26-330)的小分 子的清除而言，顯著更慢。
[0345] 實施例6:選擇的抑制激膚釋放酶的雙環膚對角叉菜膠誘導的足腫脹的作用
[0346] 在該分析中，對比膚 Ac-(06-34-18)Phe2Aze3Tyr4HArg5Ala(ilCH2NH)6(在本研究 中指雙環2,且其在PCT/EP2014/057440的表26b和圖22中公開)評估膚Ac-(06-259-02)- Sar3-(D-Arg)2(在本研究中指雙環3;參見本文中實施例2)。通過在右后足的足底區注射100 化的1 %角叉菜膠溶液，在雄性Sprague-Dawley大鼠中（每組n = 10)誘導炎癥。根據表10，動 物接受膚和嗎I噪美辛的處理。
[0347] 表10:角叉菜膠誘導分析的劑量方案
[0；34 引
[0349] *相對于角叉菜膠施用的給藥時間
[0350] ip =腹腔內
[0351] 載體 = 50mM乙酸鋼緩沖液，pH5.0,20%陽G400和10%KolliphorEL
[0352] 角叉菜膠施用后1、2、4和6小時，通過水置換法測量足體積。使用雙變量AN0VA(2- way AN0VA)對重復測量進行統計學分析(Gra地化d Prism)。
[0353] 該研究的結果在圖6中顯示，其中可W觀察到在所有時間點兩種膚均抑制由角叉 菜膠誘導的足腫脹。W膚或陽性對照、嗎I噪美辛處理均產生足腫脹的高度顯著的降低(P< 0.001)。重要的是，兩種膚和嗎I噪美辛間的抑制程度具有可比性，嗎I噪美辛被認為是在該模 型中的金標準治療半簇。
【主權項】
1. 一種特異于血漿激肽釋放酶的肽配體，其包含多肽，所述多肽包含被至少兩個環序 列分隔的至少三個半胱氨酸殘基，以及分子支架，所述分子支架與多肽的半胱氨酸殘基形 成共價鍵，從而在分子支架上形成至少兩個多肽環，其中所述肽配體包含選自以下任意的 妝序列： (a) -Ci-N-X-ff-N-P-ff-Cii-〇/U-X-X-X-〇/J-X-Ciii-(SEQ ID N0:1)； (b) -Ci-B-N-J-ff-N-P-Cii-X-L-O-X-X-X-Ciii-(SEQ ID N0:2)； (c) -Ci-Q-K-F-E-S-R-Cii-X-X-X-X-X-X-Ciii-(SEQ ID N0:3)； (d) -Ci-P-L-S-D-T-L-Cii-Y-R-R-M-P-P-Ciii-(SEQ ID N0:4)； (e) -Ci-P-Y-P-F-R-Cii-X-H-X-X-X-Ciii-(SEQ ID N0:5);和 (f) -Ci-(N)a-U-J-P-J-R-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-(SEQ ID N0:6)； 或其經修飾的衍生物，或藥學可接受的鹽； 其中： Ci、Cii和Cm分別代表第一、第二和第三半胱氨酸殘基； 下標"a"代表選自0或1的整數； X代表任意氨基酸殘基； 〇代表非極性的脂肪族氨基酸殘基，選自 J代表非極性的芳香族氨基酸殘基，選自F、W和Y; U代表極性的不帶電的氨基酸殘基，選自N、C、Q、M、S和T;以及 B代表極性的帶正電的氨基酸殘基，選自R、H和K。2. 根據權利要求1所述的肽配體，其包含式(a)的序列。3. 根據權利要求1或2所述的肽配體，其中式(a)的肽包含選自-Ci-N-X-W-N-P-W-Ci i-0/ U-X-X-X-〇-X-Ciii-(SEQ ID NO: 7)的序列，例如-Ci-N-T/H/Y-W-N-P-W-Cii-G/S/P-A/V/W/D/ S-D/E/V/T/P-A/G/P/I/R/D-G/P/Y/I-F/I/L/V/R/G/D-Ciii-(SEQ ID N0:8)，特別地，-Ci-N-T/H/Y-ff-N-P-ff-Cii-G/S/P-A/V/ff-D/E/V-A/G/P-G/P-F/I/L/V-Ciii-(SEQ ID N0:9) 〇4. 根據權利要求1至3中任一項所述的肽配體，其中式(a)的肽包含選自以下的序列： -Ci-N-T-ff-N-P-ff-Cii-G-ff-V-G-G-F-Ciii-(06-259)(SEQ ID NO: 10)； -Ci-N-H-ff-N-P-ff-Cii-S-V-E-P-P-V-Ciii-(06-259-01)(SEQ ID NO: 11)； -Ci-N-T-ff-N-P-ff-Cii-P-ff-D-A-P-L-Ciii-(06-259-02)(SEQ ID NO: 12)； -Ci-N-H-ff-N-P-ff-Cii-S-A-D-P-P-I-Ciii-(06-259-03)(SEQ ID NO: 13)； -Ci-N-Y-ff-N-P-ff-Cii-P-ff-D-A-P-L-Ciii-(06-259-04)(SEQ ID NO: 14)； -Ci-N-H-ff-N-P-ff-Cii-S-A-D-P-P-R-Ciii-(06-259-Fl)(SEQ ID NO: 15)； -Ci-N-H-ff-N-P-ff-Cii-P-A-D-I-P-V-Ciii-(06-259-E2)(SEQ ID NO: 16)； -Ci-N-H-ff-N-P-ff-Cii-S-D-D-P-Y-I-Ciii-(06-259-H3)(SEQ ID NO: 17)； -Ci-N-H-ff-N-P-ff-Cii-S-S-D-P-P-V-Ciii-(06-259-H4)(SEQ ID NO: 18)； -Ci-N-Y-W-N-P-W-Cii-S-D-T-R-I-G-Ciii-(06-259-A6)(SEQ ID NO: 19);和 -Ci-N-T-ff-N-P-ff-Cii-S-ff-P-D-I-D-Ciii-(06-259-F2)(SEQ ID N0:20)； 例如-Ci-N-H-W-N-P-W-Cii-S-V-E-P-P-V-Ciii-(06-259-01)(SEQ ID NO: 11); -Ci-N-T-ff-N-P-ff-Cii-P-ff-D-A-P-L-Ciii-(06-259-02)(SEQ ID NO: 12)； -Ci-N-H-W-N-P-W-Cii-S-A-D-P-P-I-Ciii-(06-259-03)(SEQ ID NO: 13);和 -Ci-N-Y-ff-N-P-ff-Cii-P-ff-D-A-P-L-Ciii-(06-259-04)(SEQ ID NO: 14)； 特別地，-Ci-N-T-W-N-P-W-Cii-P-W-D-A-P-L-Ciii-(06-259-02)(SEQIDN0:12)。5. 根據權利要求1所述的肽配體，其包含式(b)的序列。6. 根據權利要求1或5所述的肽配體，其中式(b)的肽包含選自-Ci-K/R-N-Y-W-N-P-Cii-D/T/G-L-I/V/L-E/M/N/P/T/Q/S/Y/G/D/ff/R/H/A-D/G/I/T/A/S/P/V-P/S/T/A/K/G/H/F/Q/ D/L/I/M/R/Y-Ciii-(SEQ ID 勵：21)的序列，例如-(^-1(/1?，-￥-^?-(^-0/1'-1^-1/^4/]\1/ N/P/T-D/G/I/T-P/S/T-Ciii-(SEQ ID N0:22)。7. 根據權利要求5或6所述的肽配體，其中式(b)的肽包含選自以下的序列： -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-V-T-I-S-Ciii-(06-254)(SEQ ID N0:23)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-I-E-T-T-Ciii-(06-254-01)(SEQ ID N0:24)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-I-P-G-P-Ciii-(06-254-02)(SEQ ID N0:25)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-V-M-D-T-Ciii-(06-254-03)(SEQ ID N0:26)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-I-Q-D-A-Ciii-(06-254-F4)(SEQ ID N0:27)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-I-S-I-K-Ciii-(06-254-B3)(SEQ ID N0:28)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-I-P-T-G-Ciii-(06-254-G3)(SEQ ID N0:29)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-V-Q-I-H-Ciii-(06-254-H4)(SEQ ID N0:30)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-I-G-I-T-Ciii-(06-254-G2)(SEQ ID N0:31)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-V-D-T-F-Ciii-(06-254-A4)(SEQ ID N0:32)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-V-E-A-Q-Ciii-(06-254-G4)(SEQ ID N0:33)； -Ci-K-N-F-ff-N-P-Cii-D-L-I-P-I-S-Ciii-(06-254-D3)(SEQ ID N0:34)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-I-ff-T-D-Ciii-(06-254-E2)(SEQ ID N0:35)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-I-P-D-L-Ciii-(06-254-F5)(SEQ ID N0:36)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-L-E-S-T-Ciii-(06-254-E5)(SEQ ID N0:37)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-I-R-P-P-Ciii-(06-254-Dl)(SEQ ID N0:38)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-L-G-I-A-Ciii-(06-254-B9)(SEQ ID N0:39)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-V-H-D-I-Ciii-(06-254-E3)(SEQ ID N0:40)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-I-P-D-M-Ciii-(06-254-D6)(SEQ ID N0:41)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-I-A-D-L-Ciii-(06-254-H3)(SEQ ID N0:42)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-L-H-V-R-Ciii-(06-254-A7)(SEQ ID N0:43)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-I-A-P-Y-Ciii-(06-254-Cl)(SEQ ID N0:44)； -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-G-L-V-Y-S-T-Ciii-(06-254-E6)(SEQ ID N0:45)； -Ci-K-N-Y-W-N-P-Cii-D-L-L-P-D-L-Ciii-(06-254-Bl)(SEQ ID N0:46);和 -Ci-R-N-Y-ff-N-P-Cii-T-L-I-N-I-T-Ciii-(06-255)(SEQ ID N0:47)； 例如-Ci-K-N-Y-W-N-P-Cii-D-L-I-E-T-T-Ciii-(06-254-01)(SEQ ID N0:24); -Ci-K-N-Y-ff-N-P-Cii-D-L-I-P-G-P-Ciii-(06-254-02)(SEQ ID N0:25)； -Ci-K-N-Y-W-N-P-Cii-D-L-V-M-D-T-Ciii-(06-254-03) (SEQ ID NO:26);和 -Ci-R-N-Y-ff-N-P-Cii-T-L-I-N-I-T-Ciii-(06-255)(SEQ ID N0:47)； 特別地，-Ci-K-N-Y-W-N-P-Cii-D-L-I-P-G-P-Ciii-(06-254-02)(SEQ ID N0:25);和 -Ci-R-N-Y-ff-N-P-Cii-T-L-I-N-I-T-Ciii-(06-255)(SEQ ID N0:47)； 更特別地，-Ci-R-N-Y-W-N-P-Cii-T-L-I-N-I-T-Ciii-(06-255) (SEQ ID NO: 47)。8.根據權利要求1所述的肽配體，其包含式(c)的序列。 9 ·根據權利要求8所述的肽配體，其中式(c)的肽包含選自-Ci-Q-K-F-E-S-R-Cii-R-V-D-T-R-Y-Ciii-(06-256)(SEQIDN0:49)的序列。 1 〇.根據權利要求1所述的肽配體，其包含式(d)的序列。11. 根據權利要求1所述的肽配體，其包含式(e)的序列。12. 根據權利要求11所述的肽配體，式(e)的肽包含選自-Ci-P-Y-P-F-R-Cii-L-H-E-N-L-Ciii-(06-258)(SEQIDN0:52)的序列。13. 根據權利要求1所述的肽配體，其包含式(f)的序列。14. 根據權利要求1或13所述的肽配體，其中式(f)的肽包含選自-Ci-(N)a-N/S-F-P-F/ Y-R-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-(SEQ ID N0:53)的序列。15. 根據權利要求13或14所述的肽配體，其中式(f)的肽包含選自以下的序列： -Ci-N-N-F-P-F-R-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-(06-261)(SEQ ID N0:54);或者 -Ci-S-F-P-Y-R-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-(06-550)(SEQ ID N0:55)。16. 根據權利要求1至15中任一項所述的肽配體，其中所述經修飾的衍生物包括選自以 下的一種或更多種修飾:N端和/或C端修飾；以一個或更多個非天然氨基酸殘基取代一個或 更多個氨基酸殘基(例如以一個或更多個同配位或等電子氨基酸取代一個或更多個極性氨 基酸殘基；以其它的非天然的同配位或等電子氨基酸取代一個或更多個疏水性氨基酸殘 基）；添加間隔基團；以一個或更多個抗氧化氨基酸殘基取代一個或更多個氧化敏感氨基酸 殘基；以丙氨酸取代一個或更多個氨基酸殘基，以一個或更多個D-氨基酸殘基取代一個或 更多個L-氨基酸殘基;在雙環肽配體中的一個或更多個酰胺鍵的N-烷基化；以替代鍵取代 一個或更多個肽鍵;肽骨架長度修飾；以另外的化學基團置換一個或更多個氨基酸殘基的 α_碳上的氫，以及用合適的胺、硫醇、羧酸和苯酚反應試劑進行的氨基酸合成后的生物正交 修飾，其中所述的氨基酸例如半胱氨酸、賴氨酸、谷氨酸和酪氨酸。17. 根據權利要求16所述的肽配體，其中所述經修飾的衍生物包含Ν端修飾，例如Ν端乙 酰基團，特別地，其中Ν端半胱氨酸基團(C0用乙酸酐加帽。18. 根據權利要求16所述的肽配體，其中所述經修飾的衍生物包含C端修飾，例如C端酰 胺基團，特別地，C端半胱氨酸基團(Cm)的酰胺化。19. 根據權利要求16所述的肽配體，其中所述經修飾的衍生物包含以一個或更多個非 天然氨基酸殘基取代一個或更多個氨基酸殘基，例如以L-氮雜環丁烷羧酸殘基取代脯氨酸 殘基和/或以Ν-α-甲基精氨酸或L-高精氨酸殘基取代精氨酸殘基。20. 根據權利要求19所述的肽配體，其是式(f)的非天然衍生物，所述非天然衍生物包 含具有選自以下的序列的妝： -Ci-S-F-P-Y-[hR]-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-((06-550)HArg5)(SEQ ID N0:56)； -Ci-S-F-[Aze]-Y-[hR]-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-((06-550)Aze3HArg5)(SEQ ID NO: 58); -Ci-S-F-P-Y-[NMeR]-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-((06-550)NMeArg5)(SEQ ID N0:59);和 -Ci-S-F-[Aze]-Y-[匪eR]-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-((06-550)Aze3匪eArg5)(SEQ ID NO:60)； 其中Aze代表L-氮雜環丁烷羧酸殘基，hR和HArg代表L-高精氨酸殘基，以及NMeR和 NMeArg代表Ν-α-甲基精氨酸殘基； 例如-Ci-S-F-P-Y-[hR]-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-((06-550)HArg5)(SEQ ID N0:56);和 -Ci-S-F-[Aze]-Y-[hR]-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-((06-550)Aze3HArg5)(SEQ ID NO: 58); 其中Aze代表L-氮雜環丁烷羧酸殘基以及hR和HArg代表L-高精氨酸殘基； 特別地，-Ci-S-F-[Aze]-Y-[hR]-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-((06-550)Aze3HArg5)(SEQ ID NO:58) 其中Aze代表L-氮雜環丁烷羧酸殘基以及hR和HArg代表L-高精氨酸殘基。21. 根據權利要求16所述的肽配體，其中所述經修飾的衍生物包含添加的間隔基團，例 如間隔基團添加至N端半胱氨酸(C〇和/或C端半胱氨酸(Cm)。22. 根據權利要求21所述的肽配體，其中所述的間隔基團包含連接至兩個或更多個D-精氨酸殘基(合適地，兩個D-精氨酸殘基)的一個或更多個肌氨酸基團(合適地，三個肌氨酸 基團）。23. 根據權利要求21或22所述的肽配體，其是式(a)的經修飾的衍生物，所述肽配體包 含具有選自-Ci-N-T-W-N-P-W-Cii-P-W-D-A-P-L-Ciii-Sar3-(D-Arg)2((06-259-02(Sar3-(D-Arg) 2) (SEQ ID NO: 61)的序列的肽;其中Sar3代表三個肌氨酸間隔物以及(D-Arg)2代表兩 個D-精氨酸殘基。24. 根據權利要求21或22所述的肽配體，其是式(f)的經修飾的衍生物，所述肽配體包 含具有選自以下的序列的妝： -Ci-S-F-P-Y-R-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-Sar3-(D-Arg)2((06-550)-Sar3-(DArg2))(SEQ ID NO:62);和 -Ci-S-F-[Aze]-Y-[hR]-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-Sar3-(D-Arg)2((06-550)-Sar 3-(DArg2) Aze3HArg5)(SEQ ID NO:63)； 其中Sar3代表三個肌氨酸間隔物，（D-Arg)2代表兩個D-精氨酸殘基，Aze代表L-氮雜環 丁烷羧酸殘基，以及hR和HArg代表L-高精氨酸殘基； 例如-Ci-S-F-UzehY-Ehl^-Cii-V-Y-Y-P-D-I-Ciii-San-O-ArghGoe-SSOhSan-CDArgsMzeSHArgSKSEQ ID N0:63); 其中Sar3代表三個肌氨酸間隔物，（D-Arg)2代表兩個D-精氨酸殘基，Aze代表L-氮雜環 丁烷羧酸殘基，以及hR和HArg代表L-高精氨酸殘基。25. 根據權利要求1至24中任一項所述的肽配體，其中所述藥學可接受的鹽選自鹽酸鹽 或乙酸鹽。26. 根據權利要求1至25中任一項所述的肽配體，其對人、大鼠和/或兔血漿激肽釋放酶 是特異性的，例如人和/或大鼠血漿激肽釋放酶，特別是人血漿激肽釋放酶。27. -種藥物組合物，其包含權利要求1至26中任一項所述的肽配體，所述肽配體與一 種或更多種藥學可接受的賦形劑組合。28. 權利要求1至26中任一項所述的肽配體在預防、抑制或治療炎癥狀態、變應性超敏 反應、癌癥、細菌或病毒感染、眼科疾病和自體免疫性疾病中的用途。
【專利摘要】本發明涉及共價結合至分子支架的多肽，其中兩個或更多個肽環在支架的附著點之間相對。特別地，本發明描述了對人和大鼠的蛋白酶血漿激肽釋放酶特異的、并且在一個或兩個肽環中存在修飾以增強效能和/或蛋白酶抗性的肽。
【IPC分類】A61P31/12, A61P27/02, A61P35/00, A61P37/08, A61P37/02, A61P31/04, A61K38/10, C07K7/08, A61P29/00
【公開號】CN105683211
【申請號】
【發明人】D·托伊費爾, C·斯塔切, E·沃克
【申請人】拜斯科醫療有限公司
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2014年10月28日