I-T-Ciii-(06-255K沈Q ID N0:47)。
[0095] 該實施方案的膚被鑒定為式(b)的每個膚配體家族中最有效的成員（參見實施例 2)。
[0096] 在仍更進一步的實施方案中，式(b)的膚包含選自-Ci-R-N-Y-W-N-P-Cii-T-レI-N- 1-1'-(：^-(06-255)(569 10^):47)的序列。正如長達10天的檢測窗口所判斷的，使用文中 描述的方法#1初始篩選表明06-255相比余下大部分的雙環前導更為穩定(數據未顯示）。
[0097] 在一個實施方案中，膚配體包含式(C)的序列。如實施例1和表2中描述的，式(C)的 一致性序列含有來自初始前導雙環膚06-256的環1中固定的QKFESR(SEQ ID NO:48)基序及 其所含有的相似衍生物。
[0098] 在另一實施方案中，式（C)的膚包含選自-Ci-Q-K-F-E-S-R-Cii-R-V-D-T-R-Y-Ciii- (06-256)(SEQ ID NO: 49)的序列。06-256在人、大鼠和兔間的交叉反應性數據在表1和表5 中顯不。
[0099] 在一個實施方案中，膚配體包含式(d)的序列。式(d)的膚序列對應于在實施例1和 表1中描述的初始前導雙環膚06-257的序列。06-257在人、大鼠和兔間的交叉反應性數據在 表1和表5中顯不。
[0100] 在一個實施方案中，膚配體包含式(e)的序列。式(e)的一致性序列含有在初始前 導雙環膚06-258中的環1中保守的PYPFR(SEQ ID N0:50)基序，W及在環2的位置2的組氨酸 殘基，其中一致性是基于在初始選擇循環中鑒定的相似的序列(實施例1和表2)。
[0101] 在另一個實施方案中，式（f)的膚包含選自-Ci-(N)a-U-F-P-J-R-Cii-V-Y-Y-P-D- I-Ciii-(沈Q ID N0:51)的序列。
[0102] 在另一個實施方案中，式(e)的膚包含選自-Ci-P-Y-P-F-R-Cii-レH-E-N-レCiii- (06-258KSEQ ID N0:52)的序列。該實施方案的膚被鑒定證實具有高效能，并且在大鼠和 人激膚釋放酶間具有良好交叉反應性(參見表5)。
[0103] 在一個實施方案中，膚配體包含式(f)的序列。如實施例1和表1和2描述的，式(f) 的一致性序列含有來自初始前導雙環膚06-261和06-550的基序，W及來自初始篩選鑒定的 每個最具有前景的膚序列的基序。
[0104] 在更進一步的實施方案中，式(f)的膚包含選自-Ci-(N)a-N/S-F-P-F/Y-R-Cii-V- ￥-￥斗-0-1-。1廣（沈9 10備：53)的序列。
[0105] 在另一實施方案中，式(f)的膚包含選自W下的序列：
[0106] -CrN-N-F-P-F-R-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-(06-261)(沈Q ID N0:54);或者
[0107] -C廣S-F-P-Y-R-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-(06-55〇K沈Q ID N0:55)。
[0108] 在仍然更進一步的實施方案中，式(f)的膚包含選自-Ci-N-N-F-P-F-R-Cii-V-Y-Y- P-D-I-Ciii-(06-261) (SEQ ID NO: 54)的序列。根據選擇，該實施方案的膚被鑒定為最有效 的候選物之一(參見實施例1和表1)。此外，該實施方案的膚被鑒定證實具有高效能，并且在 大鼠和人激膚釋放酶間具有良好的交叉反應性(參見表5)。
[0109] 在一個可替換的實施方案中，式(f)的膚包含選自-Ci-S-F-P-Y-R-Cii-V-Y-Y-P-D- 1-(：^-(06-550)(569 10^:55)的序列。證實06-550的優勢的數據在實施例3和4中描述， 其中其可被理解為是有效的嵌合雙環。特別地，在人、大鼠和兔激膚釋放酶間交叉反應性可 W參見表7。
[0110] 在一個實施方案中，本發明的特定膚配體對人、大鼠和/或兔血漿激膚釋放酶是特 異性的。在另一實施方案中，本發明的特定膚配體對人和/或大鼠血漿激膚釋放酶是特異性 的。在更進一步的實施方案中，本發明的特定膚配體對人血漿激膚釋放酶是特異性的。
[0111] 膚配體的優勢
[0112] 本發明的特定雙環膚具有若干有利的特性，能夠使其作為合適的類藥物分子用于 注射、吸入、鼻、眼、日服或局部施用。運些有利的特性包括：
[0113] -物種交叉反應性。運是臨床前藥效學和藥代動力學評估典型的需求；
[0114] -蛋白酶穩定性。理想地，雙環膚前導候選膚配體應證實對血漿蛋白酶的穩定性、 對上皮Γ膜錯定"）蛋白酶的穩定性、對胃腸蛋白酶的穩定性、對肺表面蛋白酶的穩定性、對 胞內蛋白酶等的穩定性。應當在不同的物種之間維持蛋白酶穩定性，從而可W在動物模型 中開發雙環前導候選物，并有信屯、向人施用；
[0115] -希望的溶解度譜。運是帶電的親水性殘基相對于疏水性殘基的比例W及分子內/ 分子間的氨鍵的比例的函數，其對制劑和吸收目的而言很重要；W及
[0116] -在循環中最佳的血漿半衰期。根據臨床適應癥和治療方案，可能需要開發雙環膚 用于在急性疾病管理設置中的短期暴露，或開發雙環膚W增強在循環中的保留，且因此對 于較慢性疾病狀態的管理是最佳的。
[0117] 藥學可接受的鹽
[0118] 應理解鹽的形式在本發明的范圍內，且引用式（I)的化合物包括所述化合物的鹽 形式。
[0119] 本發明的鹽可W通過傳統的化學方法（例如在Pharmaceutical Salts : Properties,Selection,and Use,Ρ.Heinrich Stahl(編者）.Camille G.Wermuth(編者）， ISBN: 3-90639-026-8,精裝，388頁，2002年8月，中描述的方法），從含有堿性或酸性半簇 (moiety)的母體化合物合成。一般地，該鹽可W通過在水中或在有機溶劑中、或二者的混合 物中使運些化合物的游離的酸或堿形式與合適的堿或酸起反應而制備。
[0120] 酸加成鹽(單鹽或雙鹽)可W由多種酸(無機酸和有機酸)形成。酸加成鹽的示例包 括W選自W下的酸形成的單鹽或雙鹽：乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、藻酸(alginic)、抗壞 血酸（例如心抗壞血酸）^-天冬氨酸、苯橫酸、苯甲酸、4-乙酷氨基苯甲酸、下酸、（+ )精腦 酸、精腦橫酸、（ + )-(is)-精腦-10-橫酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、巧樣酸、環拉酸、十二燒 基硫酸、乙燒-1,2-二橫酸、乙燒橫酸、2-徑乙基橫酸、甲酸、反下締二酸、粘酸、龍膽酸、葡庚 糖酸、D-葡萄糖酸、葡萄糖醒酸(例如D-葡萄糖醒酸）、谷氨酸(例如k谷氨酸）、α-酬戊二酸、 乙醇酸、馬尿酸、氨面酸（例如氨漠酸、鹽酸、氨艦酸）、徑乙橫酸、乳酸（例如（+ )寸-乳酸、 (±)-化-乳酸）、乳糖酸、馬來酸、蘋果酸、（-)-k蘋果酸、丙二酸、（±)-化-扁桃酸、甲基橫 酸、糞-2-橫酸、糞-1,5-二橫酸、1-徑基-2-糞甲酸、煙酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棟桐酸、 雙徑糞酸、憐酸、丙酸、丙酬酸、L-焦谷氨酸、水楊酸、4-氨基-水楊酸、癸二酸、硬脂酸、班巧 酸、硫酸、單寧酸、（ + )A-酒石酸、硫氯酸、P-甲苯橫酸、十一碳締酸和戊酸、W及酷化氨基酸 和陽離子交換樹脂。
[0121] -組具體的鹽包括由W下所形成的鹽：乙酸、鹽酸、氨艦酸、憐酸、硝酸、硫酸、巧樣 酸、乳酸、班巧酸、馬來酸、蘋果酸、徑乙橫酸、反下締二酸、苯橫酸、對甲苯橫酸、硫酸、甲基 橫酸（甲橫酸）、乙燒橫酸、糞橫酸、戊酸、丙酸、下酸、丙二酸、葡萄糖醒酸和乳糖酸。一個具 體的鹽是鹽酸鹽。另一個具體的鹽是乙酸鹽。
[0122] 經修飾的衍生物
[0123] 應理解如文中定義的膚配體的經修飾的衍生物在本發明的范圍內。該經合適修飾 的衍生物的示例包括選自W下的一種或更多種修飾:N端和/或C端修飾；W-個或更多個非 天然氨基酸殘基取代一個或更多個氨基酸殘基（例如W-個或更多個同配位（isosteric) 或等電子氨基酸取代一個或更多個極性氨基酸殘基；W其它的非天然的同配位或等電子氨 基酸取代一個或更多個疏水性氨基酸殘基）；添加間隔基團（spacer group); W-個或更多 個抗氧化氨基酸殘基取代一個或更多個氧化敏感氨基酸殘基；W丙氨酸取代一個或更多個 氨基酸殘基，W-個或更多個D-氨基酸殘基取代一個或更多個心氨基酸殘基;在雙環膚配 體中的一個或更多個酷胺鍵的N-烷基化；W替代鍵(surrogate bond)取代一個或更多個膚 鍵;膚骨架長度修飾；W另外的化學基團置換一個或更多個氨基酸殘基的α-碳上的氨，W及 用合適的胺、硫醇、簇酸和苯酪反應試劑進行的氨基酸的合成后修飾，其中所述的氨基酸例 如半脫氨酸、賴氨酸、谷氨酸/天冬氨酸和酪氨酸。
[0124] 在一個實施方案中，所述經修飾的衍生物包含Ν端和/或C端修飾。
[0125] 在另一實施方案中，所述經修飾的衍生物包含Ν端修飾。在另一實施方案中，Ν端修 飾包含Ν端乙酷基團。在該實施方案中，在膚合成期間，Ν端半脫氨酸基團（基團在文中稱為 Cl)用乙酸酢或其它合適的試劑加帽，產生了 Ν端乙酷化的分子。該實施方案提供了運樣一 種優勢，即去除氨基膚酶可能的識別位點，且避免了雙環膚的降解的可能。
[0126] 在另一實施方案中，所述經修飾的衍生物包含C端修飾。在另一實施方案中，C端修 飾包含酷胺基團。在該實施方案中，在膚合成期間，C端半脫氨酸基團（文中稱為Ciii的基團） 作為酷胺被合成，產生了C端酷胺化的分子。該實施方案提供了運樣一種優勢，即去除簇基 膚酶可能的識別位點，且避免了雙環膚的降解的可能。
[0127] 在一個實施方案中，所述經修飾的衍生物包含W-個或更多個非天然的氨基酸殘 基取代一個或更多個氨基酸殘基。在該實施方案中，可W選擇具有同配位/等電子側鏈的非 天然氨基酸，其不再被降解蛋白酶識別且對祀標效能不具有任何影響。
[0128] 可替換地，可W使用具有受限制的氨基酸側鏈的非天然氨基酸，從而附近膚鍵的 蛋白酶解水解作用在構象上和空間上受到阻礙。特別是，其設及脯氨酸類似物、龐大的側 鏈、Ca-雙取代衍生物(例如氨基異下酸，A化），和環氨基酸，運是一種簡單的衍生物是氨基 環丙基簇酸。
[0129] 在另一實施方案中，脯氨酸殘基可^被心氮雜環下燒簇酸殘基取代，和/或精氨酸 殘基可W被Ν-α-甲基精氨酸或k高精氨酸殘基取代。文中顯示的數據證實該非天然的氨基 酸的存在增強蛋白酶解穩定性，并且同時維持或增強雙環膚配體的祀標親和性。
[0130] 實施例3證實所選擇的06-550膚配體的非天然的衍生物。因此，在一個實施方案 中，本發明提供了式(f)的非天然衍生物，其包含膚，所述膚具有選自W下的序列：
[0131] -C廣S-F-P-Y-比R]-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-((06-550)HA巧5K沈Q ID N0:56);
[0132] -CrS-F-[Aze]-Y-R-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-(WQIDN0:57);
[0133] -CrS-F-[Aze]-Y-比R]-Ci廣V-Y-Y-P-D-I-Cii廣（（06-550)Aze3 HArg5)(SEQ ID NO:58)；
[0134] -CrS-F-P-Y-[醒eR]-Ci廣V-Y-Y-P-D-I-Cii廣（（06-550)NMeAr巧）（SEQ ID NO: 59);和
[0135] -Ci-S-F-[Aze]-Y-[MfeR]-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-((06-550)Aze3 MfeArg5)(SEQ ID NO:60)；
[0136] 其中Aze代表心氮雜環下燒簇酸殘基，hR代表心高精氨酸殘基，W及醒eR代表N-a- 甲基精氨酸殘基。
[0137] 在另一實施方案中，本發明提供了式(f)的非天然衍生物，其包含膚，所述膚具有 選自W下的序列：
[OU引-CrS-F-P-Y-比R]-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-((06-550)HA巧5)(沈Q ID N0:56);
[0139] -CrS-F-[Aze]-Y-比R]-Ci廣V-Y-Y-P-D-I-Cii廣（（06-550)Aze3 HArg5)(SEQ ID NO:58)；
[0140] -CrS-F-P-Y-[醒eR]-Ci廣V-Y-Y-P-D-I-Cii廣（（06-550)NMeAr巧）（SEQ ID NO: 59);和
[0141] -C廣S-F-[Aze]-Y-[MfeR]-Ci廣V-Y-Y-P-D-I-Cii廣（（06-550)Aze3 MfeArg5)(SEQ ID NO:60)；
[0142] 其中Aze代表心氮雜環下燒簇酸殘基，hR代表心高精氨酸殘基，W及醒eR代表N-a- 甲基精氨酸殘基。
[0143] 運些經修飾的膚在人、大鼠和兔激膚釋放酶間的交叉反應性可W參見表7。
[0144] 在又一實施方案中，本發明提供了式(f)的經修飾的衍生物，其包含膚，所述膚具 有選自W下的序列：
[0145] -CrS-F-P-Y-比R]-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-((06-550)HA巧5)(沈Q ID N0:56);和
[0146] -CrS-F-[Aze]-Y-比R]-Ci廣V-Y-Y-P-D-1-Cii廣（（06-550)Aze3 HArg5)(SEQ ID NO:58)；
[0147] 其中Aze代表心氮雜環下燒簇酸殘基，W及hR代表心高精氨酸殘基。
[0148] 該實施方案的膚被證實相比對應的N-甲基修飾的衍生物更合適(參見實施例3)。
[0149] 在仍然更近一步的實施方案中，本發明提供了式(f)的非天然衍生物，其包含膚， 所述膚具有選自-Ci-S-F-[Aze]-Y-比R]-Ci廣V-Y-Y-P-D-I-Ciii-((06-550)Aze3HAr巧） (SEQ ID N0:58)的序列，其中Aze代表レ氮雜環下燒簇酸殘基，W及hR代表k高精氨酸殘 基。
[0150] 該實施方案的膚被證實是良好地耐受的，因為人和大鼠的親和性是高的（參見實 施例3和表7)。
[0151] 在一個實施方案中，所述經修飾的衍生物包含間隔基團的添加。在另一實施方案 中，所述經修飾的衍生物包含添加至N端半脫氨酸（Cl)和/或C端半脫氨酸(Cm)的間隔基 團。在又一實施方案中，所述經修飾的衍生物包含添加至C端半脫氨酸(Ciii)的間隔基團。在 仍然更進一步的實施方案中，所述間隔基團包含連接至兩個或更多個D-精氨酸殘基(合適 地，2個D-精氨酸殘基）的一個或更多個肌氨酸基團（合適地，3個肌氨酸基團）。文中顯示的 數據證實該間隔基團的存在增強了雙環膚配體的水溶性。
[0152] 在一個實施方案中，本發明提供了式(a)的經修飾的衍生物，其包含的膚具有選 自-C廣N-T-W-N-P-W-Ci廣P-W-D-A-P-L-Cii廣San-(D-Arg) 2 ((06-259-02 (San-(D-Arg)2) (SEQ ID N0:61)的序列；其中San代表3個肌氨酸間隔物，W及(D-Arg)2代表兩個D-精氨酸 殘基。
[0153] 如實施例4描述的，證實該實施方案的膚在體內的藥代動力學譜是有利的。特別 地，證實了膚在大鼠循環中顯著的穩定性，因為其清除主要通過腎濾過驅動。此外，如實施 例6中描述的，還證實了該實施方案的膚高度顯著抑制角叉菜膠(carrageenan)誘導的足腫 脹(paw swelling)，其與用于該模型的金標準(嗎I噪美辛)具有可比性。
[0154] 在一個實施方案中，本發明提供了式(f)的經修飾的衍生物，其包含膚，所述膚具 有選自W下的序列：
[0155] -C 廣 S-F-P-Y-R-Ci 廣 V-Y-Y-P-D-1-Cii 廣 Sar3-(D-Arg)2((06-550)-Sar3-(DA 巧 2)) (沈Q ID N0:62);和
[0156] -Ci-S-F-[Aze]-Y-[hR]-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-Sar3-(D-Arg)2((06-550)-Sar3- (DA巧2)Aze3HA巧5)(SEQ ID N0:63);
[0157] 其中，San代表3個肌氨酸間隔物，（D-Arg)2代表兩個D-精氨酸殘基，Aze代表心氮 雜環下燒簇酸殘基，W及hR代表心高精氨酸殘基。
[0158] 該實施方案的膚被證實具有更有利的水溶性(參見實施例3)。更重要的是，San- (D-A巧)2(SEQ ID NO: 98)基團的添加是良好耐受的，因為與沒有該修飾相比其效能保持不 變(參見實施例3和表7)。
[0159] 在另一實施方案中，本發明提供了式(f)的經修飾的衍生物，其包含的膚具有選 自-Ci-S-F-[Aze]-Y-比 R]-Ci 廣 V-Y-Y-P-D-1-Cii 廣 Sar3-(D-Arg)2((06-550)-Sar3-(DArg2) Aze3 HAr巧）（SEQ ID N0:63)的序列；其中，San代表3個肌氨酸間隔物，（D-A巧)2代表兩個 D-精氨酸殘基，Aze代表心氮雜環下燒簇酸殘基，W及hR代表k高精氨酸殘基。在實施例3中 證實該實施方案的膚具有高穩定性，因為觀察到很少的降解產物。此外，如實施例4中描述 的，證實該實施方案的膚在體內藥代動力學譜是有利的。此外，如實施例5中描述的，證實玻 璃體內注射至兔眼部后，該實施方案的膚從玻璃狀液中緩慢的清除。其本身已經是有利的， 該特性另外提供運樣的優勢，即非常適合用于眼部施用的緩釋制劑。
[0160] 在一個實施方案中，所述經修飾的衍生物包含W-個或更多個抗氧化氨基酸殘基 取代一個或更多個氧化敏感氨基酸殘基。在另一實施方案中，經修飾的衍生物包含W苯丙 氨酸殘基取代色氨酸殘基。該實施方案提供了改善獲得的雙環膚配體的藥物穩定性譜的優 勢。
[0161] 在一個實施方案中，所述經修飾的衍生物包含W-個或更多個疏水性氨基酸殘基 取代一個或更多個帶電的氨基酸殘基。在一個可替換的實施方案中，經修飾的衍生物包含 W-個或更多個帶電的氨基酸殘基取代一個或更多個疏水性氨基酸殘基。帶電氨基酸殘基 對比疏水性氨基酸殘基的正確平衡是雙環膚配體重要的性質。例如，疏水性氨基酸殘基影 響血漿蛋白結合的程度，并且因此影響血漿中游離的可用部分的濃度，同時帶電氨基酸殘 基(特別是精氨酸）可W影響膚與細胞表面憐脂膜的相互作用。二者組合可W影響半衰期、 分布體積和膚藥物的暴露，并且可W根據臨床端點進行定制。此外，帶電氨基酸殘基對比疏 水性氨基酸殘基的正確的組合和數值可W減少在注射部位的刺激(為皮下施用的膚藥物）。
[0162] 在一個實施方案中，所述經修飾的衍生物包含W-個或更多個D-氨基酸殘基取代 一個或更多個k氨基酸殘基。該實施方案被認為通過空間阻礙、W及通過D-氨基酸穩定β轉 角構象的傾向，增加蛋白酶解的穩定性(Tugyi等人(2005)PNAS，102(2) ,413-418)。
[0163] 在一個實施方案中，所述經修飾的衍生物在雙環膚配體中包含一個或更多個酷胺 鍵的N-烷基化衍生物。該實施方案被認為是通過對易斷裂酷胺鍵的直接修飾而給予蛋白酶 解保護(Fiacco等人，化embiochem.(2008)，9(14)，2200-3)eN-甲基化還被認為強烈地影響 膚鍵的扭轉角，并被認為有助于細胞穿透和口服利用度（Biron等人（ 2008 )， Angew.Qiem.Int.Ed.,47,2595-99)。
[0164] 在一個實施方案中，經修飾的衍生物包含W替代鍵取代一個或更多個膚鍵，所述 替代鍵選自W下的一個或更多個:N-烷基化衍生物(例如-C0-NR)、還原的膚鍵(例如-C此- NH-)、類膚鍵（例如-NR-畑