拳參提取物在抑制酪氨酸酶活性中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于中藥領域，具體涉及拳參提取物在抑制酪氨酸酶活性中的應用。
【背景技術】
[0002] 大多數色素障礙性皮膚病如雀斑、黃褐斑以及黑化病等發病機理尚不完全清楚， 其中黃褐斑治療最為困難，且以面部的面頰、前額、上唇、鼻部和下頦等為好發區域，主要由 遺傳因素、紫外線照射、妊娠、口服避孕藥或抗癲癇藥物引起。多見于東方中青年女性，在東 南亞其發病人數約占皮膚科就診病人數的〇. 25~4%，孕婦中發病率為50~70%，口服避孕 藥者發病率為8~29%，且部分患者分娩或停藥后色斑還可持續存在，黃褐斑等色素沉著性 皮膚病由于影響患者的容貌，給患者帶來很大的心理負擔。但由于迄今為止其發病原因尚 未完全清楚，大多數色素障礙性皮膚病治療的方法和藥物的治療效果都不盡人意，普遍存 在著治療周期長，毒副作用大，病人依從性差，效果不穩定，療效常因人而異等缺陷。因此尋 求毒副作用小、療效確切的脫色劑成為科研工作者的努力方向。
[0003] 酪氨酸酶（Tyrosinase)是生物體黑色素合成的關鍵酶，兼有加氧酶和氧化酶的雙 重功能，它能夠把單酚催化成二酚，并把二酚氧化成醌；醌在非酶促條件下形成最終的反應 產物黑色素。酪氨酸酶抑制劑就是通過抑制酪氨酸酶活性從而抑制黑色素生成。酪氨酸酶 的異常過量表達可導致人體的色素沉著性疾病。因此酪氨酸酶抑制劑通過破壞酪氨酸酶活 性，從而達到減少皮膚中黑色素的目的，進而用于治療目前常見的色素沉著疾病如雀斑、黃 褐斑、老年斑和黑色素瘤等，可廣泛應用于醫藥和化妝品行業。
[0004] 由于酪氨酸酶在醫藥、日用化工領域的潛在應用前景，其活性研究成為研究的焦 點。目前，已有不少來源于化學合成和天然產物的酪氨酸酶抑制劑作為藥品、化妝品（美白 齊IJ)、食品添加劑及生物殺蟲齊IJ。氫醌、曲酸及其衍生物、壬二酸、乙二醇酸、維生素C及其衍 生物、煙酰胺等化學物質都可以抑制酪氨酸酶，也被廣泛用于美白化妝品中。曲酸作為一種 酪氨酸酶抑制劑，由于其不穩定，且具有致癌和致過敏等毒副作用；氫醌化合物具有強烈的 酪氨酸酶抑制活性，但由于其可以誘導皮膚病及具有細胞毒性，許多國家已經禁止使用，且 有些酪氨酸酶抑制劑發揮作用時，需要借助汞（即水銀）做催化劑。故現有的酪氨酸酶抑制 劑在抑制效果、穩定性或安全性等多方面均存在著不同程度的缺陷，因此繼續尋找抑制效 果好、性質穩定、安全溫和的酪氨酸酶抑制劑仍然具有十分重要的意義。
[0005] 隨著酪氨酸酶抑制劑的不斷開發與應用，以及"純天然產品"回歸主流的趨勢下， 天然產物酪氨酸酶抑制劑的開發研究越來越得到重視。因此，從天然植物中尋找安全、有效 的酪氨酸酶抑制劑已成為當前醫藥和化妝品行業研究的趨向。
[0006] 拳參為寥科植物拳PolygonumbistortaL?的干燥根莖，別名曹河車、紫參、奸參、 山蝦等，主要分布在河南、河北、吉林、山東、遼寧、四川等地。味甘澀，性涼，具有清熱解毒、 止瀉、鎮驚息風、止血等功效，用于治療赤痢、熱瀉、肺熱咳嗽、癰腫、痔瘡出血等。現代研究 表明拳參還具有抗氧化、抗炎、抗病毒、鎮痛、抗衰老、降血脂等功效。
[0007] 至今為止，尚未發現拳參及其提取物具有抑制酪氨酸酶活性作用的研究與報道。
【發明內容】
[0008] 本申請的發明人在長期研究拳參的醫藥用途的過程中發現，拳參提取物對酪氨酸 酶活性具有顯著的抑制作用。
[0009] 本發明的一個目的在于提供拳參提取物在抑制酪氨酸酶活性中的應用。
[0010] 根據本發明，所述拳參提取物可用于制備預防和治療色素沉著性疾病的藥物或化 妝品。
[0011] 根據本發明，所述拳參提取物的制備是以乙醇為提取溶劑，從拳參中提取得到拳 參醇提取物。
[0012] 根據本發明，所述乙醇為體積分數為70%的乙醇。
[0013] 根據本發明，所述提取為加熱回流提取，至少提取1次，每次提取時間為1~4h。
[0014] 根據本發明的優選實施例，所述提取為加熱回流提取3次，每次提取時間為2h。
[0015] 根據本發明，所述拳參提取物的制備還包括大孔吸附樹脂純化的步驟。
[0016] 根據本發明，所述大孔吸附樹脂純化的步驟包括：采用大孔吸附樹脂對拳參醇提 取物進行純化，先用水洗脫，再用體積分數為30%~90%的乙醇依次洗脫，分別收集乙醇洗 脫液，減壓濃縮，冷凍真空干燥。
[0017] 本發明的有益效果：在本申請的研究中發現，應用本發明的提取方法制備的拳參 提取物對酪氨酸酶均有較強的抑制作用，且該拳參提取物較現在世界上公認的美白劑曲酸 的抑制活性強、穩定性好，更無曲酸的致癌、致過敏等毒副作用，可作為一種新型潛在的預 防、治療色素沉著性疾病藥物或化妝品，對雀斑、黃褐斑、老年斑等皮膚色素沉著性疾病具 有一定的預防、改善及治療的作用，在藥物和化妝品領域具有廣泛的應用前景。
【具體實施方式】
[0018] 以下結合具體實施例，對本發明作進一步說明。應理解，以下實施例僅用于說明本 發明而非用于限定本發明的范圍。
[0019] 實施例1、拳參不同提取物的制備方法
[0020] 1. 1、拳參醇提取物的制備
[0021] 取拳參藥材粗粉50g，加10倍量70%乙醇回流提取三次，每次2h，過濾，合并濾液， 濾液減壓濃縮回收乙醇，得浸膏，將浸膏冷凍真空干燥，即得拳參醇提取物。
[0022] 1. 2、拳參30%、60%和90%乙醇洗脫部位提取物的制備
[0023] 取拳參藥材粗粉50g，加500ml70%乙醇回流提取3次，每次2h，過濾，收集濾液，減 壓濃縮回收乙醇，濃縮至100ml，即得每Iml濃縮液相當于0. 5g生藥粗粉的拳參醇提取溶 液。
[0024] 采用DlOl型大孔吸附樹脂對拳參醇提取溶液進行純化，上柱藥液的濃度為每Iml 藥液相當于〇. 5g生藥，且藥液pH為7,上柱中藥材量與樹脂量的比例為1:6,吸附速率為 3Bv/h;在洗脫過程中，先用水洗脫6Bv，水洗脫速率為6Bv/h;接著用6Bv濃度為30%、60%和 90%的乙醇依次洗脫，洗脫速率均為3Bv/h，分別收集30%、60%和90%的乙醇洗脫液，再將收 集到的30%、60%和90%的乙醇洗脫液進行減壓濃縮回收乙醇，得浸膏，并將浸膏冷凍真空干 燥，即得拳參30%、60%和90%乙醇洗脫部位提取物。
[0025] 實施例2、拳參不同提取物對酪氨酸酶抑制的活性分析
[0026] 實驗材料：酪氨酸酶、曲酸、L-DOPA均購自Sigma公司。
[0027] 受試藥物：拳參不同提取物(實施例1制備的樣品)，溶解于DMSO中，制備得60mg/ mL母液；曲酸溶解于DMSO中，制得15mg/mL母液。
[0028] 實驗方法：96孔板中每孔加入25iiL20iig/mL酪氨酸酶及25iiL待測樣品，混勻， 25°C孵育IOmin后，每孔加入50iiL6mML-DOPA啟動反應，25°C避光孵育5min，于475nm處 讀取吸光度值(每孔均做空白對照〈以緩沖液代替酪氨酸酶〉以扣除提取物顏色對吸光度 值的影響)。
[0029] 實驗結果如表1和表2所示。
[0030] 表1、30iig/mL濃度下不同拳參提取物對酪氨酸酶的抑制效果
[0031]
【主權項】
1. 拳參提取物在抑制酪氨酸酶活性中的應用。
2. 如權利要求1所述的拳參提取物在抑制酪氨酸酶活性中的應用，其特征在于，用于 制備預防和治療色素沉著性疾病的藥物或化妝品。
3. 如權利要求1或2所述的拳參提取物在抑制酪氨酸酶活性中的應用，其特征在于，所 述拳參提取物的制備是以乙醇為提取溶劑，從拳參中提取得到拳參醇提取物。
4. 如權利要求3所述的拳參提取物在抑制酪氨酸酶活性中的應用，其特征在于，所述 乙醇為體積分數為70%的乙醇。
5. 如權利要求3所述的拳參提取物在抑制酪氨酸酶活性中的應用，其特征在于，所述 提取為加熱回流提取，至少提取1次，每次提取時間為1~4h。
6. 如權利要求5所述的拳參提取物在抑制酪氨酸酶活性中的應用，其特征在于，所述 提取為加熱回流提取3次，每次提取時間為2h。
7. 如權利要求3所述的拳參提取物在抑制酪氨酸酶活性中的應用，其特征在于，所述 拳參提取物的制備還包括大孔吸附樹脂純化的步驟。
8. 如權利要求7所述的拳參提取物在抑制酪氨酸酶活性中的應用，其特征在于，所述 大孔吸附樹脂純化的步驟包括：采用大孔吸附樹脂對拳參醇提取物進行純化，先用水洗脫， 再用體積分數為30%~90%的乙醇依次洗脫，分別收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，冷凍真空干 燥。
【專利摘要】本發明公開了一種拳參提取物的新用途，本發明所述拳參提取物是以拳參為原料，用乙醇提取制備，并經大孔吸附樹脂純化得到。本發明的拳參提取物的新用途是該提取物具有較好的酪氨酸酶活性抑制作用，可用于制備預防和治療色素沉著性疾病的藥物或化妝品。
【IPC分類】A61K8-97, A61P17-00, A61K36-704, A61Q19-02
【公開號】CN104771456
【申請號】CN201410017256
【發明人】王滔, 王永兵, 肖功勝, 宗偉英, 雷輝, 沈雯, 席曉榮
【申請人】中國科學院上海生命科學研究院湖州營養與健康產業創新中心
【公開日】2015年7月15日
【申請日】2014年1月15日