專利名稱：重組人干擾素α－2b口腔粘貼片及其制法的制作方法
技術領域：
本發明涉及重組人干擾素α-2b及抗病毒藥物。
背景技術：
干擾素是人體細胞在被病毒侵染時，誘導產生的一類蛋白質，具有抗病毒、抗細胞增殖及免疫調節性。根據抗原特異性和分子結構，干擾素可分為三種類型α、β、γ干擾素，其中α型干擾素可分為三種類型。
通常所稱的天然干擾素是用人體細胞進行誘導生產的，其中部分是源自人血的白細胞干擾素，由于原材料來源有限，純化難度大，因而制備高純度干擾素的成本高，產量低，而且存在肝炎病素、艾滋病病毒的潛在危險污染，大大限制干擾素的臨床應用。1980年，美國成功地用大腸桿菌中表達出有活性的人α干擾素蛋白質分子，而且以基因工程技術生產的人α干擾素表現出與天然干擾素相同的生物學活性和臨床療效，大量的成本低廉的高純度重組干擾素的生產為臨床的廣泛應用開辟了道路[參見Tarnowski.S.Jet al.Large-scale purification of RecombinantHuman Leukocyte Interferons.Methods Enzymol VOL119P156，1986]。
近年來，α干擾素已廣泛應用于臨床，用于治療多種病毒性疾病和惡性腫瘤，如病毒性肝炎，尖銳濕疣、毛細胞白血病及與艾滋病相關的卡波濟氏肉瘤，取得了較好的療效[參見范中善、杜平編，干擾素的臨床應用，北京醫科大學、中國協和醫科大學聯合出版社，1996]。流行性感冒等上呼吸感染是最常見的多發病，主要由鼻病毒、流感病毒，呼吸道合胞病毒、冠狀病毒等多種病毒引起，呼吸道病毒具有種類和型別繁多的特點，一般來說機體對其也無強大、持久的免疫力，迄今尚缺有效防治手段。干擾素以其抗病毒的“廣譜性”和“相對無害性”，被認為可能是防治呼吸道感染較為有希望藥物。臨床上已有用滴鼻，氣霧吸入等方法防治流感等上呼吸道感染，取得了一定的療效[參見戴家熊等.干擾素氣霧劑防治小兒呼吸道病毒感染，上海醫學，VOL10(1)P14，1987；Merigan，T.C.Inhibitionof Respiratory Virus Infection by Locally Applied Interferon.Lancet.Mar.17.1973p563]。
嚴重急性呼吸綜合癥(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)，又名“傳染性非典型性肺炎”，目前在很多國家均有發現，呈現出輸入性傳播的特點。該病傳染性強、流行面廣、病情嚴重(死亡率高達5.85％)，嚴重危害到人類的身心健康，并對社會經濟造成了很大的損害。為此，研究該病的發病機理、分離病原分子、建立快速檢測技術及發現各種預防或治療SARS的研究顯得尤為迫切。在病毒學專家祝慶余及其“攻關”小組的努力下，現已發現造成這種疾病的病毒為一種冠狀病毒(Coronavirus)，香港大學醫學院研究人員發現感染人類的冠狀病毒至少有6種，現已完成對這類冠狀病毒的基因序列測定工作，并初步闡明了其病因學、臨床特征以及流行病學特征等，為進一步建立快速檢測技術和有關新藥的研發奠定了一個良好的基礎。在現代醫學范疇，SARS是一種從未在人或動物中發現的冠狀病毒感染的結果，這種變異冠狀病毒與流感病毒有一定的親緣關系，為冠狀病毒科的一種肺炎病毒。它在侵染人體后一般會導致呼吸道感染(包括SARS等)，此外，在巨噬細胞中有時也會檢測到它的存在，感染人群一般會出現發燒、干咳、呼吸急迫、頭疼以及低血氧濃度等癥狀，患者體內淋巴細胞數目下降，免疫功能低下，同時出現轉氨酶活性逐漸升高的現象，患者將會因肺泡損壞導致呼吸衰竭而死亡，隨著病毒株的分離和確認，尋求預防和治療SARS的方法已成為當務之急。而重組α干擾素由于具有來源正常細胞，誘導抗病毒活性快，活性高，性質穩定，產生中和抗體頻率低等優點，因此極有可能成為預防SARS病毒感染的有效藥物。而目前在臨床上干擾素主要采用肌肉或皮下注射給藥，對于白血病、病毒性肝炎等沒有病灶邊界的疾病，是較佳的給藥途徑，但因干擾素的半衰期短，在血液中清除率高[參見Bomemann L.D.et al、Intravenous and Intramuscularpharmacokinetics of Recombinant Leukocyte A Interferon.Eur.J.Clin pharmacol、VOL77p469、1985]，能夠到達靶細胞并發揮效應的干擾素數量很少，為了維持一定的血藥濃度，達到干擾素的療效，常需使用超大劑量的干擾素。特別是，如應用于上呼吸道感染，用注射給藥干擾素通過血液循環擴散到上呼吸道器官十分困難[參見Mandell.G.L.et al Principles and Practice of Infectious Disease.2nd p863.Wiley，New York，1985]。另外全身應用大劑量的干擾素可能會發生一定的副作用，如發熱、寒戰、疼痛、厭食、乏力、白細胞減少[參見Quesada.J.R et al.clinicalToxility of Interferon in cancer Patinent.J.Clin.Oncol，VOL4p234，1986]等，而且注射給藥還存在病人使用不便、費用高等缺點。
鑒于注射給藥的缺點，干擾素的其他途徑給藥的研究非常活躍，其中干擾素通過口腔粘膜給藥是研究的熱點。
蛋白質藥物經口腔粘膜給藥已有較深入的研究[參見Haris.D andRobinson，J.K，Drug Delivery via the mucous membranes of the Oral cavity.J.Phatm.Sci.VOL81p1，1992；Masami Ishida et al，New Mucosal Dosage Form of Insulin.Chem.Pharm.Bull，VOL29(3)p810，1981]，一般來說經粘膜給藥主要應克服兩個屏障，即酶屏障和生理屏障。唾液中含很少的蛋白酶，酶屏障對口腔粘膜給藥的影響較小，口腔粘膜無角質層，選用合適的吸收促進劑[10][11]可克服生理屏障，而且通過口腔粘膜給藥可以避免肝臟的首過效應。而鼻粘膜給藥會對鼻粘膜產生一定的刺激作用，引起鼻腔出血、鼻粘膜損傷。
最近的研究顯示，干擾素經口腔粘膜給藥的作用途徑與肌肉注射有所不同，當干擾素通過口腔粘膜被吸收，可直接進入淋巴循環系統，激活人免疫系統，從而減少了藥物用量并提高其治療效果。
口服含片是常見的經口腔粘膜給藥的劑型，但含片在口中一般5分鐘左右即溶化，干擾素作為一種大分子物質經口腔膜吸收的速度較慢，在這么短的時間內只有很少量的干擾素能夠被吸收利用。
發明內容
本發明的目的是提供一種重組人干擾素α-2b口腔粘貼片及其制法。
本發明的技術方案如下一種重組人干擾素α-2b口腔粘貼片，它是由人干擾素α-2b與輔料羥丙甲纖維素(HPMC)、羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)和卡波姆(carbopol)均勻混合后壓制成的片劑。
上述的重組人干擾素α-2b口腔粘貼片可以含有干擾素α-2b 1.0～10×105IU，每片重70～120mg。
一種上述重組人干擾素α-2b口腔粘貼片的制法，它是將干擾素α-2b 1×108IU～10×108IU和70～120g輔料均勻混合后，壓片成1000片藥片，其中輔料由下列成分組成羥丙甲纖維素(HPMC) 20％-40％羧甲基纖維素納(CMC-Na) 15％-30％卡波姆(Carbopol) 15-30％
乳糖 15％-30％硬脂酸鎂 1％-10％。
上述的干擾素α-2b是干擾素α-2b的凍干粉。
干擾素是生活性物質，溫度、機械外力等物理化學因素都對生物活性有很大的影響。為了有利于干擾素活性的保持，我們采用將干擾素冷凍干燥成粉末，然后與其它輔料混合后直接壓片。
上述的均勻混合是將干擾素α-2b先與少量輔料混合均勻，再加入混合料的10倍量的輔料混合均勻，再加入二次混合料的10倍量的輔料混合均勻，如此依次混合，直到干擾素α-2b與全部輔料混合均勻。
由于干擾素α-2b在整個配方中所占比例太小，如果直接混合，很難混勻，將造成各片之間干擾素含量差異太大，因此我們采用等量遞增法混合，然后直接壓片。
本發明的重組人干擾素α-2b口腔粘貼片一般需4小時左右才能緩慢地溶化，使干擾素能充分被吸收利用，并較長時間地發揮作用。本發明的重組人干擾素α-2b 5腔粘貼片的基質是羥丙甲纖維素、羧甲基纖維素鈉和卡波姆，羥丙甲纖維素水化后形成凝膠層，所以當表層的羥丙甲纖維素，隨著水溶液不斷滲透進入藥片內部，片中的干擾素α-2b逐漸溶解，經過凝膠表層擴散進入溶液。當凝膠層表面的羥丙甲基纖維素被充分水化，則徐徐溶解，或以碎片脫落，其中的藥物也隨之轉入溶液中，羧甲基纖維素鈉和卡波姆的粘性很強，能使藥片牢固黏附于口腔膜上，可以抵抗舌頭運動和吞咽而不脫落。另外，重組人干擾素α-2b口腔粘貼片與口腔膜表面保持充分接觸，黏膜與藥片間存在著較高的藥物濃度梯度，十分有利于干擾素擴散吸收。眾所周知，口腔內有舌扁桃體、咽扁桃體和脖扁桃體合稱瓦代厄氏扁桃體，是口腔內主要淋巴組織環。從重組人干擾素α-2b口腔粘貼片釋放出的干擾素，作為外來抗原與口腔內豐富的淋巴組織作用，從而激活淋巴細胞，激活了的淋巴細胞再通過細胞間信號傳遞或淋巴細胞遷移，激活更多的淋巴細胞群，起到增強機體免疫性作用。口腔黏膜上還存在干擾素受體，從重組人干擾素α-2b口腔粘貼片中釋放出的干擾素可直接與受體結合，增強機體免疫性。因此重組人干擾素α-2b口腔粘貼片用于防治SARS病毒感染是極其可行的。
本發明的重組人干擾素α-2b口腔粘貼片具有如下特性
1.重組人干擾素α-2b溶液無細胞毒性；2.重組人干擾素α-2b溶液能夠有效抑制流感病毒標準株和臨床分離株在Vero細胞上的增殖。IC50＝0.8-3.3IU/mL，其效果與100ug/mL病毒唑相似，抑制指數為3.14.1；3.重組人干擾素α-2b溶液能有效抑制流感病毒在細胞內的復制；4.重組人干擾素α-2b口腔粘貼片口腔給藥對小鼠病毒性肺炎具有顯著的保護作用，可以降低肺部病變程度和抑制肺部病毒增殖，肺部病毒滴度顯著降低(P＜0.05)，肺病變抑制指數為19.4-36.8％，死亡保護率30-80％，其效果優于病毒唑。
5.對小鼠病毒性肺炎的保護作用試驗表明，340IU～680IU/日劑量組效果相近，無劑量效應關系，干擾素可以用量較小。
四
圖1重組人干擾素α-2b溶液對H1N1病毒細胞內復制的影響。
五具體實施例方式
實施例1.重組人干擾素α-2b口腔粘貼片的制備材料組成干擾素α-2b(天津華立達生物工程有限公司提供，下同)2×108IU輔料共75克，其中羥丙甲纖維素(HPMC)40％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)15％卡波姆(Carbopol) 24.8％其他 0.2％乳糖 15％硬脂酸鎂 5％制備工藝整個過程均在無菌室中進行。
按處方稱取各種輔料，先將各種輔料混合均勻，過40目篩，紫外照射滅菌備用。
稱取干擾素α-2b，與約4g輔料混合物充分混勻，再加40g輔料混合物，充分混勻，最后加入剩余的輔料混合物混合均勻。
將混勻后的原、輔料混合物用6mm淺凹沖模直接壓片，調整片重約75mg，硬度3-4kg，制成1000片，壓完后點數，取樣檢定。
實施例2.重組人干擾素α-2b口腔粘貼片的制備材料組成干擾素α-2b 1×108IU輔料共90克，其中羥丙甲纖維素(HPMC)28％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)30％卡波姆(Carbopol) 15％乳糖 15％硬脂酸鎂 12％制備工藝同實施例1，但調節片重為90毫克。
實施例3.重組人干擾素α-2b口腔粘貼片的制備材料組成干擾素α-2b 5×108IU輔料共100克，其中羥丙甲纖維素(HPMC)20％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)15％卡波姆(Carbopol) 23％乳糖 30％硬脂酸鎂 12％制備工藝同實施例1，但調節片重為100毫克。
實施例4.重組人干擾素α-2b口腔粘貼片的制備材料組成干擾素α-2b 10×108IU輔料共120克，其中羥丙甲纖維素(HPMC)28％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)15％卡波姆(Carbopol) 30％乳糖 17％硬脂酸鎂 10％制備工藝同實施例1，但調節片重為120毫克。
實施例1～4所制得的重組人干擾素α-2b口腔粘貼片除所含干擾素量不同外，其性能基本一致。
實施例5.重組人干擾素α-2b口腔粘貼片的藥效試驗材料和方法1材料1.1病毒甲型H1N1(A/PR18/40)、H2N2(A/京科/12/64)、H3N3(A/滬防/31/80)及乙型B/Lee/40、丙型標準株，由中國預防醫學科學院病毒所流感中心提供；甲、乙型流感病毒臨床分離株，甲型Al/京防86-1，乙型乙/滬防91-3，由江蘇省防疫站提供；甲型流感病毒肺適應株PR8，由中國預防醫學科學院病毒流感中心提供；胚、小鼠反復感染傳代，增強毒力。
1.2細胞猴腎傳代細胞(Vero)1.3藥物試驗用的重組干擾素α-2b溶液，干擾素α-2b含量分別為26、13、6.5、3.3、1.6、0.8、0.4IU；病毒唑針劑南京第三制藥廠產品；干擾素注射液天津華立達生物工程有限公司產品，用無菌注射用水配制而成。
1.4培養基DME/F12(1∶1)。
1.5動物昆明種小鼠，18～22g，雌雄各半，由中國藥科大學動物中心提供。
2.方法2.1流感病毒毒力測定96孔板每孔加入適量的Vero細胞，培養24小時，此時細胞基本長滿成單層，分別將甲型、乙型流感病毒液進行10倍遞次稀釋，將稀釋液依次加入96孔板，每濃度4孔，37℃5％二氧化碳培養3天，觀察細胞病變(CPC)，測定病毒液滴度，重復兩次，結果見表1。
2.2重組人干擾素α-2b溶液對Vero細胞毒性的測定(每個培養瓶中細胞濃度相同)向長成單層的Vero細胞培養瓶中，加入濃度分別為26、13、6.5、3.3、1.6、0.8、0.4、0.2、0IU/mL重組人干擾素α-2b溶液，每濃度三瓶，重復2次，37℃5％二氧化碳培養4天左右，用胰酶消化細胞，臺昐藍染色，于血球計數器內計數活細胞和死細胞，并計算出死亡率，結果見表2。
2.3重組人干擾素α-2b溶液的抗病毒作用A.重組人干擾素α-2b溶液對細胞病變的抑制作用Vero細胞鋪滿單層的96孔細胞培養板七塊，分別感染100TCID50七種病毒液，吸附2小時后，傾出病毒，加入系列2倍稀釋的重組人干擾素α-2b重組人干擾素α-2b溶液。每濃度四孔，每日觀察細胞病變情況，觀察七天，記錄結果，實驗重復兩次，結果見表3、4、5、6、7、8和9。由表可見，重組人干擾素α-2b溶液對流感病毒50％抑制濃度為0.8-3.3IU/mL。
B.重組人干擾素α-2b溶液對流感病毒的抑制指數于96孔單層Vero細胞板上，加10倍稀釋的七種病毒液各0.1mL，吸附兩小時后，棄去上清液，分空白對照組，實驗組，陽性對照組，分別加入培養液、26IU/mL重組人干擾素α-2b溶液和100ug/mL病毒唑，37℃ 5％二氧化碳培養，隔兩日換維持液2次，每日觀察細胞病變，5日后確定各組的TCID50，每濃度兩孔，重復3次，計算抑制指數，結果見表10。抑制指數＝空白對照組lgTCID50-實驗組IgTCID50，結果表明26IU/mL重組人干擾素α-2b溶液和100ug/mL病毒唑對甲、乙、丙型流感病毒的抑制效果相似。
C.重組人干擾素α-2b溶液對H1N1感染性增殖的影響在生長成單層的MDCK細胞瓶中，接種0.1mL 1000TCID50的H1N1，37℃吸附1小時后，分為對照組和實驗組，分別加入培養液和26IU/ml。重組人干擾素α-2b溶液，37℃培養，從感染6小時起，分次收獲培養液(6、12、24、48、72、96小時)，每點四份，-60℃保存，然后在細胞板上滴定其感染滴度，并繪制滴度隨時間變化曲線，結果見表11。結果顯示空白組病毒滴度持續升高，呈對數生長型；而重組人干擾素α-2b溶液滴度升至一定高度后相對穩定，不再增加，說明重組人干擾素α-2b溶液能有效地抑制流感病毒在細胞內復制，但不直接殺死病毒。
2.4流感病毒鼠肺適應株毒力測量取50只小鼠，體重為18～22g，雌雄各半，隨機分為5組，以5個10倍稀釋病毒液，即1、10-1、10-2、10-3、10-4，乙醚麻醉小鼠后，滴鼻孔各0.03mL(共0.06mL)，連續觀察14日，每天記錄動物死亡數，并觀察動物表現，記錄癥狀，按Bliss法計算小白鼠感染LD50，結果表明，各組動物滴鼻感染后，第5天開始陸續死亡，10天后動物較少死亡，各組動物死亡數及癥狀和肺部病變，見表12和13。
2.5重組人干擾素α-2b口腔粘貼片治療給藥抗病毒作用A.重組人干擾素α-2b口腔粘貼片治療給藥對小鼠病毒性肺炎的保護作用取體重18-22g健康小鼠80只，雌雄各半，隨機分為8組，即重組人干擾素α-2b口腔粘貼片高、中、低三組(680IU/片、340IU/片、170IU/片)、病毒唑肌注組(0.2mg/只)、病毒唑口服組(0.2mg/只)，干擾素肌注(340IU/只)、陰性對照組、正常對照組(生理鹽水)。在乙醚淺度麻醉下流感病毒鼠肺適應株10LD50滴鼻，每孔0.03mL，共0.06mL，24小時后，分別給藥，連續給藥5天，藥片貼在小鼠舌下，即用特制頭套固定嘴部，使小鼠的嘴閉合不動，給藥4小時后取下，連續觀察兩周，記錄動物死亡數和存活時間，兩周后全部處死。解剖觀察肺部病變程度，同時檢測肺部病毒滴度。重復一次，結果見表14。高、中、低不同含量的重組人干擾素α-2b口腔粘貼片組死亡數目不同，高、中兩組存活率較高，低劑量組次之，存活時間也不同。
統計分析表明，各劑量組能明顯降低動物病毒性肺炎死亡率(P＜0.05)，高、中劑量組效果相近，不存在劑量效應關系。高、中組略優于干擾素肌注組和病毒唑組，顯著高于病毒唑口服組；存活時間也比病毒唑肌注和干擾素肌注長。
解剖結果表明，干擾素貼片組和肌肉注射組肺組織僅有輕度突變和部分炎癥細胞，病毒唑口服和肌肉注射組組織大部分，有的甚至全部發生突變，呈深褐色。由此可見，干擾素α-2b粘貼片對病毒性肺炎的保護作用優于病毒唑。
死亡保護率和生命延長率計算方法如下死亡保護＝100×(對照組死亡率-實驗組死亡率)％ B.重組人干擾素α-2b口腔粘貼片對小鼠病毒肺炎病變程度的影響實驗方法同A，給藥5天后，處死動物，解剖，取肺，觀察肺病變程度，并稱重，計算出肺指數，進而計算出抑制率，同時記錄肺病變積分，結果見表15。可以看出，重組人干擾素α-2b口腔粘貼片組抑制率在19.4-36.8％之間，肺病變積分在1.10-2.22之間，高、中劑量組效果相近，優于病毒唑，低劑量組稍差。
肺病變程度以下列標準積分
0分肺組織正常。
1分肺組織出現炎癥細胞，肺泡內有少量滲出液。
2分肺泡滲出液增多，部分實間質纖維組織增生。
3分肺組織大部分實質或全部實質。
C.重組人干擾素α-2b口腔粘貼片對肺部病毒感染性增殖的影響實驗方法同前，連續給藥5天后，處死動物，解剖，取肺，勻漿后加5mL生理鹽水，15000rpm離心10分鐘；取上清液用血凝法檢測病毒滴度。結果見表16。從表中可看出，各給藥組對肺部病毒感染均有抑制作用，高、中兩劑量組效果相近，優于病毒唑。低劑量組稍差。
表1七種病毒株的滴度(TCID50)病毒名稱 1 2 3 XH1N11×1041×1055×1052.7×104H2N21×1051×1055×1061.3×105H3N31×1065×1051×1045.8×104乙型 1×1065×1051×1041.3×105丙型 1×1055×1055×1044.5×104臨甲 1×1055×1055×1053.4×104臨乙 5×1055×1051×1053.4×104表2重組人干擾素α-2b溶液對Vero細胞毒性
表3重組人干擾素α-2b溶液對H1N1病毒感染細胞病變的抑制
“-”細胞老化或病變小于10％“+”細胞病變25％左右“++”細胞病變50％左右“+++”細胞病變75％左右“++++”細胞病變90％以上表4重組人干擾素α-2b溶液對H2N2病毒感染細胞病變的抑制
表5重組人干擾素α-2b溶液對H3N3病毒感染細胞病變的抑制
表6重組人干擾素α-2b溶液對乙型流感病毒感染細胞病變的抑制
表7重組人干擾素α-2b溶液對丁型流感細胞病變的抑制
表8重組人干擾素α-2b溶液對臨床甲分離株病毒感染細胞病變的抑制
表9重組人干擾素α-2b溶液對臨床乙分離株病毒感染細胞病變的抑制
表10重組人干擾素α-2b溶液對流感病毒的抑制指數
表11重組人干擾素α-2b溶液對H1N1增殖的影響
表12不同稀釋度病毒液所致小鼠肺炎死亡情況
表13用Bliss法計算病毒液LD50及95％可信限
表14干擾素口腔粘貼片對小鼠病毒性肺炎的保護作用
*P＜0.05**P＜0.01表15干擾素口腔粘貼片對小鼠病毒性肺病變程度的影響
*P＜0.05(與陰性對照組比較)**P＜0.01表16干擾素口腔粘貼片對小鼠肺部病毒增殖的影響
抑制指數＝陰性對照組病毒滴度-給藥組病毒滴度*P＜0.05**P＜0.0權利要求
1.一種重組人干擾素α-2b口腔粘貼片，其特征是它是由人干擾素α-2b與輔料羥丙甲纖維素、羧甲基纖維素和卡波普均勻混合后壓制成的片劑。
2.根據權利要求1所述的重組人干擾素α-2b口腔粘貼片，其特征是含有干擾素α-2b 1.0×105IU～10×105IU，每片重70～120mg。
3.一種權利要求1所述的重組人干擾素α-2b口腔粘貼片的制法，其特征是將干擾素α-2b 1×108～1×109IU和70～120g輔料均勻混合后，壓片而成，其中輔料由下列成分組成羥丙甲纖維素20％-40％羧甲基纖維素鈉 15％-30％卡波姆 15-30％乳糖15％-45％硬脂酸鎂1％-10％。
4.根據權利要求3所述的重組人干擾素α-2b口腔粘貼片的制法，其特征是干擾素α-2b是干擾素α-2b的凍干粉。
5.根據權利要求3所述的重組人干擾素α-2b口腔粘貼片的制法，其特征是所述的均勻混合是將干擾素α-2b先與少量輔料混合均勻，再加入混合料的10倍量的輔料混合均勻，再加入二次混合料的10倍量的輔料混合均勻，如此依次混合，直到干擾素α-2b與全部輔料混合均勻。
全文摘要
一種重組人干擾素α－2b口腔粘貼片，它是由人干擾素α－2b與輔料羥丙甲纖維素、羧甲基纖維素和卡波普均勻混合后壓制成的片劑，可以用于治療和預防SARS病毒感染。本發明公開了其制法。
文檔編號A61K9/70GK1513548SQ03113449
公開日2004年7月21日 申請日期2003年5月12日 優先權日2003年5月12日
發明者沈子龍, 姚文兵, 高向東, 張陸勇 申請人:中國藥科大學