一種抑制藤黃微球菌的金銀花抑菌劑的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種抑制藤黃微球菌的金銀花抑菌劑，屬于中藥領域。抑菌劑中金銀花提取液與水溶性納米銀以75:1～100:1的比例混合，兩種藥物的合用對抑制藤黃微球菌起到協同的作用。本發明的一種金銀花提取物與納米銀抑菌劑與現有的技術相比，解決了常規抑菌方法中金銀花抑菌劑用量較大的問題，同時采用兩種低劑量的抑菌物質減少了微生物耐藥的發生機率、降低了其對人體的毒性，更加的安全。
【專利說明】一種抑制藤黃微球菌的金銀花抑菌劑
【技術領域】
[0001] 本發明屬于中藥領域，尤其涉及一種中藥抑菌組合。
【背景技術】
[0002] 金銀花（Lonicera japonica Thumb)，又名雙花、銀花、忍冬花，為忍冬科多年生纏 繞性木質藤本植物忍冬的花蕾，是我國中草藥資源最重要的成員之一，在我國南北各地均 有分布。其對于人體的生理功能主要為清熱解毒、疏散風熱、涼血止痢。現代醫學研究表 明金銀花富含綠原酸、異綠原酸、黃酮類物質、忍冬甙、肌醇及微量揮發油等，因而其對人體 有積極作用。金銀花可以抗病原微生物，實驗證明金銀花對各種致病菌、病毒，如金黃色葡 萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎雙球菌、百日咳桿菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧 菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、腦膜炎雙球菌、皮膚真菌、流感病毒、鉤端螺旋體等均有不同程度 的抑制作用。另外金銀花還可以增強免疫功能，促進淋巴細胞轉化，增強白細胞的吞噬功 能。金銀花因其較高的醫藥價值和其抗菌性、抗炎性、抗老化、防癌癥等許多醫藥應用而獲 得了人們的關注。
[0003] 中藥制劑濃縮液制成口服液或抑菌劑、涂覆劑等一次用劑量大，影響效果。
[0004]
【發明內容】
[0005] 針對金銀花抑菌劑一次用量大的問題，本發明人經過大量實驗，發現納米銀能有 效增強金銀花提取液抑菌性能，減少金銀花抑菌劑的用量，且采用兩種低劑量的抑菌組合 物，更加的安全本。本發明的目的在于提供一種金銀花納米銀抑菌劑，減少金銀花抑菌劑一 次的用劑量和降低藥品對人體的毒性 本發明提供如下技術方案： 一種抑菌劑，包含金銀花提取液、水溶性納米銀； 金銀花提取液制備包括如下步驟：取干藥材金銀花，加水量為金銀花重量的9倍，經95 °〇水浴提取4 h，再經過減壓濃縮得到提取液；所得提取液經0.22 μ m濾膜過濾。最后提取 液經高壓液相色譜法對提取液中綠原酸含量進行標準定量。
[0006] 抑制大腸桿菌0157:H7時金銀花提取液、水溶性納米銀的體積比為75?100:1。 抑制藤黃微球菌時金銀花提取液、水溶性納米銀的體積比為6. 73?12. 5:1。算體積比時金 銀花提取液中綠原酸含量為23.62 mg/g，水溶性納米銀濃度為10 mg/mL。
[0007] 水溶性納米銀顆粒粒徑為3?10 nm，納米銀外表包覆兩性聚合物。
[0008] 水溶性納米銀粒徑為3?10 nm，外表為羧基，依照下列方法制備：加水量為金銀 花重量的9倍，經95 °C水浴提取4 h，再經過真空旋轉濃縮儀得到提取液。所述水溶性納 米銀依照下列方法制備：取22.8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向 溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性 的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6.7 g 20 mmoL/L十四烷酸銀于100 mL燒杯中，向 燒杯中加入58 mL40 mm〇L/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變 成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數次后，真空干 燥，即得到納米銀粒子粉末。依照本方法制備的水溶性納米銀顆粒與金銀花提取液具有良 好的協同抗菌作用。
[0009] 本發明還涉及上所述抑菌劑在抑制大腸桿菌〇157:H7中的應用。
[0010] 本發明還涉及上述抑菌劑在抑制藤黃微球菌中的應用。
[0011] 本發明的有益效果是：本發明水溶性納米銀能有效增強金銀花抑菌性能，降低金 銀花抑菌劑的用量，兩種藥物的合用對抑制大腸桿菌0157:H7和藤黃微球菌起到協同作 用，同時本抑菌劑采用兩種低劑量的抑菌物質，相對于使用高劑量的金銀花或者水溶性納 米銀，更加的安全，可以作為安全可靠地外用涂覆劑等。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0012] 圖1金銀花提取液與納米銀之比為100:1對大腸桿菌0157:H7協同抑菌作用 (圖la 200 μ L金銀花提取液對大腸桿菌0157: H7的抑制作用，圖lb 2 μ L的納米銀 對大腸桿菌0157:Η7的抑制作用，圖lc 100 μ L金銀花提取液與1 μ L納米銀對大腸桿菌 0157 :Η7的協同抑菌作用。） 圖2金銀花提取液與納米銀之比為75:1對大腸桿菌0157:Η7協同抑菌作用 (圖2a 150 μ L金銀花提取液對大腸桿菌0157: Η7的抑制作用，圖2b 2 μ L的納米 銀對大腸桿菌0157:Η7的抑制作用，圖2c 75 μ L金銀花提取液、1 μ L納米銀對大腸桿菌 0157 :Η7的協同抑菌作用。） 圖3金銀花提取液與納米銀對藤黃微球菌協同抑菌作用 圖3a 200 μ L金銀花提取液對藤黃微球菌的抑制作用，圖3b 16 μ L的納米銀對藤黃 微球菌的抑制作用，圖3c 100 μ L金銀花提取液與8 μ L納米銀對藤黃微球菌的協同抑菌 作用。
[0013] 圖4金銀花提取液與納米銀對藤黃微球菌協同抑菌作用 圖4a 100 μ L金銀花提取液對藤黃微球菌的抑制作用，圖4b 16 μ L的納米銀對藤黃 微球菌的抑制作用，圖4c 50 μ L金銀花提取液與8 μ L納米銀對藤黃微球菌的協同抑菌 作用。
【具體實施方式】
[0014] 實施例中所用試劑均為常規試劑，依照常規方式配制即可。
[0015] 實施例1 1、金銀花提取液的制備過程：稱取干藥材金銀花50 g，加水量為450 mL，在95 °C下提 取4 h，經過真空旋轉濃縮儀后，用0.22 μπι濾膜除去提取液中的雜質和細菌，最后用高效 液相色譜法測得提取液中綠原酸含量為23.62 mg/g。
[0016] 2、水溶性銀納米顆粒制備： 取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的 氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得 到十四烷酸銀；稱取6.7 g濃度為20 mm〇L/L十四烷酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入 58 mL濃度為40 mm〇L/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成 棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數次后，真空干燥， 即得到納米銀粒子粉末。
[0017] 3、金銀花提取液與水溶性納米銀協同抑菌作用。
[0018] a細菌的培養 挑取LB瓊脂培養基上的大腸桿菌0157:H7的單菌落于10 mL LB肉湯培養基中，置于 37 °C培養箱中培養16 h，再按1 %的接種量接種于5 mL的LB肉湯培養基中，37 °C培養4 h后。取1 mL上述菌液用0. 1%的蛋白胨水連續稀釋三個梯度，最終的菌液大約為106 CFU/ mL〇
[0019] b水溶性納米銀與金銀花提取液在抑菌性能上的協同作用 分別取1 mL上述已稀釋好的菌液于1. 5 mL滅菌的離心管中，向1號離心管中分別加 入200 yL金銀花提取液(綠原酸含量為23. 62 mg/g，下同），向2號離心管中加入2 yL 濃度為10 mg/mL的水溶性納米銀，向3號離心管中加入100 μ L金銀花提取液和1 μ L濃 度為10 mg/mL的水溶性納米銀，不加入任何上述抑菌劑。為保證每管液體最終體積相等， 差量用0.1%的蛋白胨水補齊。置于37 °C培養2 h。每組實驗平行三次。
[0020] C平板計數 將實驗組待測液用PBS連續稀釋兩個梯度，10°、10'10_2各取出200 μ L分別均勻涂布 在 LB固體平板上；空白組連續稀釋四個梯度，從ΙΟ'ΙΟ'ΚΓ4三個梯度分別均涂布在 LB固體平板上。平板吹干后，37°C倒置培養12 h，長出菌落后計數，以30-300個菌落 形成單位（CFU)為有效的計數范圍。每毫升原菌液活菌數=平板計數*稀釋倍數*5 實驗結果如下：
【權利要求】
1. 一種抑制藤黃微球菌的金銀花抑菌劑，其特征在于由金銀花提取液、水溶性納米銀 組成；所述金銀花提取液制備包括如下步驟：加水量為金銀花重量的9倍，經95 °C水浴 提取4 h，再經過真空旋轉濃縮儀得到提取液；所述水溶性納米銀依照下列方法制備：取 22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化 鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四 烷酸銀；稱取6.7 g濃度為20 mmol/L十四烷酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL 濃度為40 mmol/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不 溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數次后，真空干燥，即得到 納米銀粒子粉末；所述菌為藤黃微球菌；抑制藤黃微球菌時金銀花提取液、水溶性納米銀 的體積比為6. 73?12. 5:1，金銀花提取液中綠原酸含量為23. 62mg/g，水溶性納米銀濃度 為 10mg/mL〇
2. 如權利要求1所述的金銀花抑菌劑，其特征在于所得提取液經0. 22 μ m濾膜過濾。
3. 如權利要求Γ2任一所述金銀花抑菌劑在制備抑制藤黃微球菌藥物中的應用。
【文檔編號】A61K36/355GK104147076SQ201410383216
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2012年9月28日 優先權日:2012年9月28日
【發明者】許恒毅, 魏華, 曲鋒, 熊勇華, 賴衛華, 徐鋒, 萬翠香, 郭亮 申請人:南昌大學