本說明書公開偏離的內 容。
[0100] 本文引用的所有參考文獻，包括雜志文章或摘要，公開或未公開的美國或外國專 利申請，頒發的美國或外國專利及其它任何參考文獻，整體納入本說明書作為參考，包括引 用參考文獻中的所有數據、圖表和文本。此外，本說明書所引用參考文獻中的參考文獻內容 也納入本說明書作參考。
[0101] 參考已知的方法步驟、常規方法步驟、已知方法或常規方法，不意味以任何方式承 認本發明的任何方面內容、描述或實施方式在向各方領域已公開、報導或提出過。
[0102] 以上對【具體實施方式】的描述完全揭示了本發明的總體特征，他人可通過應用本技 術領域的知識（包括本說明書所引參考文獻的內容）無須過多實驗和不背離本發明的總體 概念，不難修飾和/或改編這樣的【具體實施方式】以供各種應用。因此，這些依據本說明書提 供的說明和指南作出的改編和修飾意在落入所公開實施方式的同等范圍內。也應理解本說 明書所用的措詞和術語目的是為了說明而非限制，因此本說明書的術語或措詞可由本領域 技術人員根據本說明書提供的說明和指南，結合本領域普通技術人員的知識予以解釋。
[0103] 在描述了本發明后，參見以下示范性臨床研究狀況的實施例不難理解，它只是為 了說明而提供的，并非為了限制本發明。
[0104] 實施例1.液體制劑的開發
[0105] 詞匯表
[0106] AUC:分析型超離心，
[0107] ⑶：園二色性
[0108] DLS:動態光散射，
[0109] DSC:差示掃描熱量法
[0110] IEC:離子交換色譜，
[0111] MALDI-ToF:基質輔助激光解吸電離時間飛行質譜
[0112] 0D:光密度，
[0113] RALS:直角光散射
[0114] RP:反相色譜，
[0115] SEC:分子大小排阻色譜
[0116] Mfi
[0117] -TACI-Fc藥品，磷酸鹽緩沖液，pH6. 0, +140mMNaCl
[0118] -TACI-Fc藥品，磷酸鹽緩沖液，pH5
[0119] -TACI-Fc藥品，乙酸鹽緩沖液，pH5
[0120] -正磷酸（1. 00563,Merck)
[0121] -琥珀酸（1. 00682,Merck)
[0122] -檸檬酸（1. 59134,Merck)
[0123] -組氨酸（1. 04351，Merck)
[0124] -冰乙酸 100% (1. 00063,Merck)
[0125] -D-甘露醇DMB,PhEur,BP,USP,FCC,E421 (1. 05980,Merck)
[0126] -D-山梨醇（S-1876,Sigma)
[0127] -蔗糖DAB,PhEur,BP,NF(1. 07653,Merck)
[0128] -海藻糖（1. 〇82l6,Merck)
[0129] -D_ 葡萄糖一水合物（346971，CarloErba)
[0130] -氫氧化鈉片GR(1. 〇6498,Merck)
[0131] -吐溫 20,合成的（8. 22184,Merck);
[0132] -波洛沙姆（Poloxamer)188(LutrolF68DAC，USP/NF，Basf)
[0133] -氯化鈣二水合物（1. 02382,Merck)
[0134] -氯化鎂（1. 〇5833,Merck)
[0135] -氯化鈉（1 ? 06404,Merck)
[0136] -鹽酸精氨酸（A-5131,Sigma);
[0137] -賴氨酸鹽酸鹽（1. 0571,Merck)
[0138] -甘氨酸（5. 00190,Merck);
[0139] -乙臆（00030,Merck)
[0140] -10xPBS(P/N70013-032,Gibco)
[0141] -三氟乙酸（9470,Baker)
[0142] -硫酸銨（1. 01217,Merck)
[0143] -IN氫氧化鈉（1. 〇9137,Merck)
[0144] -IN鹽酸（1. 〇9〇57,Merck)
[0145] -HPLC級水（Mi11iQ)
[0146] -注射用水
[0147] -無水硫酸鈉（代碼6649,Merck)
[0148] -甲醇（代碼 06009,Merck)
[0149] -疊氮化鈉（代碼冊88,Merck)
[0150] -磷酸二氫鈉一水合物（代碼06346,Merck)
[0151] -磷酸氫二鈉二水合物（代碼06580,Merck)
[0152]生物學試驗用：
[0153] -JurkatpKZ142 克隆（WCB)24 細胞
[0154] -TACI-Fc5(l-8.66mg/ml)
[0155] -zTNF4(l. 44mg/ml)
[0156] -RPMI1640,含或不含酚紅（Gibco)
[0157] -胎牛血清（FBS) (GIBCO)
[0158] -L-谷氨酰胺（Hyclone)
[0159] -丙酮酸鈉（Gibco)噪呤霉素（Sigma)
[0160] -穩定的GL0螢光素酶試驗緩沖液和底物（Pr〇MegaE2510)
[0161] 白色組織培養96孔板加蓋（Dynex)
[0162] -96 孔板加蓋（Falcon)
[0163] _5mL聚丙稀試管（Falcon)
[0164] 設備
[0165] -HPLC系統（Waters)
[0166] -計量移液管（Gi1son)
[0167] -差示掃描量熱儀（2920型，TA儀器公司）
[0168] -微熱量計（VP-DSC型，MicroCal)
[0169] -pH計（713 型，Metrohm)
[0170] -滲透壓計（Osmomat030-D,Gonotec)
[0171] -旋光分光光度儀J-810,配備有Peltier溫度控制計PTC-423S(Jasc〇)
[0172] -焚光分光光度儀FluoroMax3,配備有微板計數計MicroMax384(JobinYvon)
[0173] -%-孔MaxSorp板（Nunc)
[0174] -分光光度計A354 (Perkin-Elmer)
[0175] -石英杯 0? 1 和 1cm光路徑（PerkinElmer)
[0176] -ZetasizerNanoSeries(Malvern)
[0177] -小容量（約70yL)石英杯
[0178] -細胞攪拌系統（8400或8450型，Amicon)
[0179] -10kDa截留膜（YM10 型，Amicon)
[0180] -不銹鋼容器 22mL和 220mL容量（Sartorius)
[0181] -濾膜 0? 22ym(Durapore型GWVP，Mi11ipore)
[0182] -濾膜 0? 45ym(Durapore型HVLP，Mi11ipore)
[0183] -焚光/RALS光度計（PhotonTechnologyInternational)
[0184] -IKA-Vibrax-VXR振蕩器（IKA-Works，Inc.)
[0185] -凍干機（Lyoflex〇6,Lyoflex〇8,Edwards)
[0186] -旋禍振蕩器（Falc)
[0187] -恒溫箱（Heraeus)
[0188] -低溫冰箱（Angelantoni)
[0189] 生物學檢測用：
[0190] -發光計平板讀數儀LumicountPackard
[0191] -GraphPadPrism軟件
[0192] -層流通風柜（FlowLaboratories)
[0193] -37°CC02培養箱（Heraeus)
[0194] -37°C水浴箱
[0195] -細胞計數器
[0196] _顯微鏡
[0197] -搖動平臺
[0198] -桌面離心機
[0199] -單通道和多通道刻度移液管和移液頭
[0200] -移液輔助器
[0201] 主要包裝材料
[0202] -DIN2R(3mL)玻璃小瓶（Nuova0MPI)
[0203] -Flurotec橡皮塞（S2F452,D777-1，B2-40,WestPharmaceutical)
[0204] -橡皮塞（1779W1816 灰色Pharmagummi)
[0205] 7ffe
[0206] 分子大小排阻色譜法（SEC)
[0207] 方法 1
[0208] 用PBS1XpH= 7. 2 稀釋樣品至 0? 5mg/ml，取 40y1 (20yg)加到TSK凝膠柱 G3000SWXL(5ym，7. 8X300mm)上。每次試驗，洗脫液為0? 05M乙酸鈉，0? 5M硫酸銨pH= 6. 0〇
[0209] 方法 2
[0210] 用移動相稀釋樣品至0? 25mg/ml，取40y1 (20yg)加到TSK凝膠柱 G3000SWXL(5ym, 7. 8X300mm)上，此柱連接于TSK凝膠SWXL保護柱（6mmX4cm)。每次試 驗，洗脫液為0. 05M磷酸鈉，0. 5M硫酸銨pH= 6. 0。
[0211] 反相色譜法（RP)
[0212] 用PBS1XpH= 7. 2 稀釋樣品至 0? 5mg/ml，取 40y1 (20yg)加到已用 71 % 緩沖液A(0? 1 %TFA/水）和29 %緩沖液B(0? 1 %TFA/乙腈）平衡的PLRP4000A柱 (8ym，50X4. 6mm)上。用線性梯度液洗脫樣品，流速2ml/分。注入不同量的標準液（IRS ACI-Fc52002/2001)產生標準曲線。
[0213] C-末端截短（RP)
[0214] 將樣品用酶（Cys-C) 37 °C消化2小時，然后在帶保護柱的VydacC18柱 (4,6X50mm)上進行反相層析。
[0215] 洗脫液A:0? 1 %TFA/ 水；洗脫液B: 0? 08 %TFA/70 %CH3CN
[0216] 流速：1ml/分，
[0217] 溫度：40°+/_5°C，
[0218]檢測：214nm
[0219] 洗脫梯度：7分鐘內洗脫液B15% - 23%，共15分鐘。
[0220] 修剪形式（RP)
[0221] 用純水稀釋TACI-Fc藥品的樣品至蛋白濃度4mg/ml。取10y1稀釋的樣品用還 原變性液（〇. 15MDTT/6M鹽酸胍）稀釋至200y1，旋渦振蕩后60±2°C培育90分鐘。取 75-150yl(15-30yg)注入先前已用起始條件液（71 %洗脫液A，0.05 %TFA/水和29 % 洗脫液B，0? 04%TFA/乙腈）平衡的柱（大孔丁基柱，5mm，直徑4. 6mmX高50mm，貨號 7ll6_〇5，J.T.Baker公司產品）中。
[0222] 游離Fc二聚體（IEC)
[0223]用Poloxamerl88100mg/L溶液（以 10mM磷酸鈉緩沖液pH4. 0 配制）稀釋TACI-Fc 藥品的樣品至蛋白濃度為l〇mg/ml。當TACI-Fc濃度高于100mg/ml時，應通過稱重進行樣 品稀釋。
[0224] 取25y1 (250yg)注入預先用起始條件液（80 %洗脫液A，10mM磷酸鈉pH4. 00和 20%洗脫液B，10mM磷酸鈉pH4. 00+0? 5MKC1)平衡的柱（ProPacWCX-10G(保護），4x50mm, 貨號054994，Dionex公司產品）中。
[0225]氧化形式（MALDI-ToF)
[0226] 對TACI-Fc藥品樣品進行肽圖描繪，應用NALDI-ToF檢測定量其氧化形式而驗證。
[0227] 分析型超離心（AUC)
[0228] 將樣品加到有二通道碳環氧樹脂十字頭的小杯中，光路徑12mm。用SE-HPLC洗脫 緩沖液作為稀釋劑將樣品稀釋以模擬HPLC檢測的條件。將相對應的緩沖液加入參比通道 (該儀器操作類似于雙光束分光光度計）中。然后將加樣小杯放入AN-59Ti分析轉頭，安置 在BeckmanOptimaXL-I分析型離心機中。采用以下實驗設置進行分析：
[0229] 轉頭類型：8孔轉頭；
[0230] 轉速；40000rpm;
[0231] 十字頭：碳環氧樹脂；
[0232] 通道長度：12mm;
[0233]AUC試驗期間的溫度20°C±0. 2°C;
[0234]檢測波長：280nm;
[0235]樣品濃度：0? 5mg/ml;
[0236] 樣品體積：432ml/通道；
[0237] 參比品體積：442ml/通道。
[0238] 用國立衛生研究院PeterSchuck開發的c(s)法分析數據，用其分析程序 SEDFIT(8.7版）進行分析。
[0239] 差示掃描熱量法（DSC)
[0240] DSC2920CE，TA儀；溫度范圍25-100°C;升溫速度2°C/分；填裝的最大體 積（HVP)75y1溶液；用安慰劑溶液為參比液。微熱量計為MicroCalVP-DSC;溫度范圍 25-100°C;升溫速度70°C/小時；反應=15秒；數據間距0. 2-8°C;樣品杯填裝約600ml的 5mg/mlTaci_Fc5液；用水