重組人干擾素α2b凝膠及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及藥物制劑領域，具體涉及一種重組人干擾素a 2b凝膠及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 重組人干擾素a 2b凝膠是利用基因工程技術獲得的重組人干擾素為原料，與能 穩定重組人干擾素a 2b活性的穩定劑、保濕劑、增稠劑所形成的一種水性凝膠制劑，其適 應癥是用于宮頸糜爛、尖銳濕疣、帶狀皰疹、口唇皰疹及生殖器皰疹的治療。重組人干擾素 a 2b凝膠的臨床療效主要與重組人干擾素a 2b的生物活性有關，但是重組人干擾素a 2b 作為一種蛋白質，因受各種因素的影響，其結構往往會被破壞而失去生物活性，因此在傳統 的制劑生產過程中需要加入人血清白蛋白作為保護劑，保持其生物活性，然而人血白蛋白 的市場供應偏緊，來源困難，價格昂貴，大大地增加了藥品成本，因此篩選合適的穩定劑替 換人血白蛋白就顯得較為迫切和重要。
[0003] 申請人在先申請了名稱為"重組人干擾素a 2b栓劑及其制備方法（專利號為 CN101612144A) "和"重組人干擾素a 2b乳膏及其制備方法（專利號為CN102657851A) "的 兩份發明專利，這兩份專利公開的重組人干擾素a 2b栓劑、乳膏均采用了藥用明膠作為穩 定劑來替代傳統制備方法所用的人血白蛋白，基于這兩份發明專利的技術方案，申請人想 到也直接采用藥用明膠來替代人血白蛋白來進行重組人干擾素a 2b凝膠的制備，但是經 過大量的試驗研究發現，雖然在先公開的兩種劑型試劑與重組人干擾素a 2b凝膠的劑型 不同，但是實際采用藥用明膠為穩定劑，再結合現有常規的凝膠基質原料進行重組人干擾 素a 2b凝膠的制備時發現除了藥用明膠和重組人干擾素a 2b這兩種原料外，凝膠基質等 原料的選取以及添加比例的選擇都會對凝膠劑的穩定性、藥效有很大的影響，比如中國期 刊《中國藥物與臨床》的2008年第8卷第9期中的《重組人干擾素a 2b卡波姆凝膠劑的制 備及質量控制》一文中記載了凝膠劑的處方組成為重組人干擾素a 2b、卡波姆、甘油、薄荷 腦、丙二醇、無水乙醇、氫氧化鈉、羥苯乙酯、水適量，但是該文中公開的凝膠劑的制備方法 中并未給出上述各原料的具體添加比例或者范圍，而申請人僅通過該文公開的處方以及制 備方法結合常規的卡波姆、甘油、丙二醇等原料的添加范圍制備得到的凝膠劑難以成型。因 此，要想得到一種能夠穩定性好、藥效顯著，可安全有效使用的重組人干擾素a 2b凝膠，這 還有待于技術人員的深入研究。
【發明內容】
[0004] 本發明的首要目的是提供一種重組人干擾素a 2b凝膠，該凝膠是以無血清物質 作為保護劑，該無血清物質來源廣泛、價格便宜、生產成本低且無毒無害。
[0005] 為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：一種重組人干擾素a 2b凝膠，其處 方組成為：
[0006]
[0007] 余量為注射用水；
[0008] 所述的輔料包括丙二醇，吐溫80, EDTA二鈉、羥苯乙酯和甘油。
[0009] 本發明公開的處方中所用的重組人干擾素a 2b的生物學活性為LOXIO9~ 5. OX109IU，其代表的是每Img重組人干擾素a 2b蛋白質的生物學活性不低于1.0 XIO8國 際單位，上述一個制劑處方可制成一千支重組人干擾素a 2b凝膠，其采用無血清物質的藥 用明膠作為重組人干擾素a 2b的保護劑，所述的藥用明膠是動物膠原經溫和斷裂后的產 物，是一種成分復雜的高分子水溶性蛋白質混合物，在藥劑中應用廣泛，且價格便宜、生產 成本低、無毒無害、保護作用明顯，采用本發明公開的處方可成功地將藥用明膠作為重組人 干擾素a 2b凝膠的保護劑，大大降低了重組人干擾素a 2b凝膠生產成本，且制得是產品的 穩定性好，另外，本發明以卡波姆作為基質制作的重組人干擾素a 2b凝膠易涂展、無油膩 性，且附著性和均勻性良好。
[0010] 具體的方案為：所述處方中的藥用明膠含200g;所述處方中的pH調節劑為三乙 醇胺；所述輔料中丙二醇、吐溫80、EDTA二鈉、羥苯乙酯和甘油的質量比為2~12:0. 2~ 2:0. 01~0. 2:0. 05~0. 3:5~12,優選的，所述輔料中丙二醇、吐溫80、EDTA二鈉、羥苯乙 酯和甘油的質量比為2~8:0. 2~1:0. 01~0. 1:0. 05~0. 1:5~8 ;所述處方中的pH緩 沖液是pH為5. 0~7. 5、濃度為0. 1~0. 4M的磷酸鹽緩沖液。
[0011] 本發明的另外一個目的是提供一種如上所述的重組人干擾素a 2b凝膠的制備方 法，其步驟如下：
[0012] a)將卡波姆置于50~100倍重量的注射用水中溶脹過夜；
[0013] b)稱取丙二醇、吐溫80、EDTA二鈉、甘油和羥苯乙酯混合，加入1~2倍重量的注 射用水并置于70~80°C水浴條件下加熱攪拌至羥苯乙酯完全溶解，將溶解液加入到溶脹 好的卡波姆基質溶液中，混勻，加入三乙醇胺調節pH至5. 0~7. 5,濕熱滅菌0. 5~2h，得 卡波姆基質待用；
[0014] C)用pH緩沖液將藥用明膠溶解，加壓加溫滅菌處理，冷卻至25°C以下，然后加入 重組人干擾素a 2b溶解，攪拌均勻待用；
[0015] d)將步驟c的重組人干擾素a 2b明膠溶液加入到步驟b的卡波姆基質中，攪拌均 勻后裝于軟管或婦科推注器內，即得成品。
[0016] 采用上述技術方案產生的有益效果在于：采用磷酸鹽緩沖液將固態的藥用明膠溶 解，并且將其維持在一定的酸堿值范圍內，這樣有利于保護重組人干擾素a 2b的活性，待 藥用明膠溶解后，即可進行加壓加溫滅菌，具體的，根據產品的制備方法和藥用明膠的化學 性質，此過程必須在高壓條件下濕熱滅菌，實際在進行滅菌操作時可以置于滅菌鍋或滅菌 柜中在壓強為0. 05~0.IMPa、溫度為115~130°C的條件下滅菌25-35min，然后冷卻至 25°C以下，優選的，所述步驟c中的該加壓加溫滅菌處理是在壓強為0.IMPa、溫度為121°C 的條件下滅菌30min，然后自然冷卻至5~25°C，實際操作時滅菌后的藥用明膠溶液既可以 自然冷卻，也可以置于冰箱、水浴等環境中冷卻，這樣可確保重組人干擾素a 2b加入藥用 明膠溶液后的活性，進而保證藥物的藥效。本發明選用羥苯乙酯作為制劑的抑菌劑，羥苯乙 酯被廣泛應用在各種藥物制劑中，具有安全性好、抑菌效力強的優點，但羥苯乙酯在水中幾 乎不溶，只在甲醇、乙醇或乙醚中易溶，在三氯甲烷中略溶，在甘油中微溶。重組人干擾素 a 2b是一種蛋白質，選用甲醇、乙醇、乙醚等有機溶劑來溶解羥苯乙酯時會造成蛋白質變 性，進而影響其生物學活性。通過長期的試驗研究，本發明選用丙二醇、吐溫80、EDTA二鈉 和甘油作為部分輔料，一方面是為了保證重組人干擾素a 2b凝膠產品的可靠制備，另一方 面通過多次試驗驗證發現，這些輔料的選擇，其顯著的效果在于可以使不溶于水的羥苯乙 酯在注射用水中得到充分溶解，且不析出，如此可以有效保證羥苯乙酯的抑菌效果，進而大 大提高制備的重組人干擾素a 2b凝膠產品的穩定性。
[0017] 作為進一步的優選方案：所述步驟c是將重組人干擾素a 2b加入到經溫度為 20~25°C的pH緩沖液溶解的藥用明膠溶液中攪拌均勻后加IL注射用水，再至少平衡 lOmin，采用微熱的的磷酸鹽緩沖液溶解藥用明膠，這樣有助于藥用明膠完全溶脹和溶解， 具體說來，經申請人試驗發現，重組人干擾素a 2b加入藥用明膠溶液中攪拌混勻后加注射 用水再至少平衡10分鐘，這樣能保證重組人干擾素a 2b明膠溶液的溫度均勻，從而有利于 更好的與步驟b制得的卡波姆基溶液質混合，進而使制得的產品的成型效果好、穩定性好、 使用藥效顯著。
[0018] 優選的，所述步驟d中的重組人干擾素a 2b明膠溶液和卡波姆基質均平衡至5~ 25°C再進行混合攪拌，然后加注射用水定容至總質量為10kg，再攪拌均勻，灌裝，這樣有 利于兩者混合均勻，重組人干擾素a 2b的生物活性也最佳，經檢測，與現有技術所用的人 血白蛋白作為保護劑相比，采用本發明公開的方法制備重組人干擾素a 2b凝膠不僅工藝 簡單、工藝條件容易控制，而且采用藥用明膠作為保護及劑成功制備得到的重組人干擾素 a 2b凝膠穩定性好，使用安全，藥效顯著。
【具體實施方式】
[0019] 以下結合實施例1-4對本發明公開的技術方案作進一步的說明：
[0020] 實施例1 :本發明的重組人干擾素a 2b凝膠的制備
[0021] a)稱取50g卡波姆，加入100倍重量的注射用水溶脹過夜；
[0022] b)稱取200g丙二醇、20g吐溫80、lg的EDTA二鈉、500g甘油、5g羥苯乙酯混合， 加入2倍重量的注射用水并置于75°C水浴條件下加熱攪拌至羥苯乙酯完全溶解，將溶解液 加入到溶脹好的卡波姆基質溶液中，混勻，加入三乙醇胺調節pH至5. 0,濕熱滅菌1小時，冷 卻平衡至KTC，得卡波姆基質待用；
[0023] c)稱取600g藥用明膠，用2L磷酸鹽緩沖液（pH 5. 0、濃度0? 1M、溫度20°C )溶解， 然后置于滅菌鍋中在壓強為〇. IMPa、溫度為121°C的條件下滅菌30min，自然冷卻至10°C， 加入50.0 mg重組人干擾素a 2b(l.OXlO9IU)溶解，攪拌均勻，加IL注射用水，混勻后平衡 10分鐘至l〇°C待用；