專利名稱：改性蠶絲的制備方法及其在制備止血材料中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥領域，特別涉及一種止血高分子材料。
技術背景
在戰場上、自然災害中及各種日常突發性事故中，不可控制的過量出血往往是導致50-80%傷員死亡的主要原因。有效的控制出血成為挽救患者傷亡的關鍵要素。新研發的桑蠶絲蛋白具有良好的生物相容性、生物可降解性、迅速止血和促進傷口愈合等優點。
蠶絲是天然大分子聚合物，天然蠶絲主要由絲素蛋白和絲膠蛋白組成，而絲素蛋白的主要成分有甘氨酸(gly)，丙氨酸(ala)及絲氨酸(ser)。蠶絲蛋白纖維表面疏水， 血漿蛋白與絲素蛋白之間存在強的疏水相互作用，能交聯血漿蛋白從而凝血；此外，凝血因子也能交聯絲素蛋白形成凝塊。作為止血材料，天然蠶絲可用堿性肥皂水煮將絲膠蛋白去掉(脫膠)，僅僅只保留絲素蛋白；此外，絲素蛋白應適當改變其晶體結構，增加吸水性、蛋白酶再吸收及血漿吸收，才能更好的發揮止血功能。天然蠶絲成本低廉，原材料充沛，易于操作，在潮濕環境中強度也較大、對于生長的細胞有生物適應性，藥物可滲透性，生物相容性好，可降解等優點，廣泛運用于生物醫學、生物技術領域，是可研發的最具發展潛力的止血材料。發明內容
本發明的目的之一在于提供改性蠶絲的制備方法及所得的產品，該方法使蠶絲在二級結構發生變化，以β折疊為主，通過該方法所得產品具有較好的止血效果。
為實現上述目的，本發明的技術方案為 改性蠶絲的制備方法，具體包括以下步驟A脫膠處理取天然蠶絲，用脫膠溶液對天然蠶絲進行充分的脫膠處理，得脫膠蠶絲； B改性處理將步驟A所得脫膠蠶絲用水和/或體積分數為1-20%的有機溶劑在37-100°C條件下處理不低于4小時，得改性蠶絲；所述有機溶劑為甲醇、乙醇、甲酸和甲醛和三氟乙酸中的任一種。
進一步，將步驟B改性處理后所得的改性蠶絲用水漂洗干凈，室溫自然晾干或 37°C烘干，得改性蠶絲。
進一步，步驟A中的脫膠處理具體為取天然蠶絲，用脫膠溶液對天然蠶絲進行充分的脫膠處理，在蒸餾沸水煮不低于0. 5小時后，得脫膠蠶絲；所述脫膠溶液為質量分數為 0.1%-10%的陰離子表面活性劑溶液或質量分數為0. 1%-10%的碳酸鈉溶液；所述天然蠶絲和陰離子表面活性劑溶液的質量體積比以g/ml計為1:10-1:1000。
進一步，步驟A中所述陰離子表面活性劑為質量分數為0. 25%的十二烷基硫酸鈉或肥皂；進一步，所述碳酸鈉溶液的溫度為90-100°C ；進一步，步驟B中，所述處理溶液為蒸餾水、體積分數為1-20%的有機溶劑。
進一步，步驟B中，改性處理的溫度為65°C。
所述的制備方法制得的改性蠶絲。
本發明的目的之二在于提供一種改性蠶絲的新應用，該應用為止血技術提供了新思路。
為實現上述目的，本發明的技術方案為 所述的改性蠶絲在制備止血材料中的應用。
進一步，所述改性蠶絲止血劑量為0. 01-lg/L。
本發明的有益效果在于本發明所涉及的改性蠶絲，主要成分為絲素蛋白，通過改造，降低了絲素蛋白的結晶度；改性蠶絲止血效果優于日本及美國學者使用二元溶液改造的蠶絲材料。絲素蛋白經處理適度改性后，蛋白二級結構主要為折疊結構，降低了無規則卷曲結構，這個結構能利于更好地結合血小板，進而迅速促進血栓形成。其所述改性蠶絲材料穩定性佳；在使用相同劑量的情況下，所述改性蠶絲材料與二元溶液處理改性蠶絲材料及云南白藥相比，促凝血效果更好。
為了使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合附圖對本發明作進一步的詳細描述，其中圖1為改造的止血蠶絲材料體外凝結實驗，其中a為蠶絲直接脫膠后檢測結果；b 為本發明的所述改性蠶絲材料檢測結果；c為二元溶液(10%Ca(No3)2甲醇)處理檢測結果。各種絲素蛋白材料均取0. 01克加入抗凝兔血中，其中b在加入后20秒就出現凝結現象，該圖為加入各物質后20分鐘拍攝。結果顯示本發明的止血蠶絲材料在體外能迅速促進血凝結；圖2為改造的止血蠶絲材料掃描電鏡觀察圖譜，其中a為蠶絲直接脫膠后檢測結果； b為所述改性蠶絲材料檢測結果；c為二元溶液(10%Ca(No3)2甲醇)處理檢測結果；圖3為改性蠶絲材料體外凝結實驗掃描電鏡觀察圖譜，a為脫膠蠶絲；b為本發明處理的蠶絲材料；c為二元溶液(10%Ca(No3)2甲醇)處理的蠶絲； 圖4為止血蠶絲材料大鼠肝臟止血。
具體實施方式
為了使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面對本發明的優選實施例進行詳細的描述。以下將參照附圖，對本發明的優選實施例進行詳細描述。優選實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照制造廠商所建議的條件進行。
實施例1改性蠶絲的制備 1脫膠處理天然蠶絲中主要包括兩種蛋白質大約70-80%的絲素蛋白和大約20-28%的絲膠蛋白。 此外還有少量(1-2%)由天然脂肪、鹽和絲蛋白灰組成的“雜質”。脫膠的目的就是使絲膠溶解。脫膠的方法可具體參照《張雨青.蠶絲脫膠方法的比較分析》。也可以采用質量分數為 0.1%-10%的陰離子表面活性劑溶液或質量分數為0. 1%-10%的碳酸鈉溶液，其中，陰離子表面活性包括十二烷基硫酸鈉、肥皂等。當使用質量分數為0.1%-10%的碳酸鈉溶液作為脫膠溶液時，最好使用沸水。總之，目的在于使絲膠充分溶解。并用蒸餾去洗滌去除絲膠。
2改性處理將脫膠處理后的蠶絲用蒸餾水和/或有機溶液進行改性處理，具體為在37°C條件下處理不小于4小時，其目的在于改變絲素蛋白的二級結構。無論是蒸餾水與有機溶液混合后在37°C條件下處理4小時，還是蒸餾水或有機溶液混合后在37°C條件下處理4小時，或用蒸餾水及有機溶液分別在37°C條件下處理共計4小時，均可實現增加β折疊的目的。本實施例采用的是蒸餾水與有機溶液混合后在37°C條件下處理4小時的方案。
蒸餾水、有機溶劑處理工藝參數詳見表1。
權利要求
1.改性蠶絲的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟 A脫膠處理取天然蠶絲，用脫膠溶液對天然蠶絲進行充分的脫膠處理，得脫膠蠶絲； B改性處理將步驟A所得脫膠蠶絲用水和/或體積分數為1-20%的有機溶劑在37-100°C條件下處理不低于4小時，得改性蠶絲；所述有機溶劑為甲醇、乙醇、甲酸和甲醛和三氟乙酸中的任一種。
2.根據權利要求1所述的改性蠶絲的制備方法，其特征在于，將步驟B改性處理后所得的改性蠶絲用水漂洗干凈，室溫自然晾干或37°C烘干，得改性蠶絲。
3.根據權利要求1所述的改性蠶絲的制備方法，其特征在于，步驟A中的脫膠處理具體為取天然蠶絲，用脫膠溶液對天然蠶絲進行充分的脫膠處理，在蒸餾沸水煮不低于0. 5小時后，得脫膠蠶絲；所述脫膠溶液為質量分數為0. 1%-10%的陰離子表面活性劑溶液或質量分數為0. 1%-10%的碳酸鈉溶液；所述天然蠶絲和陰離子表面活性劑溶液的質量體積比以 g/ml 計為 1:10-1:1000。
4.根據權利要求3所述的改性蠶絲的制備方法，其特征在于，步驟A中所述陰離子表面活性劑為質量分數為0. 25%的十二烷基硫酸鈉或肥皂。
5.根據權利要求3所述的改性蠶絲的制備方法，其特征在于，所述碳酸鈉溶液的溫度為 90-100°C。
6.根據權利要求3所述的改性蠶絲的制備方法，其特征在于，步驟B中，所述溶液為蒸餾水、體積分數為10%的有機溶劑。
7.根據權利要求1所述的改性蠶絲的制備方法，其特征在于，步驟B中，改性處理的溫度為650C 0
8.權利要求1-7任一項所述的制備方法制得的改性蠶絲。
9.權利要求1所述的改性蠶絲在制備止血材料中的應用。
10.根據權利要求7所述的應用，其特征在于所述改性蠶絲止血劑量為0.01-lg/L。
全文摘要
本發明涉及一種止血高分子材料，為改性蠶絲，其制備方法，具體包括以下步驟取天然蠶絲，用脫膠溶液對天然蠶絲進行充分的脫膠處理，得脫膠蠶絲；將所得脫膠蠶絲用蒸餾水和/或體積分數為1-20%的甲醇、乙醇、甲酸和甲醛和三氟乙酸任一種在37-100℃條件下處理不低于4小時，得改性蠶絲；其通過改性，降低了絲素蛋白的結晶度，蛋白二級結構主要為β-折疊結構，降低了無規則卷曲結構，這個結構能利于更好地結合血小板，進而迅速促進血栓形成，改性蠶絲材料穩定性佳，促凝血效果更好。
文檔編號A61L15/42GK102505453SQ201110336690
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月31日 優先權日2011年10月31日
發明者吳玉章, 楊霞 申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學