917;Bu;rton，D.R.，et al.，Nature288(1980)338-344;Thommesen，J.E.，et al.，Mol.Immunol.37(2000)995-1004;Idusogie，E.E.，et al.， J.Immunol.l64(2000)4178-4184;Hezareh，M.，etal.，J.Virology75(2001)12161-12168;Morgan，A.，et al.，Immunology86(1995)319-324;EP 0 307 434。此類結合位點是 例如 1^2：34，1^235,0270，肥97,6318，1(320，1(322，？33巧日？329(編號依照1(曰6曰1，6.4.的抓索引， 見下文）。亞類IgGl，IgG2和IgG3的抗體通常顯示補體活化和Clq和C3結合，而IgG4不活化補 體系統且不結合Clq和C3。
[0136] 在一個實施方案中，本文所述抗體是人IgG類的（即IgGl，IgG2，IgG3或IgG4亞類 的)。
[0137] 在一個優選實施方案中，本文所述抗體是人IgGl亞類或人IgG4亞類的。在一個實 施方案中，本文所述抗體是人IgGl亞類的。在一個實施方案中，本文所述抗體是人IgG4亞類 的。
[0138] 在一個實施方案中，依照本發明的抗體包含自人起源衍生的Fc部分和優選人恒定 區的所有其它部分。如本文中使用的，術語"自人起源衍生的Fc部分"意指Fc部分是亞類 IgGl，IgG2，IgG3或IgG4的人抗體的化部分，優選來自人IgGl亞類的化部分，來自人IgGl亞 類的突變Fc部分(在一個實施方案中，具有突變L234A+L235A)，來自人IgG4亞類的Fc部分或 來自人IgG4亞類的突變Fc部分(在一個實施方案中，具有突變S228P)。
[0139] 在一個實施方案中，本文所述抗體特征在于恒定鏈是人起源的。此類恒定鏈是現 有技術公知的且記載于例如Kabat，E.A.(參見例如John son, G. and Wu, T.T. ,Nucleic Acids Res.28(2000)214-218)。
[0140] 本發明包含治療需要治療的患者的方法，其特征在于對患者施用治療有效量的本 文所述抗ANG2抗體及治療有效量的CD40激動劑(例如激動性CD40抗體）。本發明包含本文所 述抗ANG2抗體及CD40激動劑(例如激動性CD40抗體)用于所述療法的用途。
[0141] 本文所述抗體優選是通過重組手段生成的。此類方法是現有技術廣泛知道的，而 且包含原核和真核細胞中的蛋白質表達及隨后抗體多膚的分離且通常純化至藥學可接受 純度。為了蛋白質表達，通過標準方法將編碼輕和重鏈或其片段的核酸插入表達載體中。在 適宜原核或真核宿主細胞(諸如C冊細胞，NSO細胞，SP2/0細胞，肥K293細胞，COS細胞，酵母， 或大腸桿菌細胞)中實施表達，并自細胞（自上清液或在細胞裂解后）回收抗體。
[0142] 抗體的重組生成是現有技術公知的且記載于例如綜述性文章 Makrides，S.C.， Protein Expr.化rif.17(1999)183-202;Geisse，S.，et al.,Protein Expr.化rif.8 (1996)271-282;Kaufman，R.J.，Mol.Biotechnol.16(2000)151-161;Werner，R.G.,Drug Res.48(1998)870-880。
[0143] 抗體可W存在于全細胞中，細胞裂解物中，或部分純化的形式，或實質性純的形 式。通過標準技術(包括堿/SDS處理，CsCl成帶，柱層析，瓊脂糖凝膠電泳，和本領域公知的 其它技術)實施純化W消除其它細胞成分或其它污染物，例如其它細胞核酸或蛋白質。參見 Ausubel，F.，et al.，ed.Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing and Wiley Interscience,New York(1987)。
[0144] NSO細胞中的表達記載于例如Barnes,L.M.，et al.，切totechnology 32(2000) 109-123;Barnes，L.M.，et al. ,Biotech.Bioeng.73(2001)261-270。瞬時表達記載于例如 Durocher，Y.，et al.，Nucl. Acids. Res. 30 (2002 化9。可變域的克隆記載于 Or Iandi，R.，et a I .，P r O C . N a 11 . A C a d . S C i . U S A 8 6 ( I 9 8 9 ) 3 8 3 3 - 3 8 3 7 ; C a r t e r，P .，e t a I .， Pro C. Nat I . Acad . Sci. USA 89(I 992)4285-4289;Norderhaug，L.，et a I .， J.Immunol.Methods 204(1997)77-87。SchIaeger，E.-J.and Christensen，K.，in 切totechnology 30(1999)71-83及Schlaeger'E.-J.，in J.Immunol.Methods 194(1996) 191-199記載了一種優選的瞬時表達系統化EK 293)。
[0145] 將依照本發明的重和輕鏈可變域與啟動子，翻譯起始，恒定區，3'非翻譯區，聚腺 巧酸化，和轉錄終止的序列組合W形成表達載體構建物。可W將重和輕鏈表達構建物組合 成單一載體，共轉染，連續轉染，或分開轉染入宿主細胞中，然后融合宿主細胞W形成表達 運兩條鏈的單一宿主細胞。
[0146] 例如，對于原核生物合適的控制序列包括啟動子，任選的操縱基因序列，和核糖體 結合位點。已知真核細胞利用啟動子，增強子和聚腺巧酸化信號。
[0147] 當核酸放置成與另一核酸序列處于功能性關系時，它是"可操作連接的"。例如，如 果前序列(presequence)或分泌前導的DNA表達成參與多膚的分泌的前蛋白（pr邱rotein)， 那么它與多膚的DNA可操作連接;如果啟動子或增強子影響編碼序列的轉錄，那么它與該序 列可操作連接;或者如果核糖體結合位點的定位推動翻譯，那么它與編碼序列可操作連接。 通常，"可操作連接"意味著所連接的DNA序列是郵鄰的，而且在分泌前導的情況中是郵鄰且 在同一讀碼框的。然而，增強子不必是郵鄰的。連接通過方便的限制性位點處的連接來實 現。如果不存在此類位點，那么依照常規實踐使用合成寡核巧酸銜接頭或接頭。
[0148] 通過常規免疫球蛋白純化規程將單克隆抗體與培養液恰當分開，諸如例如蛋白A-Se地arose,徑憐灰石層析，凝膠電泳，透析，或親和層析。編碼單克隆抗體的DNA和RNA易于 使用常規規程來分離和測序。雜交瘤細胞可充當此類DNA和RNA的來源。一旦分離，就可W將 DNA插入表達載體中，然后將表達載體轉染入其它情況下不生成免疫球蛋白蛋白質的宿主 細胞(諸如肥K 293細胞，C冊細胞，或骨髓瘤細胞）中，W在宿主細胞中獲得重組單克隆抗體 的合成。
[0149] 如本文中使用的，表述"細胞"，"細胞系"，和"細胞培養物"可互換使用，而且所有 此類名稱包括后代。如此，詞語"轉化子"和"經轉化細胞"包括原代受試細胞及自其衍生的 培養物，不管傳代的次數。還要理解的是，由于有意或無意的突變，所有后代在DNA內容方面 可W不是精確相同的。包括具有與初始轉化細胞中所篩選的相同的功能或生物學活性的變 體后代。
[0150] 在另一個方面，本發明提供含有本發明的一種或一組單克隆抗體或其抗原結合部 分，與藥學可接受載劑一起配制的組合物，例如藥物組合物。
[0151] 如本文中使用的，"藥學可接受載劑"包括任何和所有溶劑，分散介質，涂層，抗細 菌和抗真菌劑，等張和吸收/再吸收延遲劑，等等是生理學相容的。優選的是，載劑適合于注 射或輸注。
[0152] 本發明的組合物可W通過多種本領域已知方法來施用。正如技術人員會領會的， 施用路徑和/或模式會根據期望結果而變化。
[0153] 藥學可接受載劑包括無菌含水溶液或分散體和用于制備無菌可注射溶液或分散 體的無菌粉末。此類介質和藥劑對于藥學活性物質的用途是本領域已知的。在水W外，載劑 還可W是例如等張緩沖鹽水溶液。
[0154] 不管所選擇的施用路徑，通過本領域技術人員知道的常規方法將可W W合適水合 形式使用的本發明的化合物和/或本發明的藥物組合物配制成藥學可接受劑量形式。
[0155] 本發明的藥物組合物中活性組分的實際劑量水平可W變化，從而獲得活性組分對 特定患者，組合物，和施用模式有效實現期望治療性應答，對患者無毒的量(有效量）。所選 擇的劑量水平會取決于多種藥動學因素，包括所采用的本發明特定組合物或其醋，鹽或酷 胺的活性，施用路徑，施用時間，所采用的特定化合物的排泄速率，與所采用的特定組合物 組合使用的其它藥物，化合物和/或材料，所治療的患者的年齡，性別，重量，狀況，整體健康 和在先醫學史，及醫學領域公知的類似因素。
[0156] 術語"方法治療"或其等同語在應用于例如癌癥時指設計成減少或消除患者中癌 細胞的數目，或減輕癌癥的癥狀的規程或作用過程。癌癥或其它增殖性病癥的"治療方法" 并非必然表示癌細胞或其它病癥事實上會消除，細胞或病癥的數目事實上會減少，或癌癥 或其它病癥的癥狀事實上會減輕。通常，即使成功的可能性較低，都是鑒于患者的醫學史和 估算存活預期，仍然認為誘導總體有益作用過程，也會實施治療癌癥的方法。
[0157] 術語"組合施思'或"共施思V'組合療法"，"一起施用"或"組合治療"指例如作為 分開的配制劑/應用(或作為單一配制劑/應用)施用本文所述抗ANG2抗體，和本文所述激動 性CD40抗體。共施用可W是同時的或者是任意次序順序的，其中優選有一段時間所有活性 劑同時發揮它們的生物學活性。同時或順序(例如靜脈內（i.v.)，經由連續輸注)共施用所 述抗體和所述別的藥劑。在順序共施用運兩種治療劑時，或是在同一天W兩次分開的施用 藥劑，或是在第1天施用一種藥劑并在第2天至第7天，優選第2天至第4天共施用第二種藥 劑。如此，在一個實施方案中，術語"順序"表示在第一種成分劑量給藥之后7天內，優選的是 在第一種成分劑量給藥的之后4天內；而術語"同時"表示在相同的時間。術語"共施用"就抗 ANG2抗體和/或激動性CD40抗體的維持劑而言表示維持劑可W同時共施用，如果治療周期 對兩種藥物都是適宜的話，例如每周。或者，例如，每個第一天至第=天施用另一藥劑，并且 每周施用所述抗體。或者，順序共施用維持劑，或是在一天內或是在幾天內。
[0158] 不言自明的是，W "治療有效量"（或簡單的說，"有效量"）將抗體施用于患者，該量 的相應化合物或組合會引發研究人員，獸醫，醫生或其他臨床醫師尋求的組織，系統，動物 或人的生物學或醫學應答。
[0159] 如本文中使用的，術語"患者"或"受試者"優選指需要治療癌癥，或癌前狀況或損 害的人。然而，術語"患者"也可W指需要治療的非人動物，例如哺乳動物，諸如小鼠，犬，貓， 馬，牛，豬，綿羊和非人靈長動物，等等。
[0160] 共施用的量和共施用的時機會取決于所治療的患者的類型（物種，性別，年齡，重 量，等)和狀況及所治療的疾病或疾患的嚴重程度。所述抗ANG2抗體和別的藥劑W-次或在 一系列治療里(例如在同一天或在次日）恰當地共施用于患者。
[0161]根據疾病的類型和嚴重程度，約0.1 mg/kg至50mg/kg(例如0. l-20mg/kg)所述抗 ANG2抗體和/或激動性CD40抗體是運兩種藥物共施用于患者的初始候選劑量。本發明包含 依照本發明的抗體用于治療罹患癌癥(尤其是結腸癌，卵巢癌，成膠質細胞瘤，胃癌，膜腺 癌，乳腺癌，肺癌，肝細胞癌）的患者的用途。
[0162]在抗ANG2抗體與激動性CD40抗體的組合W外，還可W施用化療劑。
[0163]在一個實施方案中，可W與本文所述抗ANG2抗體和本文所述激動性CD40抗體一起 施用的此類別的化療劑包括但不限于抗腫瘤劑，包括燒化劑，包括:氮芥，諸如二氯甲基二 乙胺(1116油1〇'61：11日111；[]16)、環憐酷胺（。7(31〇地03911日1111(16)、異環憐酷胺（1；1!'〇3'日1111(16)、美法 侖(melphalan)和苯下酸氮芥（chlorambucil);亞硝基脈(nitrosourea )，諸如卡莫司汀 (carmustine) (BCNU)、洛莫司汀（Iomustine) (CCNU)、和司莫司汀（semustine) (methyl-CCNU);Temodal?(替莫挫胺（temozolamide))、乙撐亞胺/甲基蜜胺諸如S乙撐蜜胺（TEM)、 ^乙締硫代憐酷胺(塞替派(1：11；[01：巧曰））、六甲基蜜胺(歷1，六甲蜜胺(曰1付61曰1]1；[]16));控基 橫酸醋，諸如白消安（busulfan);S嗦，諸如達卡己嗦（daca;rbazine)(DTIC);抗代謝物，包 括葉酸類似物，諸如甲氨噪嶺(methohexate)和S甲曲沙（trimetrexate)，喀晚類似物，諸 如5-氣尿喀晚（5即）、氣脫氧尿巧、吉西他濱(gemci1:abine)、胞喀晚阿拉伯糖巧(AraC，阿糖 胞巧k^arabine))、5-氮胞巧、2，2 ' -二氣脫氧胞巧，嚷嶺類似物，諸如6-琉基嚷嶺、6-硫鳥 嚷嶺、硫挫嚷嶺（azathiop;rine)、T-脫氧柯福霉素（噴司他下（pentostatin))、 e巧throhyhownonyladenine化HNA)、憐酸氣達拉濱（f Iudarabine phosphate)、和2-氯脫 氧腺巧(克拉屈濱(Cladribine)，2-CdA);天然產物，包括抗有絲分裂藥物，諸如帕利他賽 (paclitaxel)、長春花生物堿（包括長春堿(vinblastine) (VLB)、長春新堿（vincristine)、 和長春瑞濱(vinorelbine))、泰索帝（taxotere)、雌莫司汀（estramustine)、和憐酸雌莫司 汀；表鬼白毒素（pipodophylotoxin)，諸如依托泊巧（etoposide)和替尼泊巧 (teniposide);抗生素，諸如放線菌素 D(actinomycin D)、道諾霉素（daunomycinK柔紅霉 素（rubidomycin))、多柔比星（doxorubicin)、米托蔥釀（mitoxantrone)、伊達比星 (idarubicin)、博來霉素(bleomycin)、普卡霉素(plicamycin)(光輝霉素(mit虹amycin))、 絲裂霉素 〔(mitomycin C)、和放線菌素(actinomycin);酶，諸如k天冬酷胺酶;生物學應答 改性劑，諸如干擾素-Q、化-2、G-CSF和GM-CSF;包括銷配位復合物的混雜劑，諸如奧沙利銷 (oxaliplatin)、順銷（Cisplatin)和卡銷（carboplat in)，蔥二酬，諸如米托蔥釀 (mitoxantrone)，取代的脈，諸如徑基脈、甲基阱衍生物，包括N-甲基阱(MIH)和丙卡己阱 (procarbazine)、腎上腺皮質阻抑劑，諸如米托坦（mitotane) (0、p-DDD)和氨魯米特 (aminoglutethimide);激素和括抗劑，包括腎上腺皮質類固醇括抗劑，諸如強的松 (prednisone)及等效物、地塞米松（dexamethasone)和氨魯米特（aminoglutethimide); Gemzar?(吉西他濱（gemcitabine))、妊娠素，諸如己酸徑基孕酬化yho巧progesterone caproate)、乙酸甲徑孕酬（me化oxyprogesterone acetate)和乙酸甲地孕酬（megeshol acetate);雌激素，諸如己締雌酪(diethyIsti Aestrol)和乙烘雌二醇等效物;抗雌激素， 諸如他莫昔芬（tamoxifen);雄激素，包括丙酸睪酬（testosterone propionate)和氣甲睪 酬(f Iuoxymesterone)/等效物;抗雄激素，諸如氣他胺（f Iutamide )、促性腺激素釋放激素 類似物和亮丙瑞林Qeuprolide);和非類固醇抗雄激素，諸如氣他胺(flu化mide)。祀向后 成機制的療法包括但不限于組蛋白脫乙酷基酶抑制劑，脫甲基化劑(例如Vidaza)和釋放轉 錄阻抑(ATRA)療法也可W與抗原結合蛋白質組合。在一個實施方案中，化療劑選自下組:紫 杉燒(像例如帕利他賽(泰素(Taxol))、多西他賽(泰索帝(Taxotere))、經修飾的帕利他賽 (例如Abraxane和Opaxio)、多柔比星、舒尼替尼（Sutent)、索拉非尼(Nexavar)、和其它多激 酶抑制劑、奧沙利銷、順銷和卡銷、依托泊巧、吉西他濱、和長春堿。在一個實施方案中，化療 劑選自下組：紫杉燒(像例如帕利他賽(Taxol)、多西他賽(Taxotere)、經修飾的帕利他賽 (例如Abraxane和Opaxio)。在一個實施方案中，別的化療劑選自5-氣尿喀晚（5-FU)、亞葉 酸、伊立替康、或奧沙利銷。在一個實施方案中，化療劑為5-氣尿喀晚、亞葉酸和伊立替康 (FOLFIRI)。在一個實施方案中，化療劑為5-氣尿喀晚和奧