Rev.Immunol.2008;8(l):34-47,Koh;rt等.， Immunotherapy 2012;4(5):511-527)。具有 158V多態性的FCRG3A(CD16)基因 （SEQ ID NO.: 10)被用作示例來構建本發明的嵌合受體。運種變體編碼對Ig具有更高親和力的受體，并已 顯示介導優越的 ADCC(Ferris等，J. Clin. Oncol. 2010 ; 28 (28) :4390-4399 ;Koene 等， Bloodl997; 90(3) : 1109-1114; Cartron等，Blood 2002; 99(3) :754-758 ;Weng等， J. Clin. Oncol. 2003; 21 (21): 3940-3947 ;Dair〇zzo 等，Cancer Res. 2004; 64( 13) :4664- 4669;Hatjiharissi等，Blood 2007; 110(7):2561-2564;Musolino等，J.Clin.Oncol.2008; 26(11):1789-1796;Bibeau等，J.Clin.Oncol.2009;27(7):1122-1129;Ahlgrimm等，Blood 2011; 118(17) :4657-4662;Veeramani等，Blood 2011; 118( 12):3:347-3349)。事實上，與含 有更普遍FI58變體的嵌合受體作邊到邊的比較（side-to-side comparison)，CD16V-BB-C 對人Ig Fc具有顯著更高的結合能力，誘導更強烈的增殖和細胞毒性，產生最近的研究結 果，從而定位親和力在嵌合抗原受體功能中的作用化ono等，Cancer Res .2002; 62(20): 5813-5817;Delgado等，Cancer Res.2010;70(23):9554-956)。當前"第二代"嵌合受體將刺 激分子與共刺激分子結合W增強信號傳導和防止活化誘導的調亡。因此，CD16V158與由CD3 ζ和4-lBB(CD137)串聯組成的刺激分子結合。事實上，與通過單獨CD3C或化εΚΙ 丫起作用的 受體相比，CD16V-BB-C受體誘導明顯更優越的Τ細胞活化，增殖和細胞毒性。
[0140] 臨床試驗結果不斷證實，表達識別腫瘤細胞表面抗原并可傳導刺激信號的受體的 遺傳學改造 Τ細胞的臨床潛力（Pule等，Nat.Med . 2008 ; 14( 11): 1264-1270 ;Porter等， OncLive 2011;25;365(8):725-733;化enjens等，Blood 2011;118(18):4817-4828;Till 等，Blood 2012; 119( 17): 3940-3950 ;Kochenderfer等，Blood 2012; 119( 12): 2709-2720; Brent jens 等，Sci.Transl.Med. 2013; 5(177) :177ral38)。最值得注意的是，顯著的腫瘤減 少和/或完全消退在B細胞惡性腫瘤患者中有報道，運些患者接受了通過病毒轉導表達針對 CD19或CD20的嵌合抗原受體的自體T淋己細胞(Porter等，OncLive 2011;25;365(8):725- 733;化enjens等，Blood 2011; 118( 18) :4817-4828;Till等，Blood 2012; 119(17) :3940- 3950;Kochenderfer等，Blood 2012;1 19( 12):2709-2720 ; Brentjens等， Sci.Transl.Med.2013;5(177):177ral38)。將運種策略擴展至其它腫瘤需要相當大的努 力，包括開發另一種嵌合抗原受體構建物，優化大規模轉導條件W符合規范要求。在運方 面，本文描述的CD16V-BB-C受體通過允許一種受體用于多種癌癥細胞類型來促進T細胞療 法的實施。它還允許同時祀向多種抗原，該策略對于腫瘤利用的免疫逃逸機制最終可能是 有利的，如最近的報道所掲示的，缺乏單一特異性的嵌合受體所祀向的標記物的亞克隆導 致白血病復發。無論何時需要，通過簡單的停止抗體施用可結束抗體導向的細胞毒性。由于 表達CD 16V-B Β-ζ的T細胞僅被結合于祀細胞的抗體所激活，可溶性免疫球蛋白對輸注的 Τ細胞不發揮任何刺激作用。然而，通過使用mRNA電穿孔W瞬時表達CD 16V-B Β-ζ受體從 而限制任何潛在的自體免疫反應性來測試該策略的臨床安全性是重要的。如本文所掲示， mRNA電穿孔能非常有效地表達該受體。
[0141] 抗體療法已成為許多癌癥亞型的標準療法;其臨床療效主要取決于其通過化受體 接合觸發 ADCC 的能力巧 erris 等.，J. Clin. Oncol. 2010; 28(28) :4390-4399) eADCC 的主要效 應子是NK細胞，但它們的功能可在癌癥患者中受損。例如，據報道，與來自早期疾病患者或 健康獻血者樣品中所得到外周血單核細胞相比，來自胃癌患者和晚期患者的外周血單核細 胞的過表達皿R2的胃癌細胞的曲妥珠單抗介導的ADCC顯著降低。此外，反應可能受到其他 因素的影響，包括NK細胞抑制受體及其配體的基因型。本發明所呈現的結果表明，輸注由 CD16V- B B -ζ受體作遺傳學工程改造的自體T細胞應該顯著提高ADCC。因為組合CD3C/4- 1ΒΒ信號也導致Τ細胞增殖，在腫瘤部位應有活化Τ細胞的累積，運可能會進一步增強它們的 活性。CD16V-B Β-ζ受體不僅可在活化的Τ淋己細胞中還可在休眠的外周血單核細胞中通 過mRNA電穿孔表達，該過程從血液采集到CD 16V- Β Β -ζ表達細胞注入僅需幾個小時，因此 非常適合臨床應用。
[0142] 本發明不限于本文所述的【具體實施方式】的范圍。事實上，前述描述中，除那些本文 所描述的之外，本發明的各種修改對于那些本領域人員是顯而易見的。運種修改也將落入 所附權利要求的范圍內。
[0143] 所有專利、申請、出版物、試驗方法、文獻和本文所列其他材料，其全部通過引用并 入本文，如同實際存在于本說明書中一樣。
[0144] 序列表
[0145]
[0146]
[0147]
[014 引
【主權項】
1. 一種嵌合受體，其包含：（a)F158FCGR3A或V158FCGR3A變體的胞外配體一結合區；（b) CD8a的鉸鏈區和跨膜區；和(c)包括4-1BB信號傳導區和CD3G信號傳導區的胞漿區。2. 權利要求1所述的嵌合受體，其中所述嵌合受體還包含CD8a的信號肽。3. 權利要求1或2所述的嵌合受體，其中所述F158FCGR3A和V158FCGR3A變體的胞外配 體一結合區分別由SEQ ID NO: 16和SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列組成。4. 權利要求1 - 3任一項所述的嵌合受體，其中所述C D 8 α的鉸鏈區和跨膜區由S E Q ID Ν0:3所示的氨基酸序列組成。5. 權利要求1-4任一項所述的嵌合受體，其中所述4-1ΒΒ信號傳導區由SEQ ID Ν0:4所 示的氨基酸序列組成。6. 權利要求1-5任一項所述的嵌合受體，其中所述CD3G信號傳導區由SEQ ID Ν0:5所示 的氨基酸序列組成。7. 權利要求2-6任一項所述的嵌合受體，其中所述⑶8α的信號肽由SEQ ID Ν0:6所示的 氨基酸序列組成。8. 權利要求1所述的嵌合受體，其包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 15的所示的氨基酸序 列的第22-436殘基。9. 權利要求1所述的嵌合受體，其包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序 列。10. -種分離的多核苷酸，其包含編碼權利要求1-9任一項所述的嵌合受體的核苷酸序 列。11. 權利要求10所述的分離的多核苷酸，其包含SEQ ID N0:9或SEQ ID NO: 17所示的核 苷酸序列。12. 權利要求10所述的分離的多核苷酸，其包含SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 18所示的 核苷酸序列。13. 權利要求10或權利要求12所述的分離的多核苷酸，其包含SEQ ID NO: 11所示的核 苷酸序列。14. 權利要求10、12或13所述的分離的多核苷酸，其包含SEQ ID NO: 12所示的核苷酸序 列。15. 權利要求10和12-14任一項所述的分離的多核苷酸，其包含SEQ ID NO: 13所示的核 苷酸序列。16. 權利要求10和12-15任一項所述的分離的多核苷酸，其包含SEQ ID NO: 14所示的核 苷酸序列。17. -種藥物組合物，其包含權利要求10-16任一項所述的多核苷酸和藥學上可接受的 載體或賦形劑。18. -種載體，其包含權利要求10-16任一項所述的多核苷酸。19. 權利要求18所述的載體，其中所述多核苷酸操作性地與至少一個調控元件連接，以 便表達所述多核苷酸編碼的嵌合受體。20. 權利要求18或19所述的載體，其為病毒載體。21. 權利要求20所述的載體，其中所述病毒載體為逆轉錄病毒載體或慢病毒載體。22. -種分離的宿主細胞，其包含權利要求1-9任一項所述的嵌合受體。23. 權利要求22所述的宿主細胞，其為T淋巴細胞或NK細胞。24. 權利要求23所述的宿主細胞，其中所述T淋巴細胞或NK細胞經離體活化和/或擴增。25. 權利要求24所述的宿主細胞，其中所述T淋巴細胞在有一種或多種選自下組的試劑 存在下被活化:抗-⑶3/⑶28，IL-2，和植物凝集素。26. 權利要求24所述的宿主細胞，其中所述NK細胞在有一種或多種選自下組的試劑存 在下被活化：CD137配體蛋白，CD137抗體，IL-15蛋白，IL-15受體抗體，IL-2蛋白，IL-12蛋 白，IL-21蛋白，和K562細胞系。27. 權利要求25或26所述宿主細胞，其為分離自癌癥患者的自體T淋巴細胞或自體NK細 胞。28. 權利要求25或26所述宿主細胞，其為同種異體T淋巴細胞或同種異體NK細胞。29. 權利要求28所述的宿主細胞，其中，所述同種異體T淋巴細胞中的內源性T細胞受體 得到抑制或消除。30. -種藥物組合物，其包含權利要求18 - 21任一項所述的載體或權利要求22 - 29任 一項所述的宿主細胞，以及藥學上可接受的載體或賦形劑。31. 權利要求30所述的藥物組合物，其進一步包含對癌細胞施加細胞毒性的抗體。32. 權利要求31所述的藥物組合物，其中所述抗體與癌細胞結合并具有與人CD16結合 的人的或人源化的Fc部分。33. 權利要求31所述的藥物組合物，其中所述抗體選自下組:利妥昔單抗、曲妥珠單抗、 hul4.18K322A、依帕珠單抗、西妥昔單抗和拉貝珠單抗。34. -種增強有此需要的個體中基于抗體的癌癥免疫治療的療效的方法，所述方法包 含將治療有效量的T淋巴細胞或NK細胞施用于該個體，所述細胞表達權利要求1 一 9任一項 所述的嵌合受體，其中所述個體正在接受結合于癌細胞的抗體治療。35. 權利要求34所述的方法，其中所述抗體具有與人CD16結合的人的或人源化的Fc部 分。36. 權利要求34或35所述的方法，其中所述癌癥選自下組:腺癌、淋巴瘤、肉瘤、母細胞 瘤和白血病。37. 權利要求34或35所述的方法，其中所述癌癥選自下組:B-細胞來源的癌癥，乳腺癌， 胃癌，神經母細胞瘤，骨肉瘤，肺癌，黑色素瘤，前列腺癌，結腸癌，腎細胞癌，卵巢癌，橫紋肌 肉瘤，白血病和霍奇金氏淋巴瘤。38. 權利要求37所述的方法，其中所述B-細胞來源的癌癥選自下組:B細胞急性淋巴細 胞白血病，B細胞慢性淋巴細胞白血病和B細胞非霍奇金淋巴瘤。39. 權利要求34所述的方法，其中所述抗體選自下組：利妥昔單抗，曲妥珠單抗， hul4.18K322A，依帕珠單抗，西妥昔單抗和拉貝珠單抗。40. 權利要求34 - 39任一項所述的方法，其中所述T淋巴細胞或NK細胞為分離自所述個 體的自體T淋巴細胞或自體NK細胞。41. 權利要求40所述的方法，其中，在施用于個體之前，所述自體T淋巴細胞或自體NK細 胞經離體活化或擴增。42. 權利要求34 - 39任一項所述的方法，其中所述T淋巴細胞或NK細胞為同種異體T淋 巴細胞或同種異體NK細胞。43. 權利要求42所述的方法，其中所述同種異體T淋巴細胞為抑制了或消除了內源性T 細胞受體表達的Τ淋巴細胞。44. 權利要求42或43所述的方法，其中，所述在施用于個體之前，所述同種異體Τ淋巴細 胞或同種異體ΝΚ細胞經離體活化和/或擴增。45. 權利要求34 - 44任一項所述的方法，其中，用選自下組的方法將所述嵌合受體引入 所述Τ淋巴細胞或ΝΚ細胞:逆轉錄病毒轉導，慢病毒轉導，DNA電穿孔和RNA電穿孔。46. -種增強個體中Τ淋巴細胞或ΝΚ細胞抗體一依賴細胞毒性(ADCC)的方法，所述方法 包括將治療有效量的Τ淋巴細胞或ΝΚ細胞施用給該個體，所述細胞表達權利要求1-9任一項 所述的嵌合受體。47. 權利要求46所述的方法，其中所述個體正在接受與癌細胞結合的抗體治療。48. 權利要求47所述的方法，其中所述抗體具有與人CD16結合的人的或人源化的Fc部 分。49. 權利要求47所述的方法，其中所述抗體選自下組：利妥昔單抗，曲妥珠單抗， hul4.18K322A，依帕珠單抗，西妥昔單抗和拉貝珠單抗。50. 權利要求46-49任一項所述的方法，其中所述個體為具有癌癥的人患者。51. 權利要求50所述的方法，其中所述癌癥選自下組:腺癌、淋巴瘤、肉瘤、母細胞瘤和 白血病。52. 權利要求50所述的方法，其中所述癌癥選自下組:B-細胞來源的癌癥，乳腺癌，胃 癌，神經母細胞瘤，骨肉瘤，肺癌，黑色素瘤，前列腺癌，結腸癌，腎細胞癌，卵巢癌，橫紋肌肉 瘤，白血病和霍奇金氏淋巴瘤。53. 權利要求53所述的方法，其中所述B-細胞來源的癌癥選自下組:B細胞急性淋巴細 胞白血病，B細胞慢性淋巴細胞白血病，和B細胞非霍奇金淋巴瘤。54. 權利要求46-53任一項所述的方法，其中所述T淋巴細胞或NK細胞為分離自個體的 自體T淋巴細胞或自體NK細胞。55. 權利要求54所述的方法，在施用給個體之前，所述自體T淋巴細胞或自體NK細胞經 離體活化或擴增。56. 權利要求46-53任一項所述的方法，其中所述T淋巴細胞或NK細胞為同種異體T淋巴 細胞或同種異體NK細胞。57. 權利要求56所述的方法，其中所述同種異體T淋巴細胞為抑制了或消除了內源性T 細胞受體表達的T淋巴細胞。58. 權利要求56或57所述的方法，其中在施用給個體之前，所述同種異體T淋巴細胞或 同種異體NK細胞經離體活化和/或擴增。59. 權利要求46-58任一項所述的方法，其中用選自下組的方法將所述嵌合受體引入所 述T淋巴細胞或NK細胞:逆轉錄病毒轉導，慢病毒轉導，DNA電穿孔和RNA電穿孔。60. 權利要求41、44、55和58任一項所述的方法，其中所述T淋巴細胞可在選自下組的一 種或多種試劑存在下被活化:抗-CD3/CD28，IL-2，和植物凝集素。61. 權利要求41、44、55和58任一項所述的方法，其中所述NK細胞可在選自下組的一種 或多種試劑存在下被活化:CD137配體蛋白質，CD137抗體，IL-15蛋白，IL-15受體抗體，IL-2 蛋白，IL-12蛋白，IL-21蛋白，和K562細胞系。 2〇62.權利要求34-61任一項所述的方法，進一步包括給所述個體施用治療有效量的IL-
【專利摘要】本發明涉及結合人免疫球蛋白Fc部分并遞送活化信號的嵌合受體。本發明的嵌合受體可包含F158？FCGR3A或高親和V158？FCGR3A變體的胞外配體－結合區，CD8α的鉸鏈區和跨膜區，和CD3ζ和4-1BB的信號傳導區。本發明的嵌合受體對利妥昔單抗、曲妥珠單抗、hu14.18K322A和其它治療抗體具有高親和力，使其可用于增強針對各種癌癥的抗體治療效果。
【IPC分類】C07K16/28, C07K14/47, C07K14/705
【公開號】CN105683214
【申請號】
【發明人】D·坎帕納, K·酷杜
【申請人】新加坡國立大學, 圣朱迪兒童研究醫院
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2014年10月17日