抗ang2抗體和cd40激動劑的組合療法
【專利說明】抗ANG2抗體和CD40激動劑的組合療法
[0001] 本發明設及結合人血管生成素2UNG-2)的抗體與CD40激動劑的組合療法。
[0002] 發明背景
[0003] 在血管發生和血管重塑中發揮關鍵作用的血管生成素是正在生長中的腫瘤的促 血管發生性設備的一部分。重要的是，它們是在抗VEGF療法期間導致繼發抗性的主要因素 之一（S址arinen，P.，et al. ,Trends Mol Med 17(2011)347-362)。血管生成素-I(Angl)和 血管生成素-2(Ang2)二者均是Tie2-受體配體。雖然Angl趨向于使血管穩定和成熟 (Yancopoulos，G.D.，et al .，化1:ure 407(2000)242-248)，但是Ang2通過使血管去穩定而 促進腫瘤血管發生和生長。Ang2由此在功能上與Angl對立（Cascone，T.etal，JClin 0ncol30( 2012)441-444)。與此一致，已經發現阻斷Ang2而非Angl使腫瘤血管正常化 (化Icon,B丄.，H.化shizume，et al. ,Am J Pathol 175(2009)2159-2170)且幫助克服針對 抗VEGF療法的獲得性抗性（化ae，S.S.，W.S.Kamoun,et al. ,Clin Cancer Res 16(2010) SGlS-SGSTsHiomasiM.iet al.PLoS One 8(2013)e54923)。
[0004] 免疫調控性抗體提供一種治療辦法，而且可用于直接加強抗腫瘤免疫應答或用作 抗癌疫苗的佐劑(Melero，I.，et al.，化t Rev Cancer 7(2007)95-106)。激動性抗CD40抗 體構成運些試劑中最有效類別之一。CD40是在抗原呈遞細胞(APC)諸如樹突細胞，B細胞和 巨隧細胞上表達的腫瘤壞死因子超家族的細胞表面成員。抗CD40激動劑的臨床前研究提示 用交聯性抗體觸發抗原呈遞細胞(APC)上的CD40能代替正常情況下經由CD40配體提供的 CD4T細胞輔助，而且推動CD8效應器T細胞的激活W及擴充化i，F.et al.，Science333 (2011)1030-1034)。另外，CD40激活的巨隧細胞還可W發揮直接殺腫瘤功能(Beatty, G丄.， et al.,Science 331(2011)1612-1616；Vonderheide,R.H.,et al.,Oncoimmunology 2 (2013)e23033)〇
[0005] 免疫阻抑性腫瘤微環境對抗腫瘤免疫和免疫治療性治療辦法造成了一項主要障 礙（Beatty,G.L.'et al.,Science 331(2011)1612-1616)。
[0006] 發明概述
[0007] 本發明的發明人發現，抗ANG2抗體增強CD40激動劑治療癌癥或延遲腫瘤進展或延 長罹患癌癥(例如實體瘤）的患者的存活的功效。進展延遲，存活更長W及劑量降低及副作 用的風險更低的潛力代表了對患者的主要益處。
[0008] 驚人的是，用抗ANG2抗體與CD40激動劑組合治療腫瘤顯示腫瘤進展前時間和存活 時間方面的強協同效應(而抗VEG巧亢體與CD40激動劑組合的治療只顯示較小效果）。
[0009] 本發明的一個方面是一種結合人血管生成素2UNG-2)的抗體，其中該抗體與CD40 激動劑組合施用，a)用于治療癌癥或延遲癌癥進展，或b)用于延長罹患癌癥的患者的存活， 或C)用于刺激免疫應答或功能，諸如T細胞活性(在一個實施方案中，CD8效應器T細胞活性） 或巨隧細胞活性(在一個實施方案中，CD40激活的巨隧細胞活性），或d)用于使得癌癥對結 合人血管生成素2UNG-2)的抗體的治療易感。
[0010] 本發明的另一個方面是一種CD40激動劑，其中該CD40激動劑與結合人血管生成素 2UNG-2)的抗體組合施用，a)用于治療癌癥或延遲癌癥進展，或b)用于延長罹患癌癥的患 者的存活，或C)用于刺激免疫應答或功能，諸如T細胞活性(在一個實施方案中，CD8效應器T 細胞活性)或巨隧細胞活性(在一個實施方案中，CD40激活的巨隧細胞活性），或d)用于使得 癌癥對結合人血管生成素2UNG-2)的抗體的治療易感。
[0011] -方面，本發明提供一種方法，其用于a)治療癌癥或延遲癌癥進展，或b)延長罹患 癌癥的患者的存活，或C)刺激免疫應答或功能，諸如T細胞活性(在一個實施方案中，CD8效 應器T細胞活性)或巨隧細胞活性(在一個實施方案中，CD40激活的巨隧細胞活性），或d)使 得癌癥對結合人血管生成素2UNG-2)的抗體的治療易感，其中該方法包括將有效量的抗 ANG2抗體和有效量的CD40激動劑施用于有所需要的患者的步驟。
[0012] 另一方面，本發明提供抗ANG2抗體在制備用于治療癌癥的藥物中的用途，其中該 抗體與CD40激動劑一起施用。
[0013] 本發明的另一個方面是結合人血管生成素2UNG-2)的抗體，其用于制備用于下述 各項的藥物：
[0014] a)用于治療癌癥或延遲癌癥進展，或
[0015] b)用于延長罹患癌癥的患者的存活，或
[0016] C)用于刺激免疫應答或功能，諸如T細胞活性(在一個實施方案中，CD8效應器T細 胞活性)或巨隧細胞活性(在一個實施方案中，CD40激活的巨隧細胞活性），或
[0017] d)用于使得癌癥對結合人血管生成素2UNG-2)的抗體的治療易感；
[0018] 其中該抗體與CD40激動劑一起施用。
[0019] 本發明的另一個方面是CD40激動劑，其用于制備用于下述各項的藥物：
[0020] a)用于治療癌癥或延遲癌癥進展，或
[0021] b)用于延長罹患癌癥的患者的存活，或
[0022] C)用于刺激免疫應答或功能，諸如T細胞活性(在一個實施方案中，CD8效應器T細 胞活性)或巨隧細胞活性(在一個實施方案中，CD40激活的巨隧細胞活性），或
[0023] d)用于使得癌癥對結合人血管生成素2UNG-2)的抗體的治療易感；
[0024] 其中該CD40激動劑與結合人血管生成素2UNG-2)的抗體一起施用。
[0025] 本發明的另一個方面是一種結合人血管生成素2UNG-2)的抗體，其與CD40激動劑 組合，a)用于治療癌癥或延遲癌癥進展，或b)用于延長罹患癌癥的患者的存活，或C)用于刺 激免疫應答或功能，諸如T細胞活性(在一個實施方案中，CD8效應器T細胞活性)或巨隧細胞 活性(在一個實施方案中，CD40激活的巨隧細胞活性），或d)用于使得癌癥對結合人血管生 成素2 (ANG-2)的抗體的治療易感。
[0026] 本發明的另一個方面是一種結合人血管生成素2UNG-2)的抗體，其與CD40激動劑 組合，用于制備用于下述各項的藥物：
[0027] a)用于治療癌癥或延遲癌癥進展，或 [00%] b)用于延長罹患癌癥的患者的存活，或
[0029] C)用于刺激免疫應答或功能，諸如T細胞活性(在一個實施方案中，CD8效應器T細 胞活性)或巨隧細胞活性(在一個實施方案中，CD40激活的巨隧細胞活性），或
[0030] d)用于使得癌癥對結合人血管生成素2UNG-2)的抗體的治療易感。
[0031] -方面，本發明提供一種方法，其用于a)治療癌癥或延遲癌癥進展，或b)延長罹患 癌癥的患者的存活，或C)刺激免疫應答或功能，諸如T細胞活性(在一個實施方案中，CD8效 應器T細胞活性)或巨隧細胞活性(在一個實施方案中，CD40激活的巨隧細胞活性），或d)使 得癌癥對結合人血管生成素2UNG-2)的抗體的治療易感，其中該方法包括將有效量的抗 ANG2抗體和有效量的CD40激動劑施用于有所需要的患者的步驟。
[0032] 本發明的另一個方面是結合人血管生成素2UNG-2)的抗體和CD40激動劑，它們組 合a)用于治療癌癥或延遲癌癥進展，或b)用于延長罹患癌癥的患者的存活，或C)用于刺激 免疫應答或功能，諸如T細胞活性(在一個實施方案中，CD8效應器T細胞活性)或巨隧細胞活 性(在一個實施方案中，CD40激活的巨隧細胞活性），或d)用于使得癌癥對結合人血管生成 素2 (ANG-2)的抗體的治療易感。
[0033] 本發明的另一個方面是結合人血管生成素2UNG-2)的抗體和CD40激動劑，它們用 于制備用于下述各項的藥物：
[0034] a)用于治療癌癥或延遲癌癥進展，或
[0035] b)用于延長罹患癌癥的患者的存活，或
[0036] C)用于刺激免疫應答或功能，諸如T細胞活性(在一個實施方案中，CD8效應器T細 胞活性)或巨隧細胞活性(在一個實施方案中，CD40激活的巨隧細胞活性），或
[0037] d)用于使得癌癥對結合人血管生成素2UNG-2)的抗體的治療易感。
[0038] 本發明的另一個方面是結合人血管生成素2UNG-2)的抗體和CD40激動劑組合在 制備用于下述各項的藥物中的用途：
[0039] a)用于治療癌癥或延遲癌癥進展，或
[0040] b)用于延長罹患癌癥的患者的存活，或
[0041] C)用于刺激免疫應答或功能，諸如T細胞活性(在一個實施方案中，CD8效應器T細 胞活性)或巨隧細胞活性(在一個實施方案中，CD40激活的巨隧細胞活性），或
[0042] d)用于使得癌癥對結合人血管生成素2UNG-2)的抗體的治療易感。
[0043] 在一個實施方案中，該抗ANG2抗體是人或人源化抗體。
[0044] 優選的是，該抗ANG2抗體W小于1 .Ox IO-VoVl的Kd值特異性結合人ANG2,如通過 表面等離振子共振(Biacore?)測定的。
[0045] 優選的是，該抗ANG2抗體是IgG抗體，而且更加優選的是，該抗ANG2抗體是人IgGl 或IgG4亞類的。
[0046] 在一個優選實施方案中，該抗ANG2抗體WlSnM或更少的IC50抑制人ANG-2與TIE2 受體的相互作用。
[0047] 在一個實施方案中，該CD40激動劑是激動性CD40抗體或激動性CD40L多膚。
[004引在一個優選實施方案中，該CD40激動劑是激動性CD40抗體。
[0049]在一個實施方案中，
[00加]i)該抗ANG2抗體包含
[0051 ] (a)SEQ ID NO: 1的重鏈可變域氨基酸序列和SEQ ID NO:2的輕鏈可變域氨基酸序 列;或
[0052] (b)SEQ ID N0:3的重鏈可變域氨基酸序列和SEQ ID N0:4的輕鏈可變域氨基酸序 列；
[0化3] 且
[0化4] ii)該激動性CD40抗體包含
[0055] (a)SEQ ID N0:5的重鏈可變域氨基酸序列和SEQ ID N0:6的輕鏈可變域氨基酸序 列;或
[0056] (b)SEQ ID N0:7的重鏈可變域氨基酸序列和SEQ ID N0:8的輕鏈可變域氨基酸序 列；
[0057]在一個優選實施方案中，
[005引 i)該抗ANG2抗體包含SEQ ID NO: 1的重鏈可變域氨基酸序列和SEQ ID N0:2的輕 鏈可變域氨基酸序列;或 [0化9] 且
[0060] ii)該激動性CD40抗體包含SEQ ID NO:5的重鏈可變域氨基酸序列和SEQ ID NO:6 的輕鏈可變域氨基酸序列;或
[0061 ]在一個優選實施方案中，該抗ANG2抗體是結合人ANG-2且結合人VEGF的雙特異性 抗體。
[0062] 在一個優選實施方案中，
[0063] i)該結合人ANG-2且結合人VEGF的雙特異性抗體包含
[0064] SEQ ID NO: 1的重鏈可變域氨基酸序列和SEQ ID NO:2的輕鏈可變域氨基酸序列； 和
[0065] SEQ ID N0:9的重鏈可變域氨基酸序列和SEQ ID NO: 10的輕鏈可變域氨基酸序 列；
[0066] 且
[0067] ii)該激動性CD40抗體包含
[0068] SEQ ID NO:5的重鏈可變域氨基酸序列和SEQ ID NO:6的輕鏈可變域氨基酸序列。
[0069] 在一個優選實施方案中，
[0070] i)該結合人ANG-2且結合人VEGF的雙特異性抗體包含SEQ ID NO: 11，沈Q ID NO: 12,沈Q ID NO: 13,和沈Q ID NO: 14的氨基酸序列；
[0071] 且
[0072] ii)該激動性CD40抗體包含SEQ ID NO:5的重鏈可變域氨基酸序列和SEQ ID NO:6 的輕鏈可變域氨基酸序列。
[0073] 在一個優選實施方案中，該癌癥包含實體瘤。
[0074] 在一個優選實施方案中，該癌癥是結直腸癌，卵巢癌，成膠質細胞瘤，胃癌，膜腺 癌，乳腺癌，肺癌，肝細胞癌。
[00巧]附圖簡述
[0076] 圖1抗ANG2抗體(和抗ANG化抗VEGF抗體（=抗VEGF/ANG2))與激動性CD40抗體組合 的體內抗腫瘤功效(延遲癌癥進展（腫瘤生長)和延長所治療的患者存活)-該圖呈現來自3 項獨立實驗的合并數據。用圖中所示抗體組合治療小鼠。
[0077] 圖2抗ANG2抗體(雙特異性)與激動性CD40抗體組合在皮下同基因 MC38結腸癌模型 中的體內抗腫瘤功效。
[0078] 2A:激動性CD40抗體單一療法(空屯、圓形）與對照(實屯、正方形)相比的腫瘤生長抑 制。
[0079] 2B:雙特異性ANG2/VEGF抗體單一療法（空屯、正方形）與對照（實屯、正方形）相比的 腫瘤生長抑制。
[0080] 2C:激動性CD40抗體和雙特異性ANG2/VEGF抗體的組合(空屯、S角形）與對照(實屯、 正方形)相比的腫瘤生長抑制。
[0081 ]圖3抗ANG2抗體(雙特異性)與激動性CD40抗體組合在雌性Ba化/c小鼠中的同基因 CT26WT模型中的體內抗腫瘤功效。
[0082] 發明詳述
[0083] 本發明設及一種抗ANG2抗體，其用于在患者中治療癌癥的方法，該方法包括將該 抗ANG2抗體和CD40激動劑施用于該受試者，而且發明人在本發明中證明運種藥劑組合導致 (腫瘤生長)癌癥進展延遲和所治療的患者存活延長。
[0084] 人血管生成素-2(ANG-2)(或者縮寫成ANGPT2或ANG2)(SEQIDNo:15)記載于 Maisonpierre,P.C.,et al.,Science 277(1997)55-60及Cheung，A.H.，et al,Genomics 48a998)389-91。發現血管生成素-l和-2(ANG-l(SEQIDNo:108)和ANG-2(SEQIDNo: 107))是Ties的配體，Ties是在血管內皮內選擇性表達的一個酪氨酸激酶家族 (化ncopoulos，G.D.，et al. ,NaUire 407(2000)242-48)。血管生成素家族現在有四個確定 的成員。血管生成素-3和-4(Ang-3和Ang-4)可能代表小鼠和人中的相同基因座廣泛分歧的 對應物化im，I.，et al.，FEBS Let，443(1999)353-56;Kim，I.，et al.J Biol Chem 274 (1999)26523-28) dANG-1和ANG-2最初是在組織培養實驗中分別作為激動劑和括抗劑鑒定 的（關于 ANG-I 參見 Davies, S.，et al. ,Cell, 87(1996)1161-1169;及關于 ANG-2 參見 Maiso噸ierre，P.C.，et al.，Science277(1997)55-60)。所有已知的血管生成素均主要結 合Tie2,而且Ang-巧日-2二者均W3nM化d)的親和力結合Tie2(Maiso噸ierre，P.C.，et al.， 8^611。6277(1997)55-60)。顯示4叫-1支持6(：存活及促進內皮完整性(0曰￥13,5.，61曰1.， Cell，87(1996)1161-1169;Kwak，H.J.，et al.，F邸S Lett 448(1999)249-53;Suri，C.，et al.,Science 282(1998)468-71；Thurston,G.,et al.,Science 286(1999)2511-14； Thurston，G.，et al.，化t.Med.6(2000)460-63)，而ANG-2具有相反的效果，而且在存活因 子VEGF或堿性成纖維細胞生長因子缺失下促進血管去穩定和退化(Maisonpierre，P.C.，et al. ,Science 277( 1997)55-60)。然而，ANG-2功能的許多研究提示更加復雜的情況。ANG-2 可能是在血管萌芽和血管退化二者中發揮作用的血管重塑的復雜調節物。支持ANG-2的此 類作用的是，表達分析掲示ANG-2在促血管發生性萌芽的成體設置中與VEGF-起快速誘導， 而ANG-2在血管退化的設置中在VEGF缺失下誘導化olash，