姜黃素脂質載體及其制備方法

專利名稱：姜黃素脂質載體及其制備方法
技術領域：
本發明屬于生物醫藥材料領域，具體涉及姜黃素脂質載體及其制備方法背景技術姜黃素(Curcumin) [1,7-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-l,6-heptadiene墨3,5-dione]是從姜 科姜黃屬(Curcuma L)植物姜黃、莪術、郁金的根莖中提取的一種天然有效成分，具有抗 腫瘤、抗炎、抗HIV、抗菌、抗氧化等多種藥理作用，而且毒性低，具有臨床應用潛力。因 為姜黃素及其衍生物能夠阻止NF-icB的激活，阻止細胞中誘導型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)的表達，明顯清除由其產生的NO ,減少由NO與一些含鐵的酶 形成復合物、減少生成過氧化亞硝酸鹽，而發揮神經元保護作用。所以姜黃素是一個有巨大 潛力的抗腦缺血的藥物。但是姜黃素在進入臨床應用的過程中存在一些問題。該藥水溶性差，口服時約89%的藥 物以原形藥物形式從腸道排出。它對光不穩定，在中性和堿性的溶液中不穩定于37°C、 pH 為7. 2的條件下，30分鐘內有超過90%的藥物降解，會轉化為阿魏酸和香草醛等物質。所以 該藥生物利用度太低，口服基本無效，影響了臨床應用。目前有專利報道將姜黃素制成微乳、 共聚物納米粒和脂質體制劑，以提高藥物溶解度和生物利用度。但是這些制劑對藥物的穩定 性難以保證，而且包封率較低。例如微乳制劑光照下10天降解60%，脂質體的包封率為50-80% 之間，共聚物納米粒包封率為18-50%。脂質載體，是將物態相異的液態脂質混合到固體脂質中包裹藥物得的新型納米或者微米 載藥系統。因為載體脂質最終是固態，藥物包埋其中，避免了光照和溶液酸堿降解作用，在 藥物穩定性方面明顯優于傳統脂肪乳、微乳和脂質體。而且載體脂質是固態和液態油混合的 非晶型結構對于載體容納藥物分子，提高包封率，防止在儲存過程中藥物分子從載體中外排， 具有明顯優勢。傳統的固體脂質納米粒包封率只有70%左右，而且儲存中藥物被外排出載體 降解。我們發明的脂質載體包封率在90%以上，已經穩定放置一年以上。而且一定粒徑的脂 質微粒可以通過小腸淋巴和peyer's結吸收提高姜黃素口服生物利用度。我們發明的姜黃素脂 質載體，對腦缺血模型大鼠的腦組織起到保護作用。微乳法制備脂質載體是在高溫下，把固態和液態油熔化，加入合適的表面活性劑和水形 成熱力學穩定的熱微乳。然后將熱微乳冷卻，形成脂質載體。因為微乳是一種熱力學穩定體 系，粒徑較小為10 100nm，而且大小均一。如果在高溫下利用微乳作為模板，低溫下固化油相，形成脂質載體，則粒子也會具有模板的特征，例如粒徑較小，分散均一。發明內容本發明的目的是提供一種姜黃素的脂質載體及其制備方法。制得的脂質載體能裝載難溶 性、不穩定的姜黃素，以提高治療效果。這是因為具有較高包封率的脂質微粒載體將藥物以 固態形式包埋其中有效避免了光降解和酸堿的破壞，而且一定粒徑的脂質微粒可以通過小腸 淋巴和peyer's結吸收提高口服生物利用度，并且脂質微粒載體有緩釋作用。在本發明中， 一種姜黃素的脂質載體，包含姜黃素；脂質；表面活性劑和助表面活性劑, 脂質為藥學上可接受的固態油和液態油按一定比例混合的非晶型固態混合物，粒徑為20 1000nm，各組分比例如下姜黃素1份，脂質1 100份，表面活性劑和助表面活性劑20 1000份。。這種脂質載體的固態油為脂肪酸碳鏈長度在C14 C30的脂肪酸和脂肪酸酯，例如硬脂 酸、單硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、鯨蠟醇、蜂蠟、comprito1888、鯨蠟醇棕櫚酸酯、 三肉豆蔻酸甘油酯、石蠟中的一種或幾種。這種脂質載體的液態油為中鏈脂肪酸酯或植物油，例如Miglyol、油酸、大豆油、玉米 油、芝麻油、紅花籽油、葵花籽油、月見草油姜黃素和脂質的比例按質量計為1: 100 1: 1，優選為l: 30 1: 5。 固態油和液態油的比例按質量計為1: 9 9: 1，優選為3: 1 6: 1。脂質載體的水溶液中的表面活性劑包括吐溫、司盤、賣澤、節澤、泊洛沙姆、磷脂、聚 氧乙烯蓖麻油、十二烷基硫酸鈉中的一種或者幾種的組合，水溶液中的助表面活性劑包括乙醇、PEG-400、異丙醇和l， 2-丙二醇中的一種或者幾種的組合。 一種制備姜黃素脂質載體的方法，包括歩驟一、將固態油、液態油的混合物和姜黃素在7(TC左右融化溶解；步驟二、加入相同溫度下的表面活性劑與助表面活性劑的混合物，表面活性劑和助表面活性劑的質量比為1: 1 1: 10，優選為l: 2 1: 7;歩驟三、滴加同溫度下的適量水，形成熱微乳；歩驟四、攪拌下，將熱微乳滴加到0.5 3(TC的水中，優選溫度為2 4'C,形成姜黃素 脂質載體。一種制備姜黃素脂質載體的方法，包括歩驟一、將姜黃素和混合油脂溶解在乙醇、甲醇、丙酮、二氯甲烷、甲苯等一種或幾種
有機溶劑中；歩驟二、攪拌下，將歩驟一中的溶液緩慢滴加到7(TC含有0.1 5。/。的表面活性劑水溶液 中，形成初乳，將初乳超聲或者乳勻均質，得到乳液；步驟三、將乳液攪拌4 6小時，或者用去離子水稀釋，除去溶劑，冷卻乳液，得到姜 黃素納米結構或者微米結構的脂質載體。把姜黃素脂質載體冷凍干燥，得到凍干粉針，由姜黃素納米結構或者微米結構的脂質載 體和凍干保護劑組成；凍干保護劑單糖、雙糖和多糖的一種或多種組成；凍干保護劑和脂質 的比例為0.5 4.0: 1。姜黃素脂質載體，用于腦缺血再灌注后的神經元保護，預防和治療中風后腦水腫。


圖1.按實施例1制備的姜黃素脂質載體的粒徑分布圖 圖2.按實施例1制備的姜黃素脂質載體的透射電鏡圖 圖3.按實施例5制備大鼠大腦切片染色圖具體實施方式
本發明所用藥用輔料為市售符合藥典標準，如硬脂酸(上海試四赫維化工有限公司)；吐溫-60 (中國醫藥集團化學試劑有限公司)；聚氧乙烯氫化蓖麻油(Cremophor RH40，德國BASF公 司)；大豆磷脂(德國Degussa公司)；泊洛沙姆188 (南京威爾化工有限公司)。實施例1稱取80mg硬脂酸、20mgMiglyo1和5mg的姜黃素在7(TC水浴上熔化溶解，加入相同溫度下0. 4g 吐溫60和1. 6g乙醇混合溶液及適量蒸餾水，于渦旋混合儀上渦旋lmin后，即可形成0/W型 透明微乳。離冷卻水表面高度約6cm處,在電磁攪拌下(1000r/min)將保溫的熱微乳以5s — 滴的速度滴入4°C10倍體積的水分散介質中，冷卻并且除去乙醇，當微乳全部加入后繼續以 4'C保溫攪拌15min,即得納米結構脂質載體。測定粒徑和包封率分別為208. 4nm和84. 1%。實施例2稱取80rng單硬脂酸甘油酯、20mg油酸和5mg的姜黃素在7(TC水浴上熔化溶解，加入相同溫度下0. 4g泊洛沙姆188和1. 6g 1, 2-丙二醇混合溶液及適量蒸餾水，于渦旋混合儀上渦旋lmin后，即可形成0/W型透明微乳。離冷卻水表面高度約6cm處，在電磁攪拌下(1000r/min)將保溫的熱微乳以5s—滴的速度滴入4'C10倍體積的水分散介質中，當微乳全部加入后繼續以4'C 保溫攪拌15min，即得納米結構脂質載體。測定粒徑和包封率分別為179. lnm和90. 1%。 實施例3稱取80mgco卿rito1888、 20mg油酸和5mg的姜黃素在7(TC水浴上熔化溶解，加入相同溫度下 0.4g Cremophor RH40和0. 8g 1， 2-丙二醇混合溶液及適量蒸餾水，于渦旋混合儀上渦旋 lrain后，即可形成0/W型透明微乳。離冷卻水表面高度約6cm處，在電磁攪拌下(1000r/min)將 保溫的熱微乳以5s —滴的速度滴入4°C10倍體積的水分散介質中，當微乳全部加入后繼續以 4'C保溫攪拌15min，即得納米結構脂質載體。測定粒徑和包封率分別為159. 2nm和92. 1%。實施例4稱取80mg單硬脂酸甘油酯、20mg油酸溶于丙酮，5mg的姜黃素溶解在少量乙醇中，兩種溶 液混合形成有機相，配置2%十二垸基硫酸鈉溶液為水相加熱到70°C，攪拌下有機相緩慢注 入到水相中，恒溫攪拌4 6小時，將熱乳液和4'C的去離子水混合冷卻，攪拌15min，即得 脂質載體。測定粒徑和包封率分別為1. 2 ii m和76. 4%。實施例5姜黃素脂質載體對腦缺血后再灌注大鼠的神經保護作用評價A. 給藥方案制備腦缺血再灌注的大鼠模型。將大鼠分為假手術組、口服姜黃素混懸劑組、 口服姜黃素脂質載體組(劑量為姜黃素100mg/kg)。給藥后0.5小時造模缺血再灌注，48hr 后處死大鼠，制作大腦切片，染色觀察。B. 染色結果見圖3。假手術組沒有出現白色的缺血區，梗死面積為0±0%， 口服姜黃素混懸劑 組出現大片白色缺血區，梗死面積為34.2±5.6%， 口服姜黃素脂質載體組的白色缺血區比注 射溶劑組顯著縮小,梗死面積為14. 9±2.3%。說明口服姜黃素脂質載體組能夠顯著的減小腦缺 血受損組織的體積，有效保護中樞神經。
權利要求
1、一種姜黃素的脂質載體，包含姜黃素；脂質；表面活性劑和助表面活性劑，其特征在于，脂質為藥學上可接受的固態油和液態油按一定比例混合的非晶型固態混合物，粒徑為20～1000nm，各組分比例如下姜黃素1份，脂質1～100份，表面活性劑和助表面活性劑20～1000份。
2、 如權利要求1所述的脂質載體，其特征在于固態油為脂肪酸碳鏈長度在C14 C30的脂 肪酸和脂肪酸酯，包括而不局限于硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、鯨蠟醇、 蜂蠟、comprito1888、鯨蠟醇棕櫚酸酯、三肉豆蔻酸甘油酯、石蠟中的一種或幾種。
3、 如權利要求1所述的脂質載體，其特征在于液態油為中鏈脂肪酸酯或植物油，包括而不 局限于Miglyol、油酸、大豆油、玉米油、芝麻油、紅花籽油、葵花籽油、月見草油。
4、 如權利要求l所述的脂質載體，其特征在于姜黃素和脂質的比例按質量計為1: 100 1: ，優選為. 30 1: 5。
5、 如權利要求1所述的脂質載體，其特征在于固態油和液態油的比例按質量計為1: 9 9: 1，優選為3: 1 6: 1。
6、 如權利要求l所述的脂質載體，其特征在于表面活性劑包括吐溫、司盤、賣澤、節澤、 泊洛沙姆、磷脂、聚氧乙烯蓖麻油、十二垸基硫酸鈉中的一種或者幾種的組合，助表面活 性劑包括乙醇、PEG-400、異丙醇和l， 2-丙二醇中的一種或者幾種的組合。
7、 一種制備姜黃素脂質載體的方法，包括步驟一、將固態油、液態油的混合物和姜黃素在7(TC融化溶解；步驟二、加入相同溫度下的表面活性劑與助表面活性劑的混合物，表面活性劑和助表面活性劑的質量比為l: 1 1: 10，優選為l: 2 1: 7;步驟三、滴加同溫度下的適量水，形成熱微乳；步驟四、攪拌下，將熱微乳滴加到0.5 3(TC的水中，優選溫度為2 4'C,形成姜黃 素的脂質載體。
8、 一種制備姜黃素脂質載體的方法，包括步驟一、將姜黃素和混合油脂溶解在乙醇、甲醇、丙酮、'二氯甲烷、甲苯等一種或幾種有機溶劑中；歩驟二、攪拌下，將步驟一中的溶液緩慢滴加到7(TC含有0.1 5y。的表面活性劑水溶 液中，形成初乳，將初乳超聲或者乳勻均質，得到乳液；歩驟三、將乳液攪拌4 6小時，或者用去離子水稀釋，除去溶劑，冷卻乳液，得到 姜黃素脂質載體。
9、 權利要求1 8中的姜黃素脂質載體，可通過冷凍干燥制得凍干粉針，其特征在于由姜黃素脂質載體和凍干保護劑組成，凍干保護劑為單糖、雙糖和多糖的一種或多種組成，凍干保護劑和脂質的比例為0.5 4.0: 1。
10、 一種姜黃素脂質載體，用于腦缺血再灌注后的神經元保護，預防和治療中風后腦水腫。
全文摘要
本發明提供了一種姜黃素脂質載體及其可供工業化的制備方法。該姜黃素脂質載體包含治療有效劑量的姜黃素；脂質；適量的表面活性劑和助表面活性劑及附加劑。本發明制備的姜黃素脂質載體粒徑較小，藥物包封率較高，能提高藥物的穩定性，提高藥物的生物利用度。對于實驗動物腦缺血再灌注后的神經元保護，維持血腦屏障的完整性，預防和治療卒中后腦水腫有較好效果。
文檔編號A61K9/00GK101396334SQ200810155819
公開日2009年4月1日 申請日期2008年10月16日 優先權日2008年10月16日
發明者吳海銀, 青 張, 徐群為, 朱東亞, 瑞 李 申請人:南京醫科大學