褐藻多糖硫酸酯在制備預防和/或治療下肢外周動脈血管病的產品中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種褐藻多糖硫酸酯在制備預防和/或治療下肢外周動脈血管病的產品中的應用。
【背景技術】
[0002]周圍動脈疾病(peripheral arterial disease，PAD)，特別是下肢周圍動脈疾病是臨床常見的一種疾病，發病人群很廣。病理改變為動脈內粥樣物質不斷增多和繼發血栓形成，引起動脈管腔狹窄、閉塞，使肢體出現慢性或急性缺血癥狀。病因尚未完全清楚，一般認為與年齡、吸煙、血脂、糖尿病、高脂血癥、高血壓、遺傳因素、精神緊張等多種因素有關。臨床表現以間歇性跋行、靜息痛、難治性潰瘍等癥狀為特點[Mascarenhas.JV.，et al.，Peripheral arterial disease.Endocrinol Metab Clin North Am.2014；43(1):p.149-66.]。流行病學調查顯示:PAD在自然人群中發病率為3.08%；對PAD住院患者的回顧性分析，合并2型糖尿病占比54.1%，高血壓病占比70.9%，高脂血癥占比45.9%。糖尿病(diabetes mellitus，DM)患者PAD發病率較非DM者高20倍，8%的患者診斷為DM時即存在PAD，并隨年齡、病程增加而增多，DM病程20年后其發病率可達45% [Chen，Q.，et al.,Patterns of disease distribut1n of lower extremity peripheral arterialdisease.Ang1logy.2015;66(3):p.211-8.]。目前，臨床常用的治療手段及存在的缺陷是:I)血管旁路術等手術治療，預后好，但有的患者無法手術，以及出現術后再狹窄；2)血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)等促進血管新生的生長因子的治療，但其價格昂貴，在機體內不穩定，極易被降解，半衰期短;3)血管內皮前導細胞等細胞水平的治療，目前尚缺乏更多的臨床證據證明其有效性;4)抗血小板聚集、抗凝、擴張血管等相關藥物的治療，可在一定程度上緩解癥狀，但長期服用，有出血等不良反應[Forsythe，R0.,et al.,Management of peripheral arterial disease and the diabetic foot.JCard1vasc Surg(Torino).2014；55(2Suppl I):p.195-206.]。
[0003]褐藻多糖硫酸酯(fucoidan)是從褐藻中分離得到的一類富含巖藻糖的天然硫酸多糖，其生物活性的強弱與來源種屬、分子量、組成和結構等相關[Fitton，J.H.，et al.，Therapies from fucoidan!multifunct1nal marine polymers.Mar Drugs,2011；9(10):p.1731-60.]。從海帶中提取出的低分子量褐藻多糖硫酸酯(low molecule weightfucoidan，LMWF)是一種水溶性雜多糖，其主要成分為L-巖藻糖-4-硫酸酯。LMWF具有抗氧化、抗炎、抗凝血等作用。LMWF褐藻多糖硫酸酯及其片段來源廣泛，其多種生物活性和天然產物的口服無毒性，使其在治療骨性關節炎、肝纖維化、腎臟疾病及輻射損傷的保護等方面成為有希望的治療藥物。近期研究發現，LMWF能保護腎臟的缺血再關注損傷[Chen，J.，eta1.,Low Molecular Weight Fucoidan against Renal Ischemia-Reperfus1n Injuryvia Inhibit1n of the MAPK Signaling Pathway.PLoS One，2013.8(2):p.e56224.]。課題組前期研究結果發現:I )LMWF通過特異性抑制凝血酶原的活性抗血小板聚集，另外，其對膠原、胰蛋白酶、ADP、5-HT引起的血小板聚集也有一定作用[Zhu，Z.,et al ,Higherspecificity of the activity of low molecular weight fucoidan for thrombin-1nduced platelet aggregat1n.Thromb Res.2010; 125(5):419-26.] ;2)LMWF通過降低氧化應激改善離體血管收縮的高反應性，通過激活血管內皮一氧化氮合成酶(eNOS)的活性，促進一氧化氮(NO)的釋放，擴張腎上腺素(PE)誘導的離體血管的收縮[Cui，W.,et al.，Low-molecular-weight fucoidan protects endothelial funct1n and amel1ratesbasal hypertens1n in diabetic Goto-Kakizaki rats.Lab Invest.2014Apr；94(4):p.382-93.) 此外，文獻報道，LMWF通過增強堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的活性，提高基質細胞衍生因子(SDF-1)的水平，促進血管新生，改善下肢肌肉等組織的血供[Luyt，CE.，et al.,Low-molecular-weight fucoidan promotes therapeutic revascularizat1nin a rat model of critical hindlimb ischemia.J Pharmacol Exp Ther.2003；305
(l):p.24-30.]o
【發明內容】
[0004]本發明的目的是提供一種褐藻多糖硫酸酯在制備預防和/或治療下肢外周動脈血管病的產品中的應用。
[0005]本發明提供的褐藻多糖硫酸酯在制備預防和/或治療下肢外周動脈血管病的產品中的應用。
[0006]上述的應用中，所述下肢外周動脈血管病為動脈粥樣硬化、大動脈炎、血栓閉塞性脈管炎和糖尿病等所致的慢性動脈閉塞癥中的至少一種，本領域內下肢動脈閉塞的外周血管病均包含在此。
[0007]上述的應用中，所述褐藻多糖硫酸酯的重均分子量為3-30KD，稱為低分子量褐藻多糖硫酸酯。
[0008]上述的應用中，所述褐藻多糖硫酸酯中巖藻糖含量為25?35%，硫酸基含量為25?35%。
[0009]上述的應用中，所述褐藻多糖硫酸酯是從海帶、馬尾藻、裙帶菜、羊棲菜、鼠尾藻、海黍子、昆布、泡葉藻和墨角藻中的至少一種中提取得到。
[0010]上述的應用中，所述褐藻多糖硫酸酯是從所述海帶中提取得到的。
[0011]本發明中，所述海帶(Laminaria japonica)為天然海帶和/或人工養殖的海帶。
[0012]本發明中，所述褐藻多糖硫酸酯的活性成分是L-褐藻糖-4-硫酸酯，還含有少量的半乳糖、甘露糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖、糖醛酸、蛋白質、K+、Na+、Ca2+、Mg2+等金屬離子，它的結構特征是I，2_聯結的聚α-L吡喃褐藻糖，而硫酸酯主要是在C-4位的羥基上。
[0013]上述的應用中，所述產品為藥物和/或保健品。
[0014]上述的應用中，所述藥物包含有效治療量的所述褐藻多糖硫酸酯和藥學上可接受的載體;所述藥物可通過口服、注射、噴射、滲透、吸收、物理或化學介導的方法導入機體如肌肉、皮內、皮下、靜脈、粘膜組織;或是被其他物質混合或包裹后導入機體;所述載體包括藥學領域常規的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑。
[0015]上述的應用中，所述藥物的劑型為口服制劑或注射劑。
[0016]上述的應用中，所述藥物的劑型為注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊或口服液。
[0017]本發明中，所述低分子量褐藻多糖硫酸酯的制備方法，包括如下步驟:取海帶粉碎后用蒸餾水提取，得到提取液;將所述提取液用水透析，然后將透析液濃縮，加乙醇析出沉淀，所述沉淀為粗褐藻多糖硫酸酯，然后將粗褐藻多糖硫酸酯分離純化，得到褐藻多糖硫酸酯;將褐藻多糖硫酸酯配成水溶液，加入抗壞血酸和過氧化氫降解，分離純化，即得到低分子量褐藻多糖硫酸酯。
[0018]所述褐藻多糖硫酸酯的制備方法中，粗褐藻多糖硫酸酯分離純化采用MgCl2存在時乙醇沉淀，除去水溶性褐藻膠，然后濾液透析、濃縮后乙醇沉淀，干燥沉淀，得到褐藻多糖硫酉交酷;
[0019]將褐藻多糖硫酸酯降解后的反應體系分離純化采用自來水和蒸餾水透析，之后濃縮，凍干，得到低分子量褐藻多糖硫酸酯。
[0020]本發明具有以下優點:
[0021]低分子量褐藻多糖硫酸酯(LMWF)來源于天然存在的海帶之中，其易得性與安全性;能對下肢外周血管病有一定改善作用。具體如下:I)LMWF可以改善下肢動脈閉塞的外周血管病大鼠足底