鄰菲羅啉衍生物的銅配合物及其制備方法和應用的制作方法

專利名稱：鄰菲羅啉衍生物的銅配合物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及鄰菲羅啉衍生物的銅配合物，具體涉及一類單位取代或多位取代的1， 10-鄰菲羅啉衍生物銅配合物及其制備方法，以及該類配合物在制備預防和治療癌以及腫 瘤疾病的藥物中的應用。
背景技術：
單位取代和多位取代的1，10-鄰菲羅啉衍生物，除了具有1，10-鄰菲羅啉的性質 外，更有取代基的電負性以及電正性效應、立體位阻效應、手性效應等多種效應。1，10-鄰菲 羅啉作為平面分子，具備與DNA作用的潛能，其作用方式主要為三種不同的非共價方式溝 渠結合、插入結合以及嵌入結合。此外，還有靜電結合，以及氫鍵、離子鍵、范德華力和疏水 鍵等弱相互作用。單位和多位取代的鄰菲羅啉取代衍生物通過溝內或嵌插結合在核酸的螺 旋溝或堿基中，加上靜電結合，以及氫鍵、離子鍵、范德華力和疏水鍵等弱相互作用，常會誘 發許多的生物效應，阻礙核酸信息的正常表達，從而具備抑制DNA的復制抗癌抗腫瘤的潛 能。同時，單位和多位取代的1，10-鄰菲羅啉衍生物具有兩個在同一平面內的以Sp2 進行雜化的氮原子，其N原子的孤電子對可以與金屬進行配位形成金屬配合物。而金屬配 合物中的金屬離子與DNA的親核基團(磷酸氧位點或堿基氮、氧位點)直接鰲合，也可阻止 DNA復制，引起癌細胞的DNA損傷，從而阻止了癌細胞的生長和分裂，如具有抗癌活性的順 鉬類配合物與DNA的作用一樣。銅是人體不可或缺的重要微量元素，有關研究表明，銅缺乏不僅使胃癌、鼻咽癌發 病率上升，而且還與肝癌發病率有關。早在1912年，德國就用一種由銅的氯化物和蛋黃 素組成的混合物來治療患有面部癌的病人，這一治療的成功說明銅化合物具有抗癌功能。 1913年在利物浦大學進行的研究工作說明通過向皮下和靜脈內注射銅鹽和膠體銅可以 軟化或消除移植在老鼠體內的癌瘤。1930年，在法國的研究工作表明通過注射膠體銅轉 移并消除了腫瘤組織。最近在美國進行的研究工作表明通過服用適量各種各樣銅配合物 來治療實性腫瘤會明顯抑制腫瘤的生長和轉移，提高生存的機率。然而，迄今為止，目前尚沒有將單位和多位取代的鄰菲羅啉衍生物銅配合物作為 臨床藥物來進行癌癥和腫瘤的預防和治療。

發明內容
本發明的目的是提供一類鄰菲羅啉衍生物的銅配合物，具體地是一類單位或多位 取代的1，10-鄰菲羅啉衍生物與銅配合的配合物，及其制備方法和在制備預防和治療癌以 及腫瘤疾病的藥物中的應用。為達到上述目的，本發明采用如下技術方案本發明所提供的鄰菲羅啉衍生物的銅配合物，由1，10-鄰菲羅啉或其單位取代或 多位取代的衍生物、酸根和銅離子組成，或由1，10-鄰菲羅啉或其單位取代或多位取代的衍生物、酸根、有機小分子和銅離子組成。其分子結構式為{Cu [n- (Phen)]⑴⑴(Z)}或{Cu [n- (Phen)]⑴⑴}或 ICu2 [n- (Phen) ] 2 ⑴ 5}，其中Cu為二價或一價銅離子；n-(Phen)為1，10-鄰菲羅啉，或單位或多位取代的1，10-鄰菲羅啉衍生物，所述取 代基為烷基、硝基、氨基或鹵素等。所述烷基優選甲基，所述鹵素優選氯。在本發明的實施例中，所述單位或多位取代的1，10-鄰菲羅啉取代衍生物為2-取 代、2，3-取代、2，4-取代、2，5-取代、2，6-取代、2，7-取代、2，8-取代、2，9-取代、3-取代、3， 4-取代、3，5-取代、3，6-取代、3，7-取代、3，8-取代、3，9-取代、4-取代、4，5-取代、4，6-取 代、4，7-取代、4，8-取代、4，9-取代、5-取代、5，6-取代、5，7-取代、5，8-取代、5，9-取代、 6-取代、6，7-取代、6，8-取代、6，9-取代、7-取代、7，8-取代、7，9-取代、8-取代、8，9-取 代、9-取代、以及其它3位或多位的1，10-鄰菲羅啉取代衍生物；所述取代基為烷基、硝基、 氨基或鹵素等。X與Y分別為硝酸根、硫酸根、乙酸根或鹵素離子，X與Y可以相同也可以不同。Z為N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)、N, N- 二甲基乙酰胺(DMA)、二甲亞砜(DMSO)、甲 醇、乙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇、丙酮、乙腈或乙酰丙酮等含N和/或0的有機小分子。本發明還提供所述鄰菲羅啉衍生物的銅配合物的制備方法，是將銅鹽與所述1， 10-鄰菲羅啉，或所述單位或多位取代的1，10-鄰菲羅啉衍生物在溶劑中不斷攪拌，反應數 小時后過濾、靜置，或用多種有機溶劑的混合溶劑擴散后靜置、或用乙醚擴散后靜置，幾天 后得到所述配合物。其中，所述銅鹽為無機銅鹽或有機銅鹽，或它們的混合物。所述無機銅鹽例如硝酸 銅、氯化銅、硫酸銅等，所述有機銅鹽例如乙酸銅等。所述溶劑為單一有機溶劑或多種有機溶劑的混合溶劑、或單一無機溶劑、或有機 溶劑與無機溶劑的混合溶劑，所述有機溶劑例如N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)、N，N- 二甲基乙 酰胺(DMA)、二甲亞砜(DMSO)、甲醇、乙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇、丙酮、乙腈或乙酰丙酮， 所述無機溶劑例如水。所述多種有機溶劑的混合溶劑如甲醇和乙腈的混合溶劑、甲醇和丙酮的混合溶 劑、乙腈和丙酮的混合溶劑、或二氯甲烷與乙腈的混合溶劑等。本發明所述配合物的細胞實驗委托中國醫科院進行并提供活性結果，通過實驗證 實，所述的鄰菲羅啉衍生物的銅配合物對于白血病、胃癌、肝癌、鼻咽癌、肺癌和結腸腺癌等 癌癥的細胞具有很好的生長抑制作用，可以廣泛用于制備預防和治療這些癌癥的藥物，該 方面的應用也屬于本發明的保護范圍。本發明所述的鄰菲羅啉衍生物的銅配合物，其合成原料易得，成本低，產品以晶體 形式析出，純度大，產率高；而且，該配合物在自然狀態下能穩定存在，并具有良好的水溶性 和脂溶性；另外，本發明配合物對于白血病、胃癌、肝癌、鼻咽癌、肺癌和結腸腺癌白血病、胃 癌、肝癌、鼻咽癌、肺癌和結腸腺癌等多種癌癥細胞均呈現出優良的抑制作用，作用譜廣，應 用范圍廣泛。


圖IA-圖28A為實施例H8樣品Τλ- Ω 的紅外光譜圖；圖IB-圖^B為實施例1- 樣品Τλ-τ 的X-衍射單晶結構圖；其中，0原子、N 原子、S原子、Cu原子、Cl原子如圖中標示，灰球為C原子、白球為H原子，部分圖中為了清 晰省略了 H原子。
具體實施例方式本發明所述鄰菲羅啉衍生物的銅配合物，由1，10-鄰菲羅啉或其單位取代或多位 取代的衍生物、酸根和銅離子組成，或由1，10-鄰菲羅啉或其單位取代或多位取代的衍生 物、酸根、有機小分子和銅離子組成，其結構通式為{Cu [n- (Phen)]⑴⑴(Z)}或{Cu [n- (Phen)]⑴⑴}或 ICu2 [n- (Phen) ] 2 ⑴ 5}，其中Cu為二價或一價銅離子；n-(Phen)為1，10-鄰菲羅啉，或單位或多位取代的1，10-鄰菲羅啉衍生物；所述 取代基為烷基、硝基、氨基或鹵素等。所述烷基優選甲基，所述鹵素優選氯。具體地，所述單位或多位取代的1，10-鄰菲羅啉取代衍生物為2-取代、2，3-取代、 2，4-取代、2，5-取代、2，6-取代、2，7-取代、2，8-取代、2，9-取代、3-取代、3，4-取代、3，5-取 代、3，6-取代、3，7-取代、3，8-取代、3，9-取代、4-取代、4，5-取代、4，6-取代、4，7-取代、4， 8-取代、4，9-取代、5-取代、5，6-取代、5，7-取代、5，8-取代、5，9-取代、6-取代、6，7-取代、 6,8-取代、6，9-取代、7-取代、7，8-取代、7，9-取代、8-取代、8，9-取代、9-取代、以及其它3 位或多位的1，10-鄰菲羅啉取代衍生物；所述取代基為烷基、硝基、氨基或鹵素等。X與Y分別為硝酸根、硫酸根、乙酸根或鹵素離子，X與Y可以相同也可以不同。Z為N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)、N, N- 二甲基乙酰胺(DMA)、二甲亞砜(DMSO)、甲 醇、乙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇、丙酮、乙腈或乙酰丙酮等含N和/或0的有機小分子。本發明1，10_鄰菲羅啉取代衍生物銅配合物的制備方法，是將銅鹽與所述1， 10-鄰菲羅啉，或所述單位或多位取代的1，10-鄰菲羅啉取代衍生物在溶劑中不斷攪拌，反 應數小時后過濾、靜置，或用多種有機溶劑的混合溶劑擴散后靜置、或乙醚擴散后靜置，幾 天后得到所述配合物。其中，所述銅鹽為無機銅鹽或有機銅鹽，或它們的混合物，所述無機銅鹽例如硝酸 銅、氯化銅、硫酸銅等，所述有機銅鹽例如乙酸銅等。所述溶劑為單一有機溶劑或多種有機溶劑的混合溶劑、或單一無機溶劑、或有機 溶劑與無機溶劑的混合溶劑，所述有機溶劑例如N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)、N，N- 二甲基乙 酰胺(DMA)、二甲亞砜(DMSO)、甲醇、乙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇、丙酮、乙腈或乙酰丙酮， 所述無機溶劑例如水。所述多種有機溶劑的混合溶劑如甲醇和乙腈的混合溶劑、甲醇和丙酮的混合溶 劑、乙腈和丙酮的混合溶劑、或二氯甲烷與乙腈的混合溶劑等。下面結合實施例對本發明作進一步說明，應該理解的是，這些實施例僅用于例證 的目的，決不限制本發明的保護范圍。實施例1配合物Zl的制備
將0.29g Cu(NO3)2 ·3Η20 和 0. 174g 2，9 二甲基 _1，10-菲羅啉依次加入 10mN，N-二 甲基乙酰胺(DMA)，50ml無水甲醇中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室 溫下靜置，數天后獲得綠色塊狀晶體Zl。Zl 化合物分子式為{Cu [2，9-CH3_(l，IO-Phen)] (NO3)2 (DMA)}，即 1 個 2， 9-CH3-(l, 10-Phen)，2 個 NO3 和 1 個 DMA 與 1 個 Cu 配位。元素分析(％)計算值(實驗值)C 44. 77(44. 66) ；H 4. 35(3. 30) ；N 14. 51(14. 46) ；Cu 13. 16(13. 19)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖IA和圖IB所示。配合物Zl的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例1所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例1所得配合物 晶體Ζ1，濃度為5μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C，5% CO2培養 3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例1所得配合物Zl對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作用， 分別為對A_549(肺癌)細胞生長抑制率為85. 95%, IC50 = 0. 25 ；對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為88. 34%, IC50 = 0. 13 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為93. 60 %，IC50 = 0.19;對HL_60(白血病)細胞生長抑制率為98. 12% ；對BGC-823 (胃癌)細胞生長抑制率為85. 61 % ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為88. 80% ；結論這說明，本發明配合物Zl能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例2配合物Z2的制備將0.29g Cu(NO3)2 · 3H20 禾口 0. 174g 2，9 二甲基-1，10-菲羅啉依次加入 50mlN， N-二甲基甲酰胺(DMF)中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置， 數天后獲得綠色塊狀晶體Z2。Z2 化合物分子式為{Cu [2，9-CH3-(l，10-Phen)] (NO3)2 (DMF) }，即 1 個 2， 9-CH3- (1，10-Phen)，2 個 NO3 禾口 1 個 DMF 與 1 個 Cu 配位。元素分析(％)計算值(實驗值)C 43. 54(40. 85) ；H 4. 06(3. 36) ；N 19. 94(19. 88) ；Cu 13. 55(13. 87)。
其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖，分別如圖2A和圖2B所示。配合物Z2的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例2所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例2所得配合物 晶體Ζ2，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C，5 % CO2培養 3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例2所得配合物Z2對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作用， 分別為對A-549 (肺癌)細胞生長抑制率為87. 35 %，IC50 = 0.18;對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為90. 44%, IC50 = 0. 12 ；對HCT(結腸腺癌)細胞生長抑制率為93. 30%, IC50 = 0. 12 ；對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為97.86%;2對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為88. 93% ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為84. 79% .結論這說明，本發明配合物Z2能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例3配合物Th的制備將0. 29g Cu(NO3)2 · 3H20 和 0. 174g 2，9 二甲基 _1，10-菲羅啉依次加入 25mL 甲 醇與25mL乙腈的混合溶液中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜 置，數天后獲得綠色塊狀晶體Z3。Z3 化合物分子式為:{Cu[2，9-CH3_(1，10-Phen) ] (NO3) 2 (CH3OH)}，即 1 個 2， 9-CH3- (1，10-Phen)，2 個 NO3 禾Π 1 個 CH3OH 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)C42. 11(40. 85) ；H 3. 74(3. 36) ；N 13. 10(13. 88)； Cu 14. 85(14. 67)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖，分別如圖3A和圖:3B所示。配合物Th的細胞實驗 選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。 實驗組加實施例3所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例3所得配合物晶體D，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C，5 % CO2培養 3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例3所得配合物對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作用， 分別為對A_549(肺癌)細胞生長抑制率為89. 35%, IC50 = 0. 19 ；對Bel_7402(肝癌)細胞生長抑制率為92. 44%, IC50 = 0. 13 ；對HCT(結腸腺癌)細胞生長抑制率為95. 30%, IC50 = 0. 13 ；對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為98.86%;對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為90. 93% ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為87. 79% .結論這說明，本發明配合物Ti能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例4配合物IA的制備將0.29g Cu(NO3)2 ·3Η20 和 0. 174g 2-甲基-1，10-菲羅啉依次加入 50mL N，N_ 二 甲基甲酰胺(DMF)中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置，數天 后獲得綠色塊狀晶體Z4。Z3 化合物分子式為:{Cu [2-CH3_ (1，10-Phen) ] (NO3) 2 (DMF)}，即 1 個 2_CH3- (1， IO-Phen)，2 個 NO3 禾口 1 個 DMF 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)=C42. 24 (41. 85) ；H 3. 74 (3. 76) ；N 15. 40 (15. 48)； Cu 13. 97(13. 89)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖，分別如圖4A和圖4B所示。配合物IA的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例4所得樣品溶液 ο μ L (即用生理鹽水溶解實施例4所得配合物 晶體Ζ4，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C，5 % CO2培養 3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%
結果表明，實施例4所得配合物Z4對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作用， 分別為對A-549(肺癌)細胞生長抑制率為86. 38%, IC50 = 0. 21 ；對Bel_7402(肝癌)細胞生長抑制率為 90. 49%，IC50 = 0. 15 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為93. 31%，IC50 = 0. 16 ；對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為96.88%;對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為91. 86% ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為85. 76% .結論這說明，本發明配合物Z4能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例5配合物Z5的制備將0. 29g Cu(NO3)2 · 3H20和0. 174g 2_甲基_1，10-菲羅啉依次加入25mL甲醇與 25mL乙腈的混合溶液中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置，數 天后獲得綠色塊狀晶體Z3。Z5 化合物分子式為{Cu[2-CH3-(l，10-Wien)] (NO3)2 (CH3OH) }，即 1 個 2_CH3-(1， 10-Phen)，2 個 NO3 和 1 個 CH3OH 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)=C40. 63(40. 85) ；H 3. 39(3. 36) ；N 13. 54(13. 88)； Cu 15. 35(15. 47).其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖，分別如圖5A和圖5B所示。配合物Z5的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例5所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例5所得配合物 晶體Ζ5，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C，5 % CO2培養 3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例5所得配合物Z5對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作用， 分別為對A_549(肺癌)細胞生長抑制率為86. 38%, IC50 = 0. 21 ；對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為 90. 49%，IC50 = 0. 15 ；對HCT(結腸腺癌)細胞生長抑制率為93.31%, IC50 = 0. 16 ；對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為96.88%;對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為91. 86% ；
對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為85. 76% .結論這說明，本發明配合物Z5能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例6配合物Z6的制備將0.29g CuSO4 · 3H20 和 0. 174g 2，9-二甲基-1，10-菲羅啉依次加入 50mL N, N-二甲基甲酰胺(DMF)中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置， 數天后獲得綠色塊狀晶體Z6。Z6 化合物分子式為{Cu [2，9-CH3_(l，IO-Phen)] (SO4)2 (DMF) }，即 1 個 2， 9-CH3-(l, 10-Phen)，2 個 SO4 和 1 個 DMF 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)=C38. 02(38. 05) ；H 3. 54(3. 56) ；N 7. 83(7. 88)； Sll. 93(11. 97) ；Cu 11. 84(11. 91)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖，分別如圖6A和圖6B所示。配合物Z6的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例6所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例6所得配合物 晶體Ζ6，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C，5 % CO2培養 3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例6所得配合物Z6對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作用， 分別為對A_549(肺癌)細胞生長抑制率為86. 38%, IC50 = 0. 21 ；對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為90. 49%, IC50 = 0. 15 ；對HCT(結腸腺癌)細胞生長抑制率為93.31%, IC50 = 0. 16 ；對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為96.88%;對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為91. 86% ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為85. 76% .結論這說明，本發明配合物Z6能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例7配合物Z7的制備將0. 29g CuSO4 · 3H20 和 0. 174g 2，9- 二甲基 _1，10-菲羅啉依次加入 25mL 甲醇 和25mL乙腈的混合溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置， 數天后獲得綠色塊狀晶體Z7。
Z7 化合物分子式為:{Cu[2，9-CH3_(1，10-Phen) ] (SO4) 2 (CH3OH)}，即 1 個 2，
9-CH3-(l,10-Phen)，2 個 SO4 和 1 個 CH3OH 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)=C36. 33(36. 25) ；H 3. 23(3. 16) ；N 5. 65(5. 88)； S12. 92 (12. 98) ；Cu 12. 82 (12. 89)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖，分別如圖7A和圖7B所示。配合物Z7的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例7所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例7所得配合物 晶體Ζ7，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C，5 % CO2培養 3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例7所得配合物Z7對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作用， 分別為對A_M9(肺癌)細胞生長抑制率為82. 36%，IC5tl = 0. 31 ；對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為86. 38%，IC5tl = 0.洸；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為88. 72 %，IC50 = 0. 27 ；對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為89.76%;對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為87. 37% ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為82. 35% .結論這說明，本發明配合物Z7能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例8配合物Z8的制備將0. 29g CuSO4 ·3Η20 和 0. 174g 2_ 甲基 _1，10-菲羅啉依次加入 50mL N，N- 二甲 基乙酰胺(DMA)中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置，數天后 獲得綠色塊狀晶體Z8。Z8 化合物分子式為:{Cu [2-CH3_ (1，10-Phen) ] (NO3) 2 (DMA)}，即 1 個 2_CH3_ (1，
10-Phen)，2個NO3和1個DMA與1個Cu配位。元素分析計算值(實驗值):C43.54(43. 35) ；H 4. 06(3. 98) ；N 14. 94(14. 88)； Cu 13. 55(13. 61).其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖8A和圖8B所示。配合物Z8的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例8所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例8所得配合物 晶體Ζ8，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C，5 % CO2培養 3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例8所得配合物Z8對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作用， 分別為對A_M9(肺癌)細胞生長抑制率為82. 36%，IC5tl = 0. 31 ；對Bel_7402(肝癌)細胞生長抑制率為86. 38%，IC5tl = 0.洸；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為88. 72 %，IC50 = 0. 27 ；對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為89.76%;對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為87. 37% ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為82. 35% .結論這說明，本發明配合物Z8能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例9配合物Z9的制備將0. 29g CuSO4 · 3H20 和 0. 174g 2，5_ 二甲基 _1，10-菲羅啉依次加入 25mL 甲醇 和25mL乙腈的混合溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置， 數天后獲得綠色塊狀晶體Z9。Z9 化合物分子式為:{Cu[2，5-CH3_(1，10-Phen) ] (NO3) 2 (CH3OH)}，即 1 個 2， 5-CH3-(l, 10-Phen)，2 個 NO3 禾Π 1 個 CH3OH 與一個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)=C42. 11(40. 85) ；H 3. 74(3. 36) ；N 13. 10(13. 88)； Cu 14. 85(14. 67)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖9A和圖9B所示。配合物Z9的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例9所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例9所得配合物 晶體Ζ9，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C，5 % CO2培養 3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無
12血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例9所得配合物Z9對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作用， 分別為對A_549(肺癌)細胞生長抑制率為78. 18%, IC50 = 0. 38 ；對Bel_7402(肝癌)細胞生長抑制率為 82. 56%，IC5tl = 0. 31 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為89. 36 %，IC50 = 0.25;對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為85.78%;對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為82. 32% ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為88. 29% .結論這說明，本發明配合物Z9能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例10配合物ZlO的制備將0. 29g CuSO4 · 3H20 和 0. 174g 2，7_ 二甲基 _1，10-菲羅啉依次加入 25mL 甲醇 和25mL乙腈的混合溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置， 數天后獲得綠色塊狀晶體Z10。ZlO 化合物分子式為{Cu [2，7-CH3-(l，IO-Phen)] (NO3)2 (CH3OH) }，即 1 個 2， 7-CH3- (1，IO-Phen)，2 個 NO3 禾Π 1 個 CH3OH 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)=C42. 11(40. 85) ；H 3. 74(3. 36) ；N 13. 10(13. 88)； Cu 14. 85(14. 67)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖IOA和圖IOB所示。配合物ZlO的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例10所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例10所得配合 物晶體Ζ10，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例10所得配合物ZlO對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A_M9(肺癌)細胞生長抑制率為88. 16%，IC5tl = 0. 21 ；
對Bel_7402(肝癌)細胞生長抑制率為87. 66%, IC50 = 0. 21 ；
對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為92. 48 %，IC50 = 0. 18 ；對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為89.68%;對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為87. 62% ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為92. 189% .結論這說明，本發明配合物ZlO能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例11配合物Zll的制備將0.29g Cu(NO3)2 · 3H20 和 0. 174g 2，5，7_ 三甲基-1，10-菲羅啉依次加入 25mL 甲醇和25mL乙腈的混合溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下 靜置，數天后獲得綠色塊狀晶體Zl 1。Zll 化合物分子式為{Cu[2，5，7-CH3_(l，IO-Phen)] (NO3)2 (CH3OH) }，艮P 1 個 2，5， 7-CH3- (1，IO-Phen)，2 個 NO3 禾Π 1 個 CH3OH 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值):C43. 49 (43. 85) ；H 4. 08 (4. 16) ；N 12. 68 (12. 88)； Cu 14. 38(14. 56)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖IlA和圖IlB所示。配合物Zll的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例11所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例11所得配合 物晶體Zl 1，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例11所得配合物Zll對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A_549(肺癌)細胞生長抑制率為88. 16%, IC50 = 0. 21 ；對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為87. 66%, IC50 = 0. 21 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為92. 48 %，IC50 = 0.18;
對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為89.68%;對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為87. 62% ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為92. 19% .結論這說明，本發明配合物Zll能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例12
配合物Z12的制備將0.29g Cu(NO3)2 ·3Η20 和 0. 174g 2，5，7，9-四甲基-1，10-菲羅啉依次加入 50mL N，N-二甲基乙酰胺(DMA)溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫 下靜置，數天后獲得綠色塊狀晶體Z12。Z12 化合物分子式為{Cu [2，5，7，9_CH3- (1，10-Phen) ] (NO3) 2 (DMA)}，即 1 個 2，5， 7-9-CH3-(l, 10-Phen)，2 個 NO3 和 1 個 DMA 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值):C45. 92 (45. 85) ；H 4. 63 (4. 36) ；N 14. 10 (14. 18)； Cu 12. 79(12. 70)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖12A和圖12B所示。配合物Z12的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例12所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例12所得配合 物晶體Ζ12，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例12所得配合物Z12對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A_549(肺癌)細胞生長抑制率為91. 09%, IC50 = 0. 19 ；對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為89. 88%, IC50 = 0. 20 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為93. 33 %，IC50 = 0. 18 ；對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為90.65%;對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為88. 81% ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為93. 18% .結論這說明，本發明配合物Z12能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例13配合物Z13的制備將0.20g CuSO4 · 3Η20、0· IOgCu(NO3)2 · 3H20 和 0. 174g 2，9_ 二甲基 _1，10-菲羅 啉依次加入50mL N，N-二甲基乙酰胺(DMA)溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液 用乙醚擴散，室溫下靜置，數天后獲得綠色塊狀晶體Z13。Z13 化合物分子式為{Cu [2，9-CH3_(l，10-Phen)] (NO3) (SO4) (DMA)}，即一個 2， 9-CH3-(l, 10-Phen)，1 個 NO3,1 個 SO4 和 1 個 DMA 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)=C40. 60(40. 85) ；H 3. 78(3. 36) ；S 6. 37(6. 46)；N1l. 14(11. 09) ；Cu 12.64(12.69)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖13A和圖1 所示。配合物Z13的細胞實驗 選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例13所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例13所得配合 物晶體Ζ13，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例13所得配合物Z13對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A_549(肺癌)細胞生長抑制率為91. 09%, IC50 = 0. 19 ；對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為89. 88%, IC50 = 0. 20 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為93. 33 %，IC50 = 0. 18 ；對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為90.65%;對BGC-823 (胃癌)細胞生長抑制率為88. 81 % ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為93. 18% .結論這說明，本發明配合物Z13能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例14配合物Z14的制備將0. 20gCu (NO3) 2 ·3Η20 和 0. 174g 2，3，8，9-四甲基 _1，10-菲羅啉依次加入 25mL 甲醇和25mL乙腈的混合溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下 靜置，數天后獲得綠色塊狀晶體Z14。Z14 化合物分子式為{Cu[2，3，8，9-CH3_(l，IO-Phen)] (NO3)2(CH3OHM，即 1 個 2， 3，8，9-CH3-(l，IO-Phen)，2 個 NO3 和 1 個 CH3OH 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值):C44. 79 (44. 85) ；H 4. 39 (4. 36) ；N 12. 29 (12. 88)； Cu 13. 94(13. 89)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖14A和圖14B所示。配合物Z14的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。
實驗組加實施例14所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例14所得配合 物晶體Ζ14，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例14所得配合物Z14對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A_549(肺癌)細胞生長抑制率為88. 92%, IC50 = 0. 30 ；對Bel_7402(肝癌)細胞生長抑制率為79. 87%, IC50 = 0. 27 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為83. 22 %，IC50 = 0.23;對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為86.35%;對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為89. 28% ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為87. 38% .結論這說明，本發明配合物Z14能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例15配合物Z15的制備將0. 20gCu (NO3) 2 · 3H20 和 0. 174g 2，9- 二甲基 _5，6_ 二氯 _1，10-菲羅啉依次加 入50mL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴 散，室溫下靜置，數天后獲得綠色塊狀晶體Z15。Z15 化合物分子式為{Cu [2，9-CH3-5，6-Cl-(l，IO-Phen)] (NO3) 2 (DMF)}，即 1 個 2， 9-CH3-5，6-Cl-(l，IO-Phen)，2 個 NO3 和 1 個 DMF 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值):C37. 95 (37. 85) ；H 3. 16 (3. 06) ；N 13. 02 (13. 08)； C113. 21(13. 19) ；Cu 11.81(11.89)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖15A和圖15B所示。配合物Z15的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例15所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例15所得配合 物晶體Ζ15，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率
腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例15所得配合物Z15對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A-549 (肺癌)細胞生長抑制率為87. 07%, IC50 = 0. 23 ；對Bel_7402(肝癌)細胞生長抑制率為86. 66%，IC5tl = 0.洸；對HCT(結腸腺癌)細胞生長抑制率為91. 22%, IC50 = 0. 20對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為87.55%對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為85. 67%對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為90. 02%結論這說明，本發明配合物Z15能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例16配合物Z16的制備將0. 20gCu(N03)2 ·3Η20 和 0. 174g 5_ 氨基-1，10-菲羅啉依次加入 50mL N，N-二 甲基甲酰胺(DMF)溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置， 數天后獲得綠色塊狀晶體Z16。Z16 化合物分子式為{Cu[5-NH2_(1，10-Phen) ] (NO3)2 (DMF) ]}，即 1 個 5_ΝΗ2_(1， 10-Phen)，2 個 NO3 禾口 1 個 DMF 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)=C44. 79 (44. 85) ；H 4. 39 (4. 36) ；N 12. 29 (12. 28)； Cu 13. 94(13. 89)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖16A和圖16B所示。配合物Z16的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例16所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例16所得配合 物晶體Ζ16，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例16所得配合物Z16對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A-549 (肺癌)細胞生長抑制率為87. 07 %，IC50 = 0.23;對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為86. 66%, IC50 = 0. 26 ；對HCT(結腸腺癌)細胞生長抑制率為91. 22%, IC50 = 0. 20對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為87.55%
對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為85. 67%對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為90. 02%結論這說明，本發明配合物Z16能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例17配合物Z17的制備將0. 20g Cu(NO3)2 ·3Η20 和 0. 174g 5_ 硝基 _1，10-菲羅啉依次加入 50mL N，N_ 二 甲基甲酰胺(DMF)溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用甲醇擴散，室溫下靜置， 數天后獲得綠色塊狀晶體Z17。Z17 化合物分子式為{Cu[5-N02-(l, IO-Phen)] (NO3)2 (DMF)}，即 1 個 5_N02_(1， 10-Phen)，2 個 NO3 禾口 1 個 DMF 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)=C37. 08 (37. 05) ；H 2. 88 (2. 86) ；N 17. 30 (17. 39)； Cu 13. 08(13. 13)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖17A和圖17B所示。配合物Z17的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例17所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例17所得配合 物晶體Ζ17，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例17所得配合物Z17對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A_549(肺癌)細胞生長抑制率為89. 23%, IC50 = 0. 25 ；對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為87. 58%, IC50 = 0. 27 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為90. 78 %，IC50 = 0. 22對HL_60(白血病)細胞生長抑制率為81. 36%對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為82. 77%對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為91. 67%結論這說明，本發明配合物Z17能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例18配合物Z18的制備將0. 20gCu(N03)2 ·3Η20 和 0. 174g 2，9_ 二氯 _1，10-菲羅啉依次加入 50mL N，N_ 二 甲基甲酰胺(DMF)溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙腈和甲醇的混合溶劑擴散，室溫下靜置，數天后獲得綠色塊狀晶體Z18。Z18化合物分子式為{Cu[2,9-Cl-(l, IO-Phen)] (NO3)2 (DMF)}，即 1 個2，9_C1_(1， 10-Phen)，2 個 NO3 禾口 1 個 DMF 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值):C35. 33 (35. 25) ；H 2. 55 (2. 36) ；N 13. 73 (13. 88)； C113. 93 (13. 89) ；Cu 12. 46 (12. 53)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖18A和圖18B所示。配合物Z18的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例18所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例18所得配合 物晶體Ζ18，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例18所得配合物Z18對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為 對A-549 (肺癌)細胞生長抑制率為79. 28 %，IC50 = 0.33;對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為78. 36%, IC50 = 0. 32 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為80. 21 %，IC50 = 0. 29對HL_60(白血病)細胞生長抑制率為79. 18%對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為81. 13%對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為87. 26%結論這說明，本發明配合物Z18能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例19配合物Z19的制備將0. 29g Cu(NO3)2 · 3H20 和 0. 174g 1，10-菲羅啉依次加入 IOmL N, N- 二 甲基乙 酰胺，50ml無水甲醇中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置，數 天后獲得綠色塊狀晶體即配合物Z19。 Z19 化合物分子式為[Cu2 (1，10-Phen) 2 (NO3) 5]，即 2 個 1，10-Phen，5 個 NO3 與 2 個 Cu配位。元素分析計算值(實驗值):C36. 14 (36. 23) ；H 2.01 (2. 09) ；N 15. 81 (15. 93)； Cu 15. 93(15. 72)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖19A和圖19B所示。配合物Z19的細胞實驗
選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例19所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例19所得配合 物晶體Ζ19，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例19所得配合物Z19對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A-549 (肺癌)細胞生長抑制率為87. 47 %，IC50 = 0. 28 ；對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為92. 10% ； IC50 = 0. 73對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為92. 18 %。IC5tl = 0. 44對HL-60 (白血病)細胞生長抑制率為98.55%對BGC-823 (胃癌)細胞生長抑制率為90. 54%對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為84. 87%結論這說明，本發明配合物Z19能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例20配合物Z20的制備將0. 29g Cu(NO3)2 ·3Η20 禾口 0. 174g 1，10-菲羅啉依次加入 IOmL 乙酰丙酮和 50ml
甲醇的混合溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置，數天后 獲得綠色塊狀晶體Z20。Z20 化合物分子式為[Cu (1，10-Phen) (NO3) (AA)]，即 1 個 1，10-Phen，1 個 NO3 和 1個AA (AA是乙酰丙酮的簡稱)與1個Cu配位。元素分析計算值(實驗值)=C62. 42(62. 23) ；H 4. 30(4. 09) ；N 7. 53(7. 25)； Cull. 39(11. 31)其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖20A和圖20B所示。配合物Z20的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例20所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例20所得配合 物晶體Ζ20，濃度為5 μ g/mL)，加每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2 培養3d。
培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例20所得銅配合物Z20對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A-549 (肺癌)細胞生長抑制率為85.57%;對Bel_7402(肝癌)細胞生長抑制率為 95. 94%，IC5tl = 0. 68 ；
對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為92. 92 %，IC50 = 0. 76對HL_60(白血病)細胞生長抑制率為98. 43%, IC50 = 0. 43對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為86. 69%對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為89. 82%結論這說明，本發明配合物Z20能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例21配合物Z21的制備將0J9g CuCl2*0.174g 2，9_ 二甲基-1，10-菲羅啉依次加入 50mL N，N-二甲 基乙酰胺(DMA)溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置，數 天后獲得綠色塊狀晶體Z21。Z21 化合物分子式為{Cu[2，9-CH3-(1，10-Phen)]Cl2(DMA)}，即 1 個 2，9_CH3-(1， 10-Phen)，2個Cl和1個DMA與1個Cu配位。元素分析計算值(實驗值)=C50. 29(50. 23) ；H 4. 87(4. 89) ；N 9. 78(9. 75)； C116. 35(16. 28) ；Cu 14. 78(14. 81).其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖21A和圖21B所示。配合物Z21的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例21所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例21所得配合 物晶體Ζ21，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例21所得銅配合物Z21對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為
對A-549 (肺癌)細胞生長抑制率為83.觀％ ；對Bel_7402(肝癌)細胞生長抑制率為93. 27%, IC50 = 0. 35 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為95. 32 %，IC50 = 0. 32對HL_60(白血病)細胞生長抑制率為96. 66%, IC50 = 0. 28對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為81. 37%對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為88. 92%結論這說明，本發明配合物Z21能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例22配合物Z22的制備將0. 29g CuCl2 和 0. 174g 2,9- 二氯-1，10-菲羅啉依次加入 50mL N, N- 二甲基 乙酰胺(DMA)溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置，數天 后獲得綠色塊狀晶體Z22。Z22 化合物分子式為{Cu[2，9-Cl_(l，10-Phen) ]Cl2 (DMA)}，即 1 個 2，9_C1_(1， 10-Phen)，2個Cl和1個DMA與1個Cu配位。元素分析計算值(實驗值)=C40.81(40. 83) ；H 3. 19(3. 09) ；N 8. 93(8. 95)； C130. 18(30. 09) ；Cu 13.50(13.31)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖22A和圖22B所示。配合物Z22的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例22所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例22所得配合 物晶體Ζ22，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例22所得銅配合物Z22對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A-549 (肺癌)細胞生長抑制率為86.32%;對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為95. 27%, IC50 = 0. 31 ；對HCT(結腸腺癌)細胞生長抑制率為95. 17%, IC50 = 0. 30對HL_60(白血病)細胞生長抑制率為97. 33%, IC50 = 0. 26對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為83. 58%對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為89. 36%結論這說明，本發明配合物Z22能用于制備預防和治療癌癥的藥物。
實施例23配合物Z23的制備將0. 29g CuCl2 和 0. 174g 2，9_ 二甲基-1，10-菲羅啉依次加入 50mL N，N- 二甲 基甲酰胺(DMF)溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置，數 天后獲得綠色塊狀晶體Z23。Z23 化合物分子式為{Cu [2，9-CH3-(l，IO-Phen)] Cl2 (DMF)}，即 1 個 2，9_CH3-(1， 10-Phen)，2個Cl和1個DMF與1個Cu配位。元素分析計算值(實驗值)C40. 81 (39. 98) ；H 4. 91 (4. 99) ；N 10. 11(10. 25)； C117. 09(17. 01) ；Cu 15.沘(15. 31)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖23A和圖2 所示。配合物Z23的細胞實驗 選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例23所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例23所得配合 物晶體Ζ23，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例23所得銅配合物Z23對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A-549 (肺癌)細胞生長抑制率為89.26％ ；對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為96. 18%, IC50 = 0. 23 ；對HCT(結腸腺癌)細胞生長抑制率為98. 02%, IC50 = 0.21對HL_60(白血病)細胞生長抑制率為98. 35%, IC50 = 0. 19對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為86. 69%對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為92. 18%結論這說明，本發明配合物Z23能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例24配合物Z24的制備將0. 29g CuCl2 和 0. 174g 2,9- 二氯-1，10-菲羅啉依次加入 50mL N, N- 二甲基 甲酰胺(DMF)溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置，數天 后獲得綠色塊狀晶體Z24。Z24化合物分子式為{Cu [2，9-Cl_(l，10-Phen)] Cl2 (DMF) }，即 1 個 2，9_C1_(1， 10-Phen)，2個Cl和1個DMF與1個Cu配位。
元素分析計算值(實驗值)=C39. 43(39. 23) ；H 2. 85(2. 79) ；N 9. 20(9. 25)； C131. 31(31. 39) ；Cu 13.91(13.91)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖24A和圖24B所示。配合物Z24的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例M所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例M所得配合 物晶體Ζ24，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例M所得銅配合物ZM對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A_M9(肺癌)細胞生長抑制率為91. 03% ；對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為95. 99%, IC50 = 0. 20 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為98. 31 %，IC50 = 0. 19對HL_60(白血病)細胞生長抑制率為98. 78%, IC50 = 0. 19對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為88. 62%對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為92. 78%結論這說明，本發明配合物ZM能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例25配合物Z25的制備將0. 29g CuCl2和0. 174g 2，9_ 二甲基_1，10-菲羅啉依次加入25mL甲醇和25mL 乙腈混合溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置，數天后獲 得綠色塊狀晶體Z25。Z25 化合物分子式為{Cu [2，9-CH3_(l，IO-Phen)] Cl2 (CH3OH) }，即 1 個 2， 9-CH3-(l, 10-Phen)，2 個 Cl 禾口 1 個 CH3OH 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)=C48. 06(48. 23) ；H 4. 27(4. 09) ；N 7. 48(7. 25)； C118. 96 (18. 92) ；Cu 16. 96 (17. 01)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖25A和圖25B所示。配合物Z25的細胞實驗 選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L，37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例25所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例25所得配合 物晶體Ζ25，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例25所得銅配合物Z25對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A-549 (肺癌)細胞生長抑制率為89.21%;對Bel_7402(肝癌)細胞生長抑制率為91. 13%，IC5tl = 0.沘；對HCT(結腸腺癌)細胞生長抑制率為93. 33%, IC50 = 0.31對HL_60(白血病)細胞生長抑制率為92. 17%, IC50 = 0. 29對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為83. 25%對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為90. 06%結論這說明，本發明配合物Z25能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例沈配合物Z26的制備將0. 15g Cu(NO3)2 ·3Η20、0· 2g CuSO4 ·3Η20、0· 15g Cu (CH3COO) 2 和 0· 174g 2，9_ 二 甲基-1，10-菲羅啉依次加入50mL乙腈溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙 醚擴散，室溫下靜置，數天后獲得綠色塊狀晶體Z26。Z26 化合物分子式為{Cu[2，9-CH3-(1，10-Phen)] (NO3) (SO4) (CH3COO)}，即 1 個 2， 9-CH3-(l, 10-Phen)，1 個 NO3,1 個 SO4 和 1 個 CH3COO 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)=C39. 30(39. 23) ；H 3. 07(3. 09) ；N 8. 60(8. 55)； S27. 40 (27. 31) ；Cu 13. 00 (13. 07)。其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖26A和圖26B所示。配合物Z26的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例沈所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例沈所得配合 物晶體Ζ26，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例沈所得銅配合物Τ2 對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A_M9(肺癌)細胞生長抑制率為91. 03% ；對Bel_7402(肝癌)細胞生長抑制率為93. 88%, IC50 = 0. 35 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為96. 32 %，IC50 = 0. 38對HL_60(白血病)細胞生長抑制率為91. 19%, IC50 = 0. 29對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為80. 06%對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為86. 98%結論這說明，本發明配合物 2 能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例27配合物Ζ27的制備將0. 28g Cu(NO3)2 · 3H20 和 0. 174g 2，9_ 二甲基 _1，10-菲羅啉依次加入 25mL 甲 醇和25mL乙腈的混合溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜 置，數天后獲得綠色塊狀晶體Z27。Z27 化合物分子式為{Cu[2，9-CH3_(l，IO-Phen)] (NO3)2}，即 1 個 2，9_CH3-(1， 10-Phen)，2 個 NO3 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)=C40. 72 (40. 23) ；H 3. 15 (3. 09) ；N 13. 58 (13. 25)； Cu 15. 46(15. 31)其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖27A和圖27B所示。配合物Z27的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例27所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例27所得配合 物晶體Ζ27，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100% 結果表明，實施例27所得銅配合物Z27對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A-549 (肺癌)細胞生長抑制率為90. 19% ；對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為92. 73%, IC50 = 0. 36 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為95. 18 %，IC50 = 0. 35
對HL_60(白血病)細胞生長抑制率為90. 07%, IC50 = 0. 27對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為82. 13%對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為81. 38%結論這說明，本發明配合物Z27能用于制備預防和治療癌癥的藥物。實施例28配合物Z28的制備將0. 15g Cu (NO3)2 和 0. 174g 2，9_ 二氯 _1，10-菲羅啉依次加入 25mL 甲醇和 25mL 乙腈的混合溶劑中，不斷攪拌。反應8小時后過濾，將母液用乙醚擴散，室溫下靜置，數天后 獲得綠色塊狀晶體Z28。Z^ 化合物分子式為{Cu[2，9-Cl_(l，10_Phen)] (NO3)2}，即 1 個 2，9_C1_(1， 10-Phen)，2 個 NO3 與 1 個 Cu 配位。元素分析計算值(實驗值)=C31. 75 (31. 78) ；H 1. 53 (1. 49) ；N 12. 35 (12. 25)； Cu 14. 00(14. 09)其紅外光譜與X-衍射單晶結構圖分別如圖28A和圖28B所示。配合物Z28的細胞實驗選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞A-549 (肺癌)、Bel-7402 (肝癌)、HCT (結腸腺 癌)、HL-60(白血病)、BGC-823(胃癌)、KB(鼻咽癌)用胰酶消化后，用10%小牛血清的 RPMl 1640培養液配成5000個/mL的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種100 μ L， 37°C,5% CO2 培養 24h。實驗組加實施例28所得樣品溶液10 μ L (即用生理鹽水溶解實施例28所得配合 物晶體Ζ28，濃度為5 μ g/mL)，每孔終體積為200 μ L，用1640培養液補足。37°C ,5% CO2培 養3d。培養3d后棄上清液，每孔加入100 μ L新鮮配制的0. 5mg/mL MTT (噻唑藍)的無 血清培養液，37°C繼續培養4h，小心棄上清，并加入200 μ L DMSO溶解MTT formazon沉淀， 用微型超聲振蕩器混勻，在酶標儀上測定波長M4nm處的光密度值。按照如下公式計算腫 瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％ ) = (0D對照-OD實驗)/(0D對照-OD空白)X 100%結果表明，實施例觀所得銅配合物im對多種腫瘤細胞均具有良好的生長抑制作 用，分別為對A_M9(肺癌)細胞生長抑制率為87. 16% ；對Bel-7402 (肝癌)細胞生長抑制率為 91. 73%，IC5tl = 0. 39 ；對HCT (結腸腺癌)細胞生長抑制率為95. 18 %，IC50 = 0. 39 ；對HL_60(白血病)細胞生長抑制率為90. 07%, IC50 = 0. 31 ；對BGC_823(胃癌)細胞生長抑制率為82. 18% ；對KB (鼻咽癌)細胞生長抑制率為85.沈％。結論這說明，本發明配合物Τ2 能用于制備預防和治療癌癥的藥物。以上所述僅為本發明的較佳實施例，對本發明而言僅僅是說明性的，而非限制性 的。本專業技術人員理解，在本發明權利要求所限定的精神和范圍內可對其進行許多改變， 修改，甚至等效，但都將落入本發明的保護范圍內。
權利要求
1.鄰菲羅啉衍生物的銅配合物，是由1，10-鄰菲羅啉或其單位取代或多位取代的衍生 物、酸根和銅離子組成，或由1，10-鄰菲羅啉或其單位取代或多位取代的衍生物、酸根、有 機小分子和銅離子組成。
2.根據權利要求1所述的配合物，其特征在于所述配合物的分子結構式為{Cu [n-(Phen)] (X) (Y) (Ζ)}或{Cu [η-(Phen) ] (X) (Y)}或{Cu2 [η-(Phen) ] 2 (X) J，其中Cu為二價或一價銅離子；n-(Phen)為1，10-鄰菲羅啉，或單位或多位取代的1，10-鄰菲羅啉衍生物，所述取代基 為烷基、硝基、氨基或鹵素等；X與Y分別為硝酸根、硫酸根、乙酸根或鹵素離子，X與Y可以相同也可以不同；Z為N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亞砜、甲醇、乙醇、乙二醇、丙二醇、 丙三醇、丙酮、乙腈或乙酰丙酮等含N和/或0的有機小分子。
3.根據權利要求1所述的配合物，其特征在于所述單位或多位取代的1，10_鄰菲羅啉 取代衍生物為2-取代、2，3-取代、2，4-取代、2，5-取代、2，6-取代、2，7-取代、2，8-取代、 2，9_取代、3-取代、3，4_取代、3，5-取代、3，6-取代、3，7-取代、3，8-取代、3，9-取代、4-取 代、4，5-取代、4，6-取代、4，7-取代、4，8-取代、4，9-取代、5-取代、5，6-取代、5，7-取代、 5，8_取代、5，9_取代、6-取代、6，7-取代、6，8-取代、6，9-取代、7-取代、7，8-取代、7，9-取 代、8-取代、8，9-取代、9-取代、以及其它3位或多位的1，10-鄰菲羅啉取代衍生物；所述 取代基為烷基、硝基、氨基或鹵素等。
4.一種制備權利要求1所述配合物的方法，是將銅鹽與所述1，10-鄰菲羅啉，或所述單 位或多位取代的1，10-鄰菲羅啉衍生物在溶劑中不斷攪拌，反應數小時后過濾、靜置，或用 多種有機溶劑的混合溶劑擴散后靜置、或用乙醚擴散后靜置，幾天后得到所述配合物。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述銅鹽為無機銅鹽或有機銅鹽，或它們 的混合物。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述無機銅鹽包括硝酸銅、氯化銅或硫酸 銅等，所述有機銅鹽包括乙酸銅等。
7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述溶劑為單一有機溶劑或多種有機溶劑 的混合溶劑、或單一無機溶劑、或有機溶劑與無機溶劑的混合溶劑。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于所述有機溶劑包括N，N-二甲基甲酰胺、N， N-二甲基乙酰胺、二甲亞砜、甲醇、乙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇、丙酮、乙腈或乙酰丙酮，所 述無機溶劑包括水。
9.根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述多種有機溶劑的混合溶劑包括甲醇和 乙腈的混合溶劑、甲醇和丙酮的混合溶劑、乙腈和丙酮的混合溶劑、或二氯甲烷與乙腈的混 合溶劑等。
10.權利要求1所述的配合物在制備預防和治療癌和腫瘤藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一類鄰菲羅啉衍生物的銅配合物及其制備方法和應用，是由1，10-鄰菲羅啉或其單位取代或多位取代衍生物、酸根與銅離子組成，還可含有有機小分子。本發明配合物的制備方法，是將1，10-鄰菲羅啉或其單位或多位取代的衍生物與銅鹽在溶劑中攪拌反應，得到所述配合物。本發明配合物合成原料易得，成本低，產品以晶體形式析出，純度大，產率高；而且，該配合物在自然狀態下能穩定存在，并具有良好的水溶性和脂溶性；另外，本發明配合物對肺癌、胃癌、肝癌、結腸腺、白血病、鼻咽癌等多種癌癥細胞均呈現出優良的抑制作用，作用譜廣，應用范圍廣泛。
文檔編號A61P35/02GK102146088SQ20101911403
公開日2011年8月10日 申請日期2010年2月5日 優先權日2010年2月5日
發明者魯曉明 申請人:首都師范大學