提取物或其級分來減少煙草亞硝胺形成。
[0026] 附圖簡述
[0027] 從優選的，但不是排他性的本發明的實施方案的以下詳細公開內容中，本發明的 另外的特征和優勢將變得明顯，所述本發明的實施方案是以指示性但并非限制性實例的方 式被說明在附圖中，其中：
[0028] 圖1顯示了與在280nm下記錄的栗子木材級分6液體提取物相關的色譜圖譜；
[0029] 圖2顯示了與在280nm下記錄的栗子木材噴霧干燥的提取物水溶液相關的色譜圖 譜；
[0030] 圖3是顯示在實施例2中通過其將源自第四收獲的弗吉尼亞淡色栽培變種 VFC-ITB678 栽培（Virginia Bright cv. VFC-ITB678cultivation)的頂葉分為具有兩個重 復的7個樣品的方法的表；
[0031] 圖4顯示了在實施例2中涉及第一分析系列（L系列）的樣品中的一個的亞硝胺 含量的數據；
[0032] 圖5顯示了與在254nm下（在頂部）和在330nm下（在底部）獲得的CHVOl樣品 (試樣）的水醇（hydroalcoholic)提取物相關的色譜圖譜；
[0033] 圖6是存在于從實施例4的樣品中取得的水醇提取物中的單獨的次級代謝物和煙 堿的定性-定量分析表；
[0034] 圖7顯示了 CHV系列的弗吉尼亞淡色煙草樣品的全部黃酮醇（fIavonolic)衍生 物和全部輕基肉桂酸（hydroxycinnamic)衍生物的含量的柱形圖；
[0035] 圖8顯示了 PV系列的弗吉尼亞淡色煙草樣品的全部黃酮醇衍生物和全部羥基肉 桂酸衍生物的含量的柱形圖；
[0036] 圖9顯示了 RB系列的白肋煙草樣品的全部黃酮醇衍生物和全部羥基肉桂酸衍生 物的含量的柱形圖；
[0037] 圖10顯示了 BEB系列的白肋煙草樣品的全部黃酮醇衍生物和全部羥基肉桂酸衍 生物的含量的柱形圖；
[0038] 圖11是顯示如對實施例2的樣品所測量的TSNA含量的表；和
[0039] 圖12是顯示如對實施例4的樣品所測量的TSNA含量的另外的表。
[0040] 優選實施方案的描述
[0041 ] 如已知的，栗子單寧提取物以可水解的單寧的存在為特征，所述可水解的單寧大 體上由部分地或完全地用D-葡萄糖分子酯化的酚基諸如沒食子酸或鞣花酸組成：通過 FRAP測試（三卩比啶基三嘆（tripiridylt;riazine)/Fe(ni)絡合物還原為藍色亞鐵形式，且 在593nm下吸光度增加）確定的水提取物的抗氧化活性是大于每毫克的提取物3, 500納摩 當量的抗壞血酸。產物和其標準化的級分還提供了微弱的抗真菌作用和抗微生物作用。
[0042] 意外地已經發現了在以下時期進行的、將在水中的栗子單寧提取物或其標準化 的級分應用于煙草減少了 TSNA形成而不改變煙草的其他外在特征（例如煙葉顏色、硬度 (consistency)和芳香）和內在特征（例如煙堿和還原糖含量），成熟程度是一樣的：所述 時期為在煙草作物（plant)的田地上生長直到其收獲期間、或在其收獲之后、在其中（通過 煙熏處理方法）處理弗吉尼亞淡色煙草的籃子中包裝時、或在煙草風干處理棚中的整個白 肋煙草葉或作物行（plant string)形成時、或緊接肯塔基煙草烤干處理前或其處理期間以 及在從處理到成品的制造的連續的時間期間。通過在Li等在J. Agronomy&Crop Science 192, 267 - 277 (2006)中公開的方法確定TSNA。
[0043] 不同于到目前為止提出的其他抗氧化物質，栗子單寧提取物或其標準化的級分還 以不改變煙草的天然味道的芳香為特征，這具有很大的技術優勢。此外，該提取物是在農業 煙草栽培中已經使用的產品，雖然用于其他目的，例如用于調整土地和灌溉用水pH和作為 生長刺激劑，如例如在以下文獻中公開的：分別在Nuova Rivart S.p. A(目前加入到本申請 人中）名下和在Sadepan Chimica S. P. A名下（屬于Saviola控股）的在2003年8月26 日的EP 1，464, 635 (Al)和2011年1月14日的EP 2, 345, 628 (Al)。本專利申請對于所有 預期效果是上述專利申請的繼續和發展。
[0044] 不限制進一步可能的用途，在本發明中以1%到37%、優選地以13%單寧和其級 分的液體形式使用栗子單寧提取物。這些產品可被遞送：1)在苗床和田地上的后續生長階 段中，通過灌溉用水或特別地制備的施肥材料被遞送到接近煙草作物的土地上；2)在全部 收獲之前的時期中和更具體地在作物剪切操作期間和在從收獲之前10天到緊接完全收獲 之前的時期中，且更具體地從在收獲之前的3天到1天，被遞送到煙草作物（作為整體收獲 的作物）或遞送到煙葉（在冠部收獲的）。在后續的收獲冠部的收獲的情況下，應用次數將 對應于收獲操作次數。對于整個作物收獲，執行單次遞送；3)被遞送到作為用于后續煙草 處理的收獲的整個煙草作物或煙葉，所述后續煙草處理基于不同類型：煙熏處理的、風干處 理的、烘烤處理的和日曬處理的（sun-cured)(東方煙草（oriental tobaccos))。在一些煙 草類型中，例如弗吉尼亞淡色、白肋和肯塔基，處置還可通過連續工序來執行，即從處理到 成品制造，例如在所謂的"擊打（beating)"步驟中（從葉肋（leaf rib)上分離葉片（leaf sheet)或葉網（web))。
[0045] 如果直接或者通過灌溉用水或肥料材料應用于接近煙草作物的土壤，則通過在煙 草生長周期期間以若干次處置施用多至50千克/公頃（kg/ha)單寧，來以從0. 1%到50% 且優選地從5%到10%的濃度應用在13%溶液中的栗子單寧提取物或其級分。
[0046] 對于收獲前在整個煙草作物或煙葉的應用，通過在單次收獲操作之前的連續處置 中遞送多至20千克/公頃單寧，使用了從0. 1 %到5%且優選地從1 %到3%的濃度。
[0047] 最后，如果在收獲的煙草上執行應用，濃度是從0.5%到10%且優選地從1 %到 5%。在該情況下，應用了每平方米葉面多至相應于約0. 65克單寧或其級分的50ml溶液。
[0048] 對于向土壤的應用，栗子單寧提取物或其級分優選通過傳統混合裝置被溶解于灌 溉用水或液體肥料中，并且例如通過微灌溉（micro-irrigating)方法被遞送。
[0049] 如果載體包含固體肥料，后者優選地涂抹于煙草作物上，以增加其吸收。
[0050] 對于向煙葉的應用，在收獲前和收獲后操作兩者中，通過在農場中使用的常規噴 灑設備噴灑栗子單寧提取物和其級分，所述噴灑設備通過將其霧化來噴灑液體產品，因此 增加液滴和葉面之間的接觸面。
[0051] 公開了以下實施例僅用于闡述本發明且其不限制由所附的權利要求書所限定的 發明范圍。
[0052] 實施例1
[0053] 涉及栗子單寧提取物的分級和其有用的級分的實例
[0054] 已分析了通過膜法從栗子木材熱水提取和冷分級系統獲得的樣品。
[0055] 特別地，已經檢查了以下級分：
[0056] 過濾的單寧湯（tannic broth);
[0057] 納濾滲透物I ;
[0058] 納濾濃縮物I ;
[0059] 納濾濃縮物II ;
[0060] 納濾滲透物II ;
[0061] 納濾濃縮物III;
[0062] 滲透滲透物（osmosis permeate);
[0063] 滲透濃縮物；
[0064] 澄清沉淀物。
[0065] 為了執行HPLC分析，已經使用了具有由H2O (ρΗ3· 2因為HCOOH) (A)和CH3CH⑶組 成的流動相的 Luna C18250x4. 60mm, 5 μπι柱（Phenomenex, Torrance, CA)。已經應用 了持續 55分鐘的具有0. 8mL/min流速的4階段的線性梯度。所用的洗脫圖譜如下：在起始100% A，然后在20分鐘內使溶劑A達到85 %，同時保持其恒定5分鐘，在10分鐘內減少到75 %， 進一步保持恒定8分鐘，最終在5分鐘內恢復到0% (100% B)并保持恒定4分鐘，以在3 分鐘內恢復到起始條件。已經通過沒食子酸將沒食子衍生物校準到280nm，且已經通過鞣花 酸將鞣花衍生物校準到254nm。
[0066] 通過實例的方式，圖1和圖2顯示了與兩個級分相關的色譜圖譜：通過納濾濃縮物 (級分6)獲得的具有1. 06的比重的第一級分，液體級分（圖1)，通過噴霧干燥該第一級分 獲得的第二級分（圖2)。
[0067] 圖1中顯示的參考數字涉及以下組分：1.沒食子酸；2.單沒食子酰基葡萄糖 (monogalloyl glucose) ;3·沒食子單寧（gallotannin)m/z 677 ;4·五沒食子酰基葡萄糖； 5.沒食子酰基-HHDP葡萄糖；6. HHDP葡萄糖；7.鞣花單寧m/z 925 ;8.栗木鞣花素/櫟木 親花素（vescalagin) ;9.親花單寧m/zl，085;10.親花酸。
[0068] 圖2中顯示的參考數字涉及以下組分：1.單沒食子酰基葡萄糖；2.沒食子酸； 3.二沒食子酰基葡萄糖；4.三沒食子酰基葡萄糖；5.四沒食子酰基葡萄糖；6.英國櫟鞣花 酸同分異構體（Pedunculagin isomer) ;7·親花單寧m/z 683 ;8·親花單寧m/z 925 ;9·栗 木鞣花素/櫟木鞣花素；10.鞣花單寧m/z 613 ;11.沒食子酰基-HHDP葡萄糖；12.鞣花酸。
[0069] 除以上兩個級分之外，分析了源自相同膜制備方法的其他級分。
[0070] 實施例2
[0071] 在位于意大利 Cittdidi Castello (PG)的 Fattoria Autonoma Tabacchi (在 "Citt^di Castello"地區的栽培者）進行的在對弗吉尼亞淡色（V. Bright)煙草的收獲后 操作中的應用
[0072] 如圖3的表中所顯示的，已經將從第四次收獲獲得的弗吉尼亞淡色栽培變種 VFC-ITB678栽培的頂葉分為具有兩個重復的7個樣品，所述頂葉經受了所公開的實驗性處 置并通過如本領域技術人員所公知的適合的處理方法處理。
[0073] 茶維力（Teavigo)，一種在生物醫藥領域和功能性食品中所用的綠茶的濃縮的提 取物，基本上由具有97% (HPLC)的濃度的單寧沒食子酸酯單體縮合物組成；因此，5g/l的 濃度相當于約IOmM單寧。
[0074] 由于其對于生物醫學和食品所關注的微生物的公知的抗微生物活性和抗真菌活 性，為這些實驗特別地選擇了茶維力。
[0075] 栗子單寧是具有4. 6% (HPLC)的單寧滴定度或單寧含量的1-8級分的混合物；因 此，115g/l的濃度相當于約IOmM單寧。
[0076] 以下將公開用于制備分析或測試樣品的方法。
[0077] 對熱水洗滌物和提取物稱重：
[0078] CHV01 :752. Img
[0079] CHV02 :752. 6mg
[0080] CHV03 ：752. Omg
[0081] CHV04 ：749. 8mg
[0082] CHV05 ：751. 4mg
[0083] CHV06 ：749. 6mg
[0084] CHV07 ：750. 6mg
[0085] CHV05,用于煎煮而沒有洗滌：751. 7mg
[0086] 將稱重的樣品切成小尺寸塊。
[0087] 洗滌物：
[0088] 已經將樣品1-7放入燒瓶中并通過用10. OmL Millipore水手動攪拌約2分30秒 來洗滌。通過吸管吸出了洗滌水，且然后將精確體積的洗滌溶液濃縮5:1，離心并放入小瓶。
[0089] 熱水提取物：
[0090] 洗滌的樣品已被放干，且然后用50. OmL Millipore水在攪拌下被保持在沸騰條件 持續15分鐘。如此獲得的提取物已被冷卻，在減壓下過濾，達到精確體積，離心并被放入小 瓶用于 HPLC/DAD/ESI-MS 分析。
[0091] 沒有洗滌的熱水提取物：
[0092] 將沒有洗滌的樣品8號（另外的CHAV05稱重）放入有50. OmL Millipore水的燒 瓶并保持沸騰條件下持續15分鐘，且然后冷卻并在減壓下過濾。然后，使其達到精確體積 并放入小瓶中。
[0093] 水醇提取物：
[0094] 對每個樣品（CHVOI - CHV07)，已經稱重了 I. 0克的植物材料。已經將稱重的材料 切成小塊并在因為甲酸的PH3. 2下的50. OmL Et0H/H20 70:30中攪拌。
[0095] 在20小時后，樣品在減壓下過濾，達到精確體積并被放入小瓶。
[0096] 通過以上制備方法，制備了以下樣品：
[0097] 洗滌物：CHV01L、CHV02L、CHV03L、CHV04L、CHV05L、CHV06L、CHV07L (L 系列）。
[0098] 在洗滌之后的熱水提取物：CHV01D、CHV02D、CHV03D、CHV04D、CHV05D、CHV06D、 CHV07D(D 系列）。
[0099] 沒有洗滌的熱水提取物：CHV05DT。
[0100] 水醇提取物：CHV01E、CHV02E、CHV03E、CHV04E、CHV05E、CHV06E、CHV07E (E 系列）。
[0101] HPLC/DAD 和 HPLC/DAD/MS 定性-定量分析
[0102] 進行了這些分析以評估加工的煙葉的煙堿、亞硝胺且特別是TSNA(煙草特有亞硝 胺）和由煙草作物產生的次級代謝物的含量。
[0103] 通過使用 Luna C18250x4. 60mm, 5 μ m 柱（Phenomenex, Torrance, CA)已經執行了 HPC/DAD/MS HPLC分析。在此使用的流動相由因為HCOOH而酸化到pH 3.2的H2O(A)和 CH3CN⑶組成。在此已經應用了具有0. 8mL/min流速（flow-rate)持續55分鐘的4個坡 度或階段的線性梯度。已經使用了以下洗脫圖譜：在起始100% A，然后在20分鐘內使A溶 劑達到85%，保持恒定5分鐘，在10分鐘內減少到75%，保持恒定8分鐘，最終在5分鐘 內恢復到0% (100% B)。已經將羥基肉桂酸衍生物校準到330nm，將黃酮醇衍生物校準到 350nm且煙堿及相關的衍生物校準到254nm。
[0104] 通過實例的方式，圖4顯示了與第一分析系列（L系列）的樣品之一相關的煙堿和 亞硝胺含量的數據。
[0105] 對于化學參數，擴展的不確定性數值（extended uncertainty value)是指95%置 信范圍。
[0106] 測定限（determining limit) (LOD)等于 1/10L0Q*3〇
[0107] N. D.=少于 LOQ(定量限）。
[0108] 由于多酚抗氧化物質羥基肉桂酸和類黃酮具有高定性-定量含量，沒有形成亞硝 胺前體亞硝酸鹽。所用的程序由評估在處理時間期間被每個樣品消耗的、通過應用表面處 理（processing)的分子數量和當前抗氧化代謝物的總含量和單獨的分子所組成。通常，未 加工的樣品具有更少含量的保護性抗氧化物質，其定性-定量含量對于不同加工的樣品隨 著不同處置水平而增加。
[0109] 已經發現了所有樣品具有低于法定閥值的衛生學上安全的亞硝胺含量，因此根據 本發明的方法提供了樣品隨時間流逝的非常高質量的和衛生的特征。此外，可以說通過阻 止亞硝胺含量在煙草儲存期間增加，天然地存在于煙草中的抗氧化物質的正增加通過協同 類型的作用提供了隨時間推移對煙草樣品的保護。
[0110] 通過實例的方式，圖5顯示了在沒有加入單寧溶液下處理的煙葉的水醇提取物 (參考樣品CHV01)的色譜圖譜，其中的詞語是指鑒定的化合物。
[0111] 在圖5中的參考數字顯示了以下組分：1.煙堿；2.單咖啡酰奎尼酸I ;3.單咖啡 酰奎尼酸II ;4.單咖啡酰奎尼酸III ;5.鼠李糖基（ramnosyl)-葡萄糖苷槲皮素；6.鼠李 糖基-葡萄糖苷山柰酚。
[0112] 如在圖5和圖6中的表所顯示的，所公開的分析方法允許鑒定和定量在煙葉中存 在的生物堿以及具有抗氧化和抗自由基活性的多酚提取物。通過根據以上公開的方法特別 設計的校準曲線校準了單獨的衍生物，因此提供了涉及單獨的化合物和化學亞類兩者的定 量數據。
[0113] 在圖6的表中顯示了源自檢查的樣品的水醇提取物的單獨的次級代謝物和煙堿 的定性-定量分析，數據被表達為每克采樣的植物材料的毫克數。
[0114] 圖7-圖10中的柱狀圖顯示了對四個系列樣品評估的全部黃酮醇衍生物和全部羥 基肉桂酸衍生物含量，其前兩個（CHV系列和PV系列）由弗吉尼亞淡色煙葉組成，而其他兩 個（RB和BEB系列）由白肋煙葉組成。
[0115] 已通過對在處理過程之后的煙葉水醇提取物所公開的相同方法進行了分析或測 試，且結果以每克植物材料多酚毫克數表示。
[0116] 四個被檢查的系列的每一個都是對其通過栗子單寧溶液、茶維力和綠茶溶液（分 別為1(^凡、10(^/1、20(^/1和0.58/1、5.(^/1、10.(^/1)已經進行了6次不同處置的煙草 樣品系列。除了"RB"系列樣品以外，在所有樣品中都出現了黃酮醇衍生物和羥基肉桂酸衍 生物兩者，在所述"RB"系列樣品中僅出現了痕量的羥基肉桂酸衍生物。在4個分析的系列 中，煙堿含量從12mg/g到43mg/g植物材料變化。
[0117] TSNA含量-由Li等，2006公開的方法
[0118] 在圖11中的表顯示了取得的結果，所述結果表明通過進行處置，已經獲得相對于 參考樣品總TSNA含量的減少。
[0119] 實施例3
[0120] 由在Citt^di Castello地區的3位農夫（稱為F、B和S)在弗吉尼亞淡色煙草上 進行收獲后的應用
[0121] 在該試驗中所用的栗子單寧是濃縮的液體提取物（級分6,從如實施例1中的納濾 III中濃縮的），其被稀釋到IOmM多酚的濃度。
[0122] 這里以下的表顯示了用于表征單獨的煙草組分執行的定性-定量分析。
[0123]
【權利要求】
1. 一種用于制備煙草的方法，其特征在于所述方法包括使用栗子單寧提取物或其級分 以減少煙草亞硝胺的形成。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于通過物理方法專門地濃縮所述栗子單寧提 取物或其級分而沒有使用化學添加劑。
3. 根據權利要求2所述的方法，其特征在于所述物理方法由反滲透和納濾組成。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于將通過灌溉水或施肥材料運送的所述栗子 單寧提取物或其級分應用于接近煙草作物的土壤。
5. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于在收獲前操作中將所述栗子單寧提取物或 其級分應用于整個煙草作物或煙葉。
6. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于在收獲后操作中將所述栗子單寧提取物或 其級分應用于整個煙草作物或煙葉。
7. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于在煙草生長周期期間的若干操作中，將所 述栗子單寧提取物或其級分作為具有從〇. 1%到50%、優選地從5%到10%的濃度的水溶 液應用。
8. 根據權利要求5所述的方法，其特征在于在每次煙草收獲操作前的連續處置中，將 所述栗子單寧提取物或其級分作為具有從〇. 1%到5%、且優選地從1%到3%的濃度的水 溶液應用。
9. 根據權利要求6所述的方法，其特征在于在煙草收獲后，將所述栗子單寧提取物或 其級分作為具有從〇. 5%到10%、優選地從1%到5%的濃度的水溶液應用。
10. 根據權利要求8和9所述的方法，其特征在于所述方法包括應用每平方米煙葉表面 多至50ml的所述水溶液的步驟。
11. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述煙草是煙熏處理的、風干處理的、明 火烘烤處理的和日曬處理的類型或其混合物。
12. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法包括收獲后步驟，所述收獲后步 驟包括制備待處理的煙草、處理制備的煙草、保存處理的煙草和執行所有制造加工步驟以 提供基于煙草本身或與其他組分的混合物的商品。
13. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于相對于未加工的煙草，所述栗子單寧提取 物或其級分使加工的煙草的亞硝胺含量減少了 10%到50%。
14. 一種用于制備煙草的方法，其特征在于所述方法包括使用茶維力以減少煙草亞硝 胺形成的步驟。
15. 根據權利要求1和14所述的方法，其特征在于所述方法允許控制加工前的和加工 后的煙草質量，所述控制是通過定性地檢測和單獨地定量生物堿類和具有顯著抗氧化和抗 自由基性質的多酚特性的次級代謝物，且特別是黃酮醇衍生物和羥基肉桂酸衍生物。
【文檔編號】A24B15/30GK104519759SQ201380042038
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年7月31日 優先權日:2012年8月8日
【發明者】塞爾吉奧·米勒, 安娜莉薩·羅馬尼, 艾瑞卡·巴爾賈基, 瑪格利塔·坎波 申請人:格魯普莫羅薩維奧拉股份責任有限公司, 法托里亞奧托羅瑪塔巴基公司