一種同時分離藤黃中四種藤黃酸類成分的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物醫藥技術領域，具體涉及一種同時分離藤黃中四種藤黃酸類成分 的方法。
【背景技術】
[0002] 藤黃科植物藤黃GarciniahanburyiHook.f.所分泌的膠狀樹脂，干燥后，呈圓柱 狀或不規則塊狀物，含藤黃酸、新藤黃酸、別藤黃酸等酸類成分。近年來，我國學者對中藥藤 黃中的活性成分做了大量的研宄。經研宄發現，藤黃酸對多種腫瘤顯示較強的抗腫瘤活性， 并在有效劑量范圍內毒副作用比較小，對腫瘤細胞的抑制有非常高的選擇性，能選擇性的 殺死癌細胞，而對正常動物造血系統和免疫功能沒有影響。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的在于提供了一種同時分離藤黃中四種藤黃酸類成分的方法，提高了 對藤黃的利用價值。
[0004] 為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：
[0005] -種同時分離藤黃中四種藤黃酸類成分的方法，包括如下步驟：
[0006]S1、將藤黃原藥材粉碎，定量稱取lKg，置于20L提取罐中，10L丙酮提取兩次，每次 3h，過濾，合并兩次的濾液，得提取液；
[0007]S2、將步驟S1所得的提取液旋轉蒸發濃縮至800mL，得到藤黃丙酮濃縮液，加入 1600mL水，充分攪拌溶解，室溫靜置24h后，過濾，得不溶物；
[0008]S3、往步驟S2所得的不溶物中加入40%的丙酮溶液，直至不溶物完全溶解后，過 高速離心機離心，得上清液；
[0009] S4、將步驟S3所得的上清液進樣到已處理好的BS-16型大孔樹脂層析柱中，依次 用3倍柱體積的蒸餾水洗脫，3倍柱體積的40%丙酮洗脫，3倍柱體積的100%丙酮洗脫，得 藤黃酸類大孔樹脂洗脫液，濃縮至浸膏狀，用乙醇溶解（20g/100mL);
[0010] S5、取步驟S4所得的溶液采用制備液相色譜分離。用初始流動相平衡色譜柱 20min，每次進樣體積5mL，按設定梯度洗脫，洗脫梯度見表1，紫外檢測器實時監控，收集保 留時間為8.Omin、10. 3min、17min(為17. 5min與17. 9min的混合樣品）的3個組分；20min 以后，按照梯度初始比例平衡色譜柱，再次進樣，共進樣6次，將收集得到的洗脫組分按保 留時間合并相同部分，濃縮，減壓回收，室溫靜置8h，析出大量粉末，過濾，50°C干燥12小 時，得廣品；
[0011] S6、將步驟S5所得的保留時間為17min時所收集樣品，用乙醇溶解成濃度為 5mg/mL的樣品，在步驟S5所述條件下反復進樣多次，每次進樣體積lmL，收集保留時間為 17. 5min和17. 9min的流出液，流出液減壓濃縮，室溫靜置8h，析出粉末，過濾，50°C干燥12 小時，得R_藤黃酸和S-藤黃酸；
[0012] S7、所得各組份產品經HPLC純度分析為98. 5 % ;分析條件為：C18 (5ym， 250mmX4. 6mm)，流動相為乙腈：水：磷酸=85 : 14. 8 : 0. 2,檢測波長為360nm，流速為lmL/min，柱溫為 25°C。
[0013] 其中，所述步驟S3中高速離心機的頻率為25000r/min。
[0014] 其中，所述步驟55中的色譜柱為(318(1〇11111，25〇111111\50臟）；紫外檢測波長為 360nm;洗脫流速為60mL/min;洗脫梯度為：洗脫劑米用乙腈-水-磷酸體系，首先用體積百 分比為70%的乙腈，體積百分比為0.2%的磷酸洗脫；再用體積百分比為80%的乙腈，體積 百分比為0. 2%的磷酸洗脫；最后用體積百分比為95%乙腈，體積百分比為0. 2%的磷酸洗 脫，20min完成一個分離周期。
[0015] 其中，所述步驟S5中的產品為：保留時間8.Omin為2a-羥基-3 0 -乙酰氧基白 樺脂酸，10. 3min為新藤黃酸，17min為R-藤黃酸和S-藤黃酸兩種異構體的混合物。
[0016] 經檢測：所得藤黃酸類各組份，保留時間8.Omin為2a-羥基-3 0 -乙酰氧基白樺 脂酸，10. 3min為新藤黃酸，17. 5min和17. 9min分別為R-藤黃酸和S-藤黃酸。
[0017] 本發明具有以下有益效果：
[0018] 本發明工藝簡單，可以獲得四種藤黃酸類成分，提高了對藤黃的利用價值。
【附圖說明】
[0019] 圖1為本發明實施例中藤黃大孔樹脂丙酮洗脫部分的HPLC圖譜。
[0020]圖2為本發明實施例中藤黃中各種藤黃酸類單體成分分離的制備HPLC圖譜。
【具體實施方式】
[0021] 為了使本發明的目的及優點更加清楚明白，以下結合實施例對本發明進行進一步 詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發 明。
[0022] 本發明實施例提供了一種同時分離藤黃中四種藤黃酸類成分的方法，包括如下步 驟：
[0023] S1、將藤黃原藥材粉碎，定量稱取lKg，置于20L提取罐中，10L丙酮提取兩次，每次 3h，過濾，合并兩次的濾液，得提取液；
[0024] S2、將步驟S1所得的提取液旋轉蒸發濃縮至800mL，得到藤黃丙酮濃縮液，加入 1600mL水，充分攪拌溶解，室溫靜置24h后，過濾，得不溶物；
[0025] S3、往步驟S2所得的不溶物中加入40%的丙酮溶液，直至不溶物完全溶解后，過 高速離心機離心，離心機的頻率為25000r/min，得上清液；
[0026] S4、將步驟S3所得的上清液進樣到已處理好的BS-16型大孔樹脂層析柱中，依次 用3倍柱體積的蒸餾水洗脫，3倍柱體積的40%丙酮洗脫，3倍柱體積100%丙酮洗脫，得藤 黃酸類大孔樹脂洗脫液，濃縮至浸膏狀，用乙醇溶解（20g/100mL);
[0027] S5、取步驟S4所得的溶液采用制備液相色譜分離。用初始流動相平衡色譜柱 20min，色譜柱為cl8 (10ym，250mmX50mm);紫外檢測波長為360nm;洗脫流速為60mL/min; 洗脫梯度如表1所示：洗脫劑采用乙腈-水-磷酸體系，首先用體積百分比為70 %的乙腈， 體積百分比為0. 2%的磷酸洗脫；再用體積百分比為80%的乙腈，體積百分比為0. 2%的磷 酸洗脫；最后用體積百分比為95 %乙腈，體積百分比為0. 2%的磷酸洗脫，20min完成一個 分離周期。
[0028]表1制備液相色譜的洗脫梯度
【主權項】
1. 一種同時分離藤黃中四種藤黃酸類成分的方法，其特征在于，包括如下步驟： 51、 將藤黃原藥材粉碎，定量稱取lKg，置于20L提取罐中，IOL丙酮提取兩次，每次3h， 過濾，合并兩次的濾液，得提取液； 52、 將步驟Sl所得的提取液減壓濃縮至800mL，得到藤黃丙酮濃縮液，加水1600mL，充 分攪拌溶解，室溫靜置24h后，過濾，得不溶物； 53、 往步驟S2所得的不溶物中加入40%的丙酮溶液，直至不溶物完全溶解后，用高速 離心機離心，得上清液； 54、 將步驟S3所得的上清液進樣到己處理好的BS-16型大孔樹脂層析柱中，依次用3 倍柱體積的蒸餾水洗脫，3倍柱體積40 %丙酮洗脫，3倍柱體積100 %丙酮洗脫，得藤黃酸類 大孔樹脂洗脫液，濃縮至浸膏狀，用乙醇溶解； 55、 取步驟S4所得的溶液采用制備液相色譜分離。首先用初始流動相平衡色譜 柱20min，每次進樣體積5mL，按設定梯度洗脫，紫外檢測器實時監控，收集保留時間為 8.OmirulO. 3min、17min(為 17. 5min與 17. 9min的混合樣品）的 3 個組分；20min以后，按 照梯度初始比例平衡色譜柱，再次進樣，共進樣6次，將收集得到的洗脫組分按保留時間合 并相同部分，濃縮，減壓回收，室溫靜置8h，析出大量粉末，過濾，50°C干燥12小時，得產品； 56、 將步驟S5所得的保留時間為17min時所收集樣品，用乙醇溶解成濃度為5mg/mL 的樣品，在步驟S5所述條件下反復進樣多次，每次進樣體積lmL，收集保留時間為17.Smin 和17. 9min的流出液，流出液減壓濃縮，室溫靜置8h，析出粉末，過濾，50°C干燥12小時，得 R-藤黃酸和S-藤黃酸； 57、 所得各組份產品經HPLC純度分析為98. 5 % ;分析條件為：cl8(5ym， 250mmX4. 6mm)，流動相為乙腈：水：磷酸=85 : 14. 8 : 0. 2,檢測波長為360nm，流速為 lmL/min，柱溫為 25°C。
2. 根據權利要求1所述的一種同時分離藤黃中四種藤黃酸類成分的方法，其特征在 于，所述步驟S3中高速離心機的頻率為25000r/min。
3. 根據權利要求1所述的一種同時分離藤黃中四種藤黃酸類成分的方法，其特征在 于，所述步驟S5中的色譜柱為cl8 (10ym，250mmX50mm);紫外檢測波長為360nm;洗脫流 速為60mL/min;洗脫梯度為：洗脫劑采用乙腈-水-磷酸體系，首先用體積百分比為70% 的乙腈，體積百分比為0.2%的磷酸洗脫；再用體積百分比為80%的乙腈，體積百分比為 0. 2%的磷酸洗脫；最后用體積百分比為95%乙腈，體積百分比為0. 2%的磷酸洗脫，20min 完成一個分離周期。
4. 根據權利要求1所述的一種同時分離藤黃中四種藤黃酸類成分的方法，其特征在 于，所述步驟S5中的產品為：保留時間8.Omin為2a-羥基-3 0 -乙酰氧基白樺脂酸， 10. 3min為新藤黃酸，17min為R-藤黃酸和S-藤黃酸兩種異構體的混合物。
【專利摘要】本發明公開了一種同時分離藤黃中四種藤黃酸類成分的方法，包括如下步驟：藤黃藥材粉碎后用丙酮提取得提取液，提取液減壓濃縮后加入水，充分攪拌溶解，過濾，得不溶物；不容物用40％的丙酮溶液至完全溶解，離心，得上清液；將上清液進樣到己處理好的BS-16型大孔樹脂層析柱中洗脫，得洗脫液，洗脫液濃縮至浸膏狀后，用乙醇溶解；采用制備液相色譜分離得四種藤黃酸類組分2α-羥基-3β-乙酰氧基白樺脂酸、新藤黃酸、R-藤黃酸和S-藤黃酸。本發明工藝簡單，可以同時獲得四種藤黃酸類成分，提高了對藤黃的利用價值。
【IPC分類】C07D493-20, C07J63-00
【公開號】CN104817569
【申請號】CN201510111176
【發明人】王曉玲, 唐少旗, 楊得鎖, 肖健
【申請人】寶雞文理學院
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年3月7日