。通過反相色譜法(胖曰16'3 869可曰4 018柱）使用160護此0 (0-50%)作為洗脫劑純化反應混合物。將包含產品的級分組合、濃縮至干燥并凍干W得到 化合物 25(280mg)。計算的 C6 訊 i〇8NaN3〇27 的 m/z = 1326.7。實測值=1348.7(Μ+Ν3)</Η-Μ? (400MHz，D2〇):S4.94(d，J = 4.0Hz，lH)、4.81(dd，J = 6.8Hz，J = 3.2Hz，lH)、4.43(d，J = 8.4Hz，lH)、3.90(br t，J=9.2Hz，1H)、3.81-3.78(m，3H)、3.75-3.71(m，2H)、3.70-3.67(m， 2H)、3.65-3.58(m，46H)、3.54-3.52(m，2H)、3.48(br t，J = 6.0Hz，lH)、3.36(br d，J = 9.6Hz，IH)、3.29(s，3H)、3.27-3.18(m，5H)、2.43(t，J = 6.0Hz，2H)、2.25(bt，J = 12.4Hz， IH)、2.08-2.05(m，IH)、1.97(s，3H)、1.79-1.76(m，2H)、1.68-1.2119-1.04(m， 細）、0.86-0.76(111，甜）。參見圖10。
[0227]化合物45的合成:將化合物25(300mg)溶解于3mL DMF中。在室溫下加入二異丙基 乙胺(60μυ和HATU(131mg)。攬拌5分鐘后，逐滴加入二甲胺（2.3mL，2M的THF溶液）。將反應 在室溫下攬拌1小時。將反應混合物在真空下濃縮至干燥。將殘余物溶解于水中并裝載于 lOg的C-18柱上。用水接著用1/1水/MeOH洗脫提供化合物45(100mg)。計算的C62Hii4N4〇26的m/ z = 1330.8。實測值 = 1353.6(M+Na)。lH匪R 400MHz(D20，設置為4.80郵m)δ0.87(t，J = 7.6Hz，3H)、0.94-0.99(m，2H)、1.20-1.25(m，4H)、1.25(d，J=6.4Hz，3H)、1.26-1.45(m， 4H)、1.52-1.73(m，細）、1.79-1.88(m，3H)、2.00(s，3H)、2.11-2.19(br d，lH)、2.33(tt，J= 12.4Hz，J = 3.2Hz，lH)、2.53(t，J = 6.4Hz，2H)、2.95(s，3H)、3.06(s，3H)、3.28(t，J = 12.5Hz，lH)、3.31-3.38(m，8H)、3.51-3.54(m，2H)、3.61(dd，J = 8.0Hz，J = 0.8Hz，lH)、3.63 (dd，J = 8.0Hz，J = 2.0Hz，lH)、3.70(s，44H)、3.73-3.76(m，lH)、3.78(t，J = 6.0Hz，lH)、 3.81-3.82(m，lH)、3.88(dd，J = 8.0Hz，J = 3.6Hz，lH)、3.99(bs，lH)、4.54(dd，J = 8.細z，J = 2.0Hz，2H)、4.91(q J = 6.細z，lH)、5.04(dJ = 3.細z，lH)。
[0。引化合物26的合成:如化合物25(參見圖ID)所描述的合成化合物26，除了PEG反應物 具有η為8(即，8個PEG重復單元)而不是如化合物25的合成的12。
[0。9] 化合物26:
[0230]
[023。計算的C5抽93化023的m/z = 1127.6。實測值=1151.6(M+Na)</H NMR 600ΜΗζ(020,設 置為4.67卵m)d 0.71 (t，J = 7.2Hz，3H)、0.76(br quin, J= 12.0Hz，2H)、0.99-1.06(m，4H)、 1.08(d，J = 6.6Hz，3H)、1.15-1.19(br quin，J = 6.細z，lH)、1.21-1.25(m，2H)、l. 39-1.48 (m，甜）、1.50-1.60(m，3H)、l.70(brd，J=10.2Hz，2H)、1.91(s，3H)、1.99(m，lH)、2.16(brt， J = 12.6Hz，1H)、2.36( t，J =細z，2H)、3.11-3.15(m，2H)、3.18( t，J = 9.6Hz，3H)、3.22(s， 3H)、3.38(dd，J = 7.8Hz，J = 4.2Hz，2H)、3.46(dd，J = 4.2Hz，lH)、3.47(s，lH)、3.52-3.55(m 27H)、3.56-3.59(m，3H)、3.61-3.64(m，3H)、3.65(d，J = 3.6Hz，lH)、3.72(dd，J= 10.2Hz，J = 3.0Hz，lH)、3.80(d，J = 2.4Hz，lH)、3.85(br s，lH)、3.94(dd，J = 9.6Hz，J = 3.Wz，lH)、 4.36(br s，lH)、4.77(q，J = 6.細z，lH)、4.88(d，J = 4.2Hz，lH)。
[0232] 化合物27的合成:如圖2所述合成化合物27。 腳引 化合物27 ：
[0234]
[02對將化合物19(0.05g)溶解于C出Cl2(10mU中。在室溫下在攬拌下向此溶液中加入Pd [(Ph3)P]4(5mg)、Bu3SnH( 0.0011血)和（CF3CO) 2〇(0.0015mL)。在室溫下持續攬拌30miη。將反 應混合物減壓蒸發至干燥并通過柱色譜(硅膠)純化殘余物W得到化合物27A(0.030g)。
[0236] W如化合物21所描述的完全相同的方式，用10%Pd-C使化合物27A(0.025g)經歷 氨化并在過濾催化劑后蒸除溶劑。如化合物22所描述的，將殘余物用含化OMe的MeOH處理， 用IR-12(KH+)樹脂中和，過濾并蒸除溶劑。通過反相(C18)HPLC純化殘余物W得到化合物27 (7mg)。計算的C33也2的0化的m/z = 759.3。實測值=782.3 (M+Na)。 腳7] 化合物28的合成: 腳引 化合物28:
[0239]
[0240]
[0241]
[0242] 將可商購獲得的化合物27B (0.014g)溶解于DMF (ImL)中。向此溶液中加入DIPEA (0.00175mL)和HATU(0.038g)并將反應混合物在室溫下攬拌2min。加入化合物23(0.035g) 并將反應混合物在室溫下攬拌化。蒸除溶劑并通過HPLC(C18)純化殘余物W得到化合物28 (17mg)。
[02創化合物29的合成:
[0244] 化合物29:
[0248] W如化合物28所描述的完全相同的方式，將可商購獲得的化合物27C(0.021g)與 化合物23(0.035g)反應并通過HPLC(C18)純化W得到化合物29(0.020邑）。
[0249] 實施例2
[0250] E-選擇素活性一一結合測定
[0251] 篩選和表征E-選擇素的糖模擬物括抗劑的抑制測試是競爭性結合測試，其允許測 定IC50值。通過在37°C解育2小時將E-選擇素/Ig嵌合體固定在96孔微量滴定板中。為了降低 非特異性結合，將牛血清白蛋白添加至各個孔并在室溫解育2小時。洗涂板，并且在生物素 化的sLea聚丙締酷胺與鏈親和素/辣根過氧化酶的偶聯物的存在下將測試化合物的系列稀 釋物添加至孔中，并且在室溫下解育2小時。
[0252] 為了測定洗涂后結合至固定的E-選擇素的sLea的量，添加過氧化酶底物一-3， 3 '，5，5 '四甲基聯苯胺(TMB)。3分鐘后，通過添加出P〇4使酶反應停止，并且測定在450nm波長 的光吸收。測定了抑制50%的結合所需要的測試化合物的濃度并且報道為如下方表格所示 的各個糖模擬物E-選擇素括抗劑的IC50值。在下列表格中提供本文公開的示例性化合物的 ICso 值。
[0253] 糖模擬物化合物的E-選擇素括抗劑活性 [0 巧 4]
[0255] 除了報告如上測量的ICso的絕對值，通過測量的測試化合物的ICso和各個測定指 定的內對照(參照）的IC50的比率測定IC50的相對值(rICso)。
[0256] 用Ξ氣甲基(-CF3)基團對化合物22中R3位置的甲基基團的取代沒有顯著地改變化 合物22的E-選擇素括抗劑的活性;然而，取代的確增加了分子的疏水性，從而改善糖模擬物 化合物的生物利用率。
[0巧7]實施例3
[0258] 粘膜炎測定一-腸的重量
[0259] 在第0天和第10天，用150mg/kg 5-氣尿喀晚（5-FU)腹膜內（ip)處理小鼠（C57bl/ 6)。在第二次注射5-即后，用E-選擇素括抗劑(20mg/kg的鹽水溶液，ip，每日兩次)或單獨用 鹽水(0.15M NaCl)處理小鼠4天。隨后將小鼠處死并將小腸去除并稱量W測定炎癥的程度。 圖3示出了顯示代表性實施例的結果的數據。
[0260] 實施例4
[0%1 ]粘膜炎測定一一腸的巨隧細胞浸潤
[0262]使小鼠經歷全身照射(S.OGy)并緊接著用E-選擇素括抗劑（20mg/kg的鹽水溶液， ip，每日兩次)或單獨用鹽水(0.1 5M化C1)處理6天。在第6天將小腸去除并消化W釋放細 胞。通過流式細胞術測定來自小腸的CDUb卞4/80+巨隧細胞的數量。圖4示出了顯示代表性 實施例的結果的數據。
【主權項】
1. 治療和/或預防粘膜炎的方法，其包括對有此需要的個體施用有效量的至少一種選 自以下的化合物:E-選擇素拮抗劑、E-選擇素拮抗劑的藥物可接受的鹽、E-選擇素拮抗劑的 前藥和E-選擇素拮抗劑的前藥的藥物可接受的鹽。2. 如權利要求1所述的方法，其中所述至少一種化合物是糖模擬物。3. 如權利要求1所述的方法，其中所述至少一種化合物選自式(I)的E-選擇素拮抗劑：式（I)的E-選擇素拮抗劑的藥物可接受的鹽、式（I)的E-選擇素拮抗劑的前藥，以及式 (I)的E-選擇素拮抗劑的前藥的藥物可接受的鹽， 其中 R1選自8烷基、C2-8烯基、C2- 8炔基、8鹵代烷基、C2-8鹵代烯基和C2-適代炔基； R2選自 H、-M 和-L-M; R3選自8烷基、C2-8烯基、C2- 8炔基、8鹵代烷基、C2-8鹵代烯基和C2-適代炔基； R4選自-OH和-NZt2，其中Z1和Z2獨立地選自H、Ch烷基、C 2-8烯基、C2-8炔基、Ch鹵代烷 基、C2-8鹵代烯基和C2-8鹵代炔基，Z 1和Z2可以是相同的或不同的，其中Z1和Z2可以連接在一 起以形成環； R5選自C3-8環烷基； R6選自-OH、Ci-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、Ci-8鹵代烷基、C 2-8鹵代烯基和C2-適代炔基； R7選自-CH2OH、8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、8鹵代烷基、C 2-8鹵代烯基和C2-適代炔基； R8選自8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、8鹵代烷基、C2-8鹵代烯基和C 2-適代炔基； L選自連接基團；以及 Μ是非糖模擬物部分，其選自聚乙二醇、噻唑基、色烯基，-c( = 0 )NH(CH2) P4NH2、&-8烷基 和-c ( = Ο) ΟΥ，其中Y選自Ci-4烷基、C2-4烯基和C2-4炔基。4. 如權利要求3所述的方法，其中妒、妒、1?6、1?7和1?8中的至少一個選自&-適代烷基。5. 如權利要求4所述的方法，其中各個Ci-s鹵代烷基獨立地選自-0^、-(^2-(012)"-CH 2X、-CHX2、-CH2-(CH2 )m-CHX2、-CX3和-CH2- (CH2 )m-CX3基團，其中各個m獨立地選自 1 至6的整 數并且各個X獨立地選自F、C1、Br和I。6. 如權利要求5所述的方法，其中至少一個X是F。7. 如權利要求5所述的方法，其中至少一個&―適代烷基選自-CH2X、-CHX2和-CX 3基團。8. 如權利要求7所述的方法，其中X是F。9. 如權利要求6所述的方法，其中R4是N (CH3) 2。10. 如權利要求9所述的方法，其中Z選自&-適代烷基。11. 如權利要求10所述的方法，其中所述&-適代烷基選自CH2X。12. 如權利要求11所述的方法，其中X是F。13. 如權利要求3所述的方法，其中R5是環己基。14. 如權利要求3所述的方法，其中R2是聚乙二醇。15. 如權利要求1所述的方法，其中所述至少一種化合物具有下式：其中η選自1至100的整數。16. 如權利要求1所述的方法，其中所述至少一種化合物具有下式：17. 如權利要求1所述的方法，其中所述至少一種化合物具有下式：18. 如權利要求1所述的方法，其中所述至少一種化合物具有下式：19. 如權利要求1所述的方法，其中所述至少一種化合物具有下式：20. 如權利要求1至19中任一項所述的方法，其中施用所述至少一種化合物減少患者患 有粘膜炎的天數。21. 如權利要求1至19中任一項所述的方法，其中所述粘膜炎是口腔粘膜炎、食道粘膜 炎和/或胃腸道粘膜炎。22. 如權利要求1至19中任一項所述的方法，其中所述粘膜炎是消化道粘膜炎。23. 如權利要求1至19中任一項所述的方法，其中所述粘膜炎是食道粘膜炎。24. 如權利要求1至19中任一項所述的方法，其中所述粘膜炎是胃腸道粘膜炎。25. 如權利要求1至19中任一項所述的方法，其中所述粘膜炎是口腔粘膜炎。26. 如權利要求1至19中任一項所述的方法，其中所述個體患有癌癥。27. 如權利要求1至19中任一項所述的方法，其中所述個體患有頭頸癌、乳腺癌、肺癌、 卵巢癌、前列腺癌、淋巴癌，白血病和/或胃腸道癌癥。28. 如權利要求1至19中任一項所述的方法，其中所述粘膜炎與放射治療和/或化學治 療相關。29. 如權利要求1至19中任一項所述的方法，還包括施用有效量的維拉夫明和/或帕利 夫明。30. 如權利要求1至19中任一項所述的方法，還包括施用有效量的至少一種另外的選自 以下的化合物:MMP抑制劑、炎性細胞因子抑制劑、肥大細胞抑制劑、NSAID、NO抑制劑和抗菌 化合物。31. 如權利要求1至19中任一項所述的方法，還包括施用至少一種藥物可接受的成分。
【專利摘要】治療和/或預防粘膜炎的方法，其包含對有此需要的個體施用有效量的至少一種選自以下的化合物：E-選擇素拮抗劑、E-選擇素拮抗劑的藥物可接受的鹽、E-選擇素拮抗劑的前藥和E-選擇素拮抗劑的前藥的藥物可接受的鹽，以及包含至少一種此類化合物的組合物。
【IPC分類】A61K31/7034, C07H15/207
【公開號】CN105683208
【申請號】
【發明人】約翰·L·麥格納尼, 約翰·M·彼得遜, 英格里德·G·文克勒
【申請人】糖模擬物有限公司
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2014年9月29日