專利名稱：一種含有枯草芽孢桿菌的防腐保鮮劑的制作方法
背景技術：
水果蔬菜在采摘后貯藏運輸的過程中，由于微生物侵染而發生腐爛，或者由于采后自然的衰老，品質下降，甚至最終失去食用價值，這些是導致水果蔬菜收獲后損失的主要原因。據統計，全世界平均年損失率為25％，發展中國家腐爛損失率則更高，達到40％～50％。目前，世界各國采用的防腐保鮮方法很多，分為物理保鮮法、化學保鮮法、薄膜保鮮法三大類，其中以化學保鮮法保鮮應用的歷史最長，效果最好。托布津、苯來特、特克多、多菌靈等等是一些常用的果蔬化學防腐保鮮劑。但是，進入二十世紀九十年代以后，由于這些化學制劑對人的毒副作用愈來愈受人重視，其中大多數制劑已先后被美國環境保護局和歐盟相應機構宣布禁止使用。
1980年以來，世界各國的科學家紛紛研發能夠用于果蔬防腐保鮮的生物制劑。先后有將啤酒酵母、哈茨木霉、假單胞菌、球菌和枯草芽孢桿菌用于果蔬貯藏病害防治的報道并有產品登記。國內在1990年以來先后報道了D-67-2、Bs-98、Bs-208等幾株對植物真菌病原菌有拮抗作用的細菌菌株，它們主要被用于番茄、草莓的灰霉病，水稻紋枯病，蘆筍莖枯病等等田間病害的防治。
水果蔬菜往往是人們直接入口的食物，每天攝入量很大，而且可能是連同果皮一起吃掉。因此為了安全起見，對它們的防腐劑和保鮮劑要求很高。枯草芽孢桿菌是可以從人與動物身上或體內分離到的有益微生物。很多試驗證明了它對人類和動物的健康有幫助。早在二十世紀就有人將其生產為藥片供口服，以改善胃腸消化功能。以枯草芽孢桿菌制劑作為果蔬防腐劑，從而替代多菌靈、苯來特、特克多等化學合成的殺真菌劑，對保證食品安全大有幫助。在果蔬防腐保鮮方面國內有商業開發價值的枯草芽孢桿菌菌株未見有報道。
發明內容
本發明的目的是提供一種含有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCCM204085的發酵液和活芽孢的防腐保鮮劑。枯草芽孢桿菌CCTCC M204085已于2004年12月2日保藏在中國典型培養物保藏中心(CCTCC)(地址在武漢大學)，保藏號為CCTCC M204085。
本發明的另一目的是提供所述防腐保鮮劑的用途，用于水果蔬菜貯藏期的保鮮防腐。
本發明的進一步目的是提供一種枯草芽孢桿菌CCTCC M204085。
發明人從土壤中分離得到的二千多個細菌菌株中篩選得到的枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株。對比試驗發現它在果蔬防腐保鮮的效果優于對照菌株。發明人以這個菌株為基礎研究了它的生物學特性，發酵工藝，制劑配方，應用技術與方法，最終完成了本發明，形成了一類以枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌發酵液或芽孢為主要活性成份的果蔬防腐保鮮劑。
本發明提供了一種的防腐保鮮劑，其中含有枯草芽孢桿菌CCTCCM204085。
本發明所述的防腐保鮮劑，它是可濕性粉劑、水懸浮劑、泡騰顆粒、片劑。
可濕性粉劑各組分的重量百分比為菌細胞含量5×108～1×1010個CFU/g十二烷基苯磺酸鈉 0.2％～20％木素磺酸鈉/鈣 0.1％～20％硬脂酸鈉 0.1％～3％白碳黑(膨化) 2％～10％絹云母粉 余量pH4.0～7.0。
水懸浮劑各組分的重量百分比為菌細胞含量5×108～3×109個CFU/g十二烷基苯磺酸鈉 0.2％～20％Chitosan 0.1％～10％
羧甲基纖維素鈉0％～10％黃原膠0％～10％苯甲酸鈉 0.5％～2％水余量pH2.0～7.0。
泡騰顆粒、片劑各組分的重量百分比為菌細胞含量5×108～3×1010個CFU/g表面活性劑0.5％～20％崩解劑(酸/堿性化合物) 3％～30％粘合劑2％～25％助崩劑2％～15％填充物余量。
本發明所述的防腐保鮮劑，其中表面活性劑選自十二烷基磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈣、木質素磺酸鈉、木質素磺酸鈣、纖維素磺酸鈉、茶枯粉、皂角粉中的一種或多種；崩解劑酸性化合物選自檸檬酸、酒石酸、蘋果酸、己二酸、富馬酸、乳酸、硼酸中的一種或多種；堿性化合物選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀中的一種或多種；粘合劑選自聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇(聚合數12000～20000)中的一種或多種；助崩劑選自可溶性淀粉、糊精、羧甲基纖維素鈉中的一種或多種；填充劑選自硅藻土、輕質碳酸鈣、絹云母粉中的一種或多種。
本發明所述的防腐保鮮劑，其特征在于，它是還含有化學殺菌劑的復配制劑。其中化學殺菌劑選自百菌清、特克多、米鮮胺、異菌脲、甲基托布津、農利靈、三環唑、多菌靈的一種或多種。
本發明進一步提供了所述防腐保鮮劑的用途，將所述防腐保鮮劑用于水果蔬菜貯藏期間的防腐保鮮，防止青霉、綠霉、灰霉、輪紋病、黑斑病、輪霉病、褐腐病、酸腐病的侵染。其中水果蔬菜優選蘋果、梨、柑、桔、橙、葡萄、花椰菜、西蘭花、蒜苔、韭菜、西紅柿。
本發明還提供一種枯草芽孢桿菌CCTCC M204085。
本發明中枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株的特征
a、個體形態特征枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株營養體為桿狀，兩端橢園，大小3.0×0.8(μm)，周生鞭毛。芽孢橢園形，大小1.7×0.7(μm)，芽孢生于菌體中間，芽孢不使芽孢囊膨大。
b、菌落形態枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株在牛肉汁蛋白胨瓊脂平板上培養時，單菌落明顯隆起，菌落邊緣波浪形，顏色淡黃色，質地為不透明狀，不產生色素。肉湯靜置培養時形成菌膜，不形成菌環，培養液不渾濁無沉淀。
c、生理生化特性枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株與枯草芽孢桿菌標準菌株對比，生理生化特征相同H2O2酶反應陽性，V.P.反應陽性，硝酸鹽還原陽性，明膠水解，檸檬酸鈉利用，二羥基丙酮形成，酪素水解，淀粉水解，均呈陽性。D-葡萄糖、D-木糖、L-阿拉伯糖、D-甘露醇利用也都為陽性。利用葡萄糖不產氣。卵磷酯反應，苯丙氨酸脫氫酶反應，酪氨酸分解均呈陰性。7％NaCl濃度水溶液中可生長。最佳生長繁殖溫度30℃，53℃以上不生長。枯草芽孢桿菌CCTCC M204085在V.P.培養液中生長后，培養液pH值為7.92。
d、與常見枯草芽孢桿菌的區別枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株從細菌分類學角度看，屬于枯草芽孢桿菌。與已報道過的枯草芽孢桿菌比較，本菌株的特點在于它們對青霉素的高度耐藥性。在青霉素濃度高達1000單位的濾紙片上點種枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株并移接到牛肉汁蛋白胨瓊脂平板上，該菌株可以很正常的生長繁殖形成菌苔并且對柑桔綠霉、灰霉病菌、輪紋病菌等指示菌產生抑菌圈。
枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株與國內外已經篩選得到的一些可以用于水果、蔬菜防腐的酵母菌和芽孢桿菌菌株相比，有使用效果好、芽孢存活率高、發酵菌數多等優點。
生物體保藏說明枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCC M204085保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，地址武漢大學，保藏編號CCTCC M204085，保藏日期2004年12月2日。
具體實施例方式
枯草芽孢桿菌CCTCC M204085的防腐保鮮效果枯草芽孢桿菌CCTCC M204085對部分水果蔬菜的防腐保鮮扼要列表如下(見表1)表1枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株對部分水果蔬菜防腐保鮮效果
*.TL-6為本發明人分離篩選得到的另一個枯草芽孢桿菌菌株(發明人可提供)。
**.為病指數值。
枯草芽孢桿菌CCTCC M204085的液體發酵工藝a、斜面菌種斜面菌種培養基配方常規的馬鈴薯蔗糖瓊脂(馬鈴薯去皮切片200克已煮汁，蔗糖20克，瓊脂15克，水1000ml，pH自然)。斜面菌種培養溫度28～32℃；培養時間3天。
b、液體發酵液體發酵培養基配方葡萄糖0％～2％，豆餅粉0.3％～4.5％，酵母粉0.1％～1.2％，麥麩0％～2.5％，米粉0％～4％，魚粉0％～2.5％，玉米粉0％～4％，磷酸二氫鉀0.1％～0.8％，硫酸鎂0.1％～0.6％，NaCl 0％～1％。消前pH7.0～7.5。液體發酵溫度28℃～32℃，攪拌轉速120rpm/min～350rpm/min，通氣量1∶0.6～1.5，發酵周期因不同配方而變化，最短30小時，最長72小時，至芽孢囊完全形成且有30％左右芽孢脫落時放罐。
c、后處理方法發酵液經碟片式離心機離心去水，留菌漿。將菌漿用噴霧干燥方法干燥得枯草芽孢桿菌CCTCC M204085芽孢原粉。原粉中菌量為1×1010cfu/g-3×1010cfu/g。
枯草芽孢桿菌CCTCC M204085固體發酵工藝a、種子制備斜面菌種的制備方法同上。
固體發酵培養基滅過菌后用液體搖瓶菌種(或種子罐發酵菌種)接種。種子發酵培養液配方為20％馬鈴薯煮汁當水，加1％～3％葡萄糖，0％～0.5％NaCl，0.1％～2％蛋白胨，0％～0.8％酵母膏。
用斜面菌種制備孢子懸浮液后接種搖瓶或種子罐。發酵溫度28～30℃，搖床轉速200rpm/min(或發酵罐轉速120rpm/min～350rpm/min，通氣量0.6％～1.2％)。發酵至對數增殖中期為宜。
b、固體發酵培養基固體發酵培養基配方為麥麩2％～20％，豆餅粉1％～10％，玉米粉1％～10％，葡萄糖1％～10％，磷酸二氫鉀0.1％～2.0％，輕質碳酸鈣0.3％～5％，大米粉0％～15％，用珍珠巖補足至100％(w/w)。水的用量為∶料∶水＝1∶1.0～1.3(w/w)。
固體發酵培養基配制完畢后用高壓蒸汽滅菌，121℃，維持30分鐘。
c、發酵工藝參數接種量1％～10％(v/w)。接種后，按通風曲池法或盤架法進行發酵。發酵溫度28℃～32℃(控制料溫)，發酵周期48～120小時。以孢子囊完全成熟，且有30％左右芽孢脫落為判斷發酵終止的標準。
d、干燥與粉碎發酵結束后以熱風風干物料，熱風溫度控制在55℃以下。物料干燥后先用溫升較低的粉碎機粉碎至60目～80目，過篩去除較粗的麩皮等雜質。然后用氣流粉碎機再粉碎，過325目篩即成。此種粉體可以作為原粉使用，原粉中含菌量為1×1010cfu/g-1×1011cfu/g。
枯草芽孢桿菌CCTCC M204085制備果蔬防腐保鮮劑a、可濕性粉劑可濕性粉劑配方十二烷基苯磺酸鈉 0.2％～20％(w/w，下同)木素磺酸鈉 0.1％～20％膨化白碳黑 2％～20％枯草芽孢桿菌CCTCC M204085原粉5×108～1×1010CFU/g絹云母粉 補充至100％上述原料按比例稱取，投入混合機械中，充分混勻后經過噴射式氣流粉碎機，粉碎至325目過篩，包裝。
b、水懸劑枯草芽孢桿菌CCTCC M204085原粉5×108～1×1010CFU/ml二甲苯 0％～10％十二烷基苯磺酸鈉 0.2％～20％Chitosan 0.1％～10％羧甲基纖維素鈉 0％～10％黃原膠 0％～10％苯甲酸鈉 0.5％～2％水 補充至100％pH 2.0～7.0(用稀鹽酸調)上述原料按比例稱取后，投入配料池混勻，經膠體磨磨至95％過325目篩后裝瓶。
c、泡騰劑(顆粒劑或片劑)
枯草芽孢桿菌CCTCC M204085原粉5×108～3×1010個CFU/g十二烷基苯磺酸鈣/鈉 0.2％～20％崩解劑(酸/堿性化合物)3％～30％粘合劑 2％～25％助崩劑 2％～15％填充物 余量上述原料混合均勻后用壓片機壓片或者用擠壓造粒機造粒。
實施例1枯草芽孢桿菌CCTCC M204085液體發酵并制備芽孢原粉的工藝a、菌種準備斜面菌種的培養基去皮馬鈴薯切成的薄片200克，加水1000ml煮汁(100℃，20分鐘)，去渣留汁。煮的過程中適時適量補水至煮出的汁為1000ml。加蔗糖20克，溶化。再加瓊脂15克，融化瓊脂(融化瓊脂的過程中亦要適量補充蒸發掉的水)。pH自然。
按常規方法滅菌，做成斜面，預培養2天后，接種已活化過的枯草芽孢桿菌CCTCC M204085原種，30℃±1℃恒溫培養3天。鏡檢95％以上的菌體都已形成芽孢時停止培養。
將上述培養好的試管斜面菌種用無菌水洗下，打散，使之成均勻的芽孢懸浮液，經75℃恒溫水浴處理30分鐘。將此芽孢懸液冷至室溫后轉接茄子瓶斜面，每支試管斜面菌種接2-3個茄子瓶斜面。30℃±1℃恒溫培養12小時，再用無菌水洗下，振搖打散成菌懸液。用此菌懸液接種100L液體發酵罐。
b、發酵液體發酵培養基為葡萄糖2％，豆餅粉1.5％，酵母粉0.8％，麥麩1.0％，大米粉2％，玉米粉1.0％，磷酸二氫鉀0.3％，硫酸鎂0.3％，NaCl 0.5％。消前pH 8.0。
100L發酵罐中投料60L。121℃滅菌30分鐘。冷卻至30℃時接種上述菌懸液。液體發酵溫度29℃±1℃，攪拌轉速300rpm，通氣量1∶1.2。發酵32小時左右，至芽孢囊形成率≥95％，而且有30％左右芽孢囊脫落時放罐。測得發酵原液活芽孢數為42×108cfu/ml。
c、制備原粉發酵液放罐后用HCl在酸化罐中調pH至pH4.0，經碟片式離心機離心去水(分離因素≥8000g)，留菌漿。將菌漿中按體積加入2％(w/v)的娟云母粉(細度325目)，打漿。用噴霧干燥塔，將菌漿噴干成原粉。噴干時進口風溫180℃，出口風溫70℃。經檢測，原粉中活芽孢數5×1010cfu/g。
實施例2、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085固體發酵并制備原粉的工藝a、菌種準備同實施例1。
b、固體發酵種子準備固體發酵的種子在液體發酵罐中制備。其種子培養基配方為葡萄糖2％，豆餅粉1.5％，酵母粉1％，輕質碳酸鈣1％，玉米粉1.0％，KH2PO4 0.5％，MgSO40-3％，消前pH 8.0。高壓蒸汽滅菌后接準備好的菌種，接種量為每200升種子液接1個茄瓶菌種。28℃-30℃通氣培養12小時，攪拌轉速250rpm，風量1∶0.6逐步加大到1∶10。本實施中，發酵獲得種子液200升。
c、固體發酵培養基玉米粉8％，豆餅粉10％，麥麩20％，米粉10％，葡萄糖2％，珍珠巖50％。水與料的比為1∶1。高壓蒸汽121℃，滅菌1個小時(葡萄糖單獨加少量水滅菌，115℃，20分鐘)。滅菌在轉鍋中進行，滅完后通過夾層進自來水降溫至28℃。
d、接種與發酵以上固體培養基1噸(加水后)滅菌并降溫后，通過無菌管道將200升種子液和單獨滅菌的葡萄糖水均勻加入轉鍋內的培養基物料中。邊接種邊轉動轉鍋，使種子液與物料混合均勻。將接好種的物料裝入發酵床，物料厚度10cm。間歇地通入無菌空氣進行發酵，控制溫度為28℃～30℃。發酵周期為72小時。72小時時取樣鏡檢，在芽孢囊全部成熟并有30％左右芽孢脫落時中止發酵。本實施例發酵同步率≥96％。
e、發酵半成品干燥用40～45℃無菌熱風大風量吹發酵床上的物料，風向由下而上。經過12小時，發酵半成品風干，含水量4.9％。
f、粉碎過篩制成原粉以錘片式粉碎機預粉碎一遍，細度達到80目。再進噴射式氣流粉碎機粉碎第二遍，細度達到325目。測活芽孢數結果為6×1010cfu/g。經過細度、活芽孢數、水份含量等指標的檢測，均符合企業標準要求。
實施例3、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085果蔬保鮮劑制劑生產方法(活芽孢水懸劑生產)按實施例1方法進行發酵，投料1000L。發酵結束后將發酵液經過HCl酸化至pH4.0，用碟片式離心機離心，得到濃稠的菌漿300升。按菌漿的體積比，加入6％的十二烷基苯磺酸鈉(w/v)，1％的Chitosan(w/v)，2％羧甲基纖維素鈉(w/v)，1％苯甲酸鈉(w/v)，二甲苯5％(v/v)，共重345公斤。充分攪拌后檢測制劑半成品中的活芽孢數，結果為110×108cfu/ml，符合企業標準要求。包裝成1000ml一瓶的試驗樣品。
實施例4、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085果蔬保鮮劑制劑生產方法(可濕性粉劑)稱按實施例1生產的原粉(500×108cfu/g)100公斤，加入十二烷基苯磺酸鈉45kg，木素磺酸鈉22.5kg，硫酸銨45.0kg，白碳黑(膨化)90kg，絹云母粉147.5kg，合計重450kg。在混合機中混合1小時，再過氣流粉碎機，過325目篩。經檢測，產品中活芽孢數為110×108cfu/g，符合企業標準。包裝為200克/袋。
實施例5、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085果蔬保鮮劑制劑生產方法(泡騰片劑)取枯草芽孢桿菌CCTCC M204085芽孢原粉50公斤(500億cfu/g)，加入十二烷基磺酸鈉30公斤，可溶性淀粉17.5公斤，碳酸鈉15.75公斤，碳酸氫鈉13.75公斤充分混勻。再加入檸檬酸12.5公斤，富馬酸2公斤，酒石酸15.75公斤，羧甲基纖維素鈉25公斤，充分混勻。用絹云母粉補足至物料總重量為250公斤，再一次充分混勻。用壓片機將混好的物料壓片，成為每片重約2克的泡騰片劑。本實施例最后獲得片劑249.2公斤，片劑內每克含活芽孢98.7億。
實施例6、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085與百菌清復配劑(可濕性粉)經過室內篩選試驗已證明枯草芽孢桿菌CCTCC M204085母粉(以500億cfu/g計)與百菌清(折百計含量)下列配比具有明顯的增效作用枯草芽孢桿菌CCTCC M204085∶百菌清＝(5～1)∶(1～2)。以枯草芽孢桿菌CCTCCM204085∶百菌清＝2∶1為例。
稱取枯草芽孢桿菌CCTCC M204085母粉100公斤，百菌清(折百)50公斤(或75％可濕性粉劑67公斤)，十二烷基苯磺酸鈉20公斤，余量為高嶺土，補齊至200公斤。經機械充分混合均勻后再用氣流粉碎機粉碎至325目以上，每100克一袋，包裝為成品。本實施例得到成品194公斤，成品中枯草芽孢桿菌CCTCC M204085活芽孢含量為250億cfu/g，百菌清含量25％。使用時加水稀釋500～600倍浸果3分鐘左右晾干即可。
實施例7、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085與異菌脲(撲海因)復配劑(可濕性粉)室內篩選試驗證明枯草芽孢桿菌CCTCC M204085母粉(500億cfu/g)與異菌脲50％可濕性粉，在下列配比條件下有明顯的增效作用枯草芽孢桿菌CCTCC M204085∶異菌脲＝(10～2)∶(1～5)。以枯草芽孢桿菌CCTCCM204085∶異菌脲＝1∶1為例。
稱取500億cfu/g含量的枯草芽孢桿菌CCTCC M204085母粉100公斤，異菌脲50％可濕性粉100公斤，加十二烷基苯磺酸鈉40公斤，娟云母粉補足至300公斤，經過充分混合后用氣流粉碎機粉碎至325目以上。每100克一袋。本實施例獲得成品290公斤，成品中含枯草芽孢桿菌CCTCC M204085活芽孢167億cfu/g，撲海因16.7％。使用時加水稀釋500倍浸果3分鐘左右晾干即可。
實施例8、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085芽孢水懸浮劑用于蘋果貯藏取枯草芽孢桿菌CCTCC M204085水懸劑0.5kg，加水25kg，稀釋成2×108cfu/ml的水懸液，充分攪拌(約15分鐘)之后分批將100kg紅富士蘋果(每批10kg)浸入枯草芽孢桿菌CCTCC M204085水懸液中，浸泡時間5分鐘。撈出晾干，單果套網袋。裝箱貯藏。室溫下貯藏5個月，防腐效果93.1％，蘋果總酸度下降率26.2％，對照化學農藥為多菌靈可濕性粉劑，稀釋1000倍，處理方法與枯草芽孢桿菌CCTCC M204085相同。同等貯藏條件下，防腐效果84.3％，總酸度下降31.4％。枯草芽孢桿菌CCTCC M204085處理優于化學藥劑和清水對照。
實施例9、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085可濕性粉劑用于橙子防腐保鮮取枯草芽孢桿菌CCTCC M204085可濕性粉劑(產品中活芽孢數為110×108cfu/g)0.5Kg，加水25kg，稀釋成2×108cfu/ml的枯草芽孢桿菌CCTCCM204085芽孢懸浮液，將從樹上采下僅三天的新鮮橙子200kg分批浸入枯草芽孢桿菌CCTCC M204085懸液中，泡5分鐘后將橙子取出晾干，用小塑料袋單果包裝，然后每10公斤裝一紙箱。室溫下貯藏。以多菌靈為化學防腐劑對照，以清水為空白對照。兩種處理的用橙子量和包裝貯藏情況與枯草芽孢桿菌CCTCCM204085處理完全相同。貯藏120天后檢查結果。枯草芽孢桿菌CCTCC M204085(可濕性粉劑)處理防腐效果為84.7％，多菌靈效果為86.1％，兩者差異不顯著，證明枯草芽孢桿菌CCTCC M204085有可能代替多菌靈用于橙子防腐保鮮。
實施例10、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085泡騰顆粒劑用于梨子的貯藏保鮮取實施例5制備的枯草芽孢桿菌CCTCC M204085泡騰顆粒0.5kg(產品中活芽孢數為110×108cfu/g)，加水24.5kg稀釋成2.2×108cfu/ml的孢子懸浮液。將稀釋好的孢子懸浮液均勻噴施在待采收的梨子表皮，風干1-2小時后開始采收。采收時輕拿輕放，不傷梨子的表面。采收后及時用薄的軟紙單果包裝，然后分裝紙箱，每箱10公斤梨。噴施清水的處理作為空白對照，噴施0.1％多菌靈(w.p)的為標準化學藥劑對照。室溫條件下貯藏90天防腐效果枯草芽孢桿菌CCTCC M204085為66.1％，多菌靈為60.0％，枯草芽孢桿菌CCTCC M204085處理優于多菌靈處理。
實施例11、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085芽孢水懸浮劑用于花椰菜防霉取枯草芽孢桿菌CCTCC M204085水懸劑500毫升，加水24.5升，混勻后噴灑在即將采收的花椰菜的菜花表面。要求噴布得盡可能均勻。風干后馬上采收菜花。每個菜花單個用軟紙包裝，然后存放在紙箱中，每箱5公斤。設噴清水為空白對照。溫度為7℃的冷庫中保藏，30天后開箱檢查結果。枯草芽孢桿菌CCTCC M204085水懸劑處理防霉的效果達到78.2％(按病指數計算)。
實施例12、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085百菌清復配劑用于桔子貯藏取復配劑250克加水25升，混勻后用噴霧器噴到樹上即將采摘的桔子表面。風干后嚴格按桔子采摘的技術要求進行采摘。采下的桔子單果用軟紙包好后裝箱，每箱5kg，以清水做空白對照。7℃冷庫中保藏2個月后檢查結果。二個月貯藏期中，空白對照爛果率為41.9％，枯草芽孢桿菌CCTCC M204085單劑處理爛果率17.5％，復配劑處理爛果率僅8.3％，復配劑防腐爛效果優于枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌的單劑。
權利要求
1.一種防腐保鮮劑，其中含有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCCM204085。
2.根據權利要求1所述的防腐保鮮劑，其特征在于，它是可濕性粉劑、水懸浮劑、泡騰顆粒或片劑。
3.根據權利要求2所述的防腐保鮮劑，其中可濕性粉劑各組分的重量百分比為菌細胞含量 5×108～1×1010個CFU/g十二烷基苯磺酸鈉0.2％～20％木素磺酸鈉/鈣 0.1％～20％硬脂酸鈉0.1％～3％膨化白碳黑 2％～10％絹云母粉余量pH 4.0～7.0。
4.根據權利要求2所述的防腐保鮮劑，其中水懸浮劑各組分的重量百分比為菌細胞含量 5×108～3×109個CFU/g十二烷基苯磺酸鈉0.2％～20％Chitosan0.1％～10％羧甲基纖維素鈉 0％～10％黃原膠 0％～10％苯甲酸鈉0.5％～2％水 余量pH 2.0～7.0。
5.根據權利要求2所述的防腐保鮮劑，其中泡騰顆粒或片劑各組分的重量百分比為菌細胞含量5×108～3×1010個CFU/g表面活性劑0.5％～20％崩解劑3％～30％粘合劑2％～25％助崩劑2％～15％填充物余量其中崩解劑為酸性化合物或堿性化合物。
6.根據權利要求5所述的防腐保鮮劑，其中表面活性劑選自十二烷基磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈣、木質素磺酸鈉、木質素磺酸鈣、纖維素磺酸鈉、茶枯粉、皂角粉中的一種或多種；崩解劑酸性化合物選自檸檬酸、酒石酸、蘋果酸、己二酸、富馬酸、乳酸、硼酸中的一種或多種；崩解劑堿性化合物選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀中的一種或多種；粘合劑選自聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇中的一種或多種；助崩劑選自可溶性淀粉、糊精、羧甲基纖維素鈉中的一種或多種；填充劑選自硅藻土、輕質碳酸鈣、絹云母粉中的一種或多種。
7.根據權利要求1所述的防腐保鮮劑，其特征在于，它還含有化學殺菌劑。
8.根據權利要求7所述的防腐保鮮劑，其中化學殺菌劑選自百菌清、特克多、米鮮胺、異菌脲、甲基托布津、農利靈、三環唑、多菌靈的一種或多種。
9.一種權利要求1-8之任一所述防腐保鮮劑的用途，其特征在于，將所述防腐保鮮劑用于水果蔬菜的防腐保鮮。
10.一種枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCC M204085。
全文摘要
本發明涉及一種含有枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)CCTCCM204085的防腐保鮮劑及其用途。經鑒定枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCC M204085屬于典型的枯草芽孢桿菌，但與其它枯草芽孢桿菌相比，其發酵液和芽孢用于蔬菜水果的采后貯藏防腐保鮮效果更好。本發明公開了含有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCCM204085的防腐保鮮劑的可濕性粉劑、水懸浮劑、泡騰顆粒、片劑的單劑及枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCC M204085芽孢與化學殺菌劑的復配制劑。
文檔編號A01N65/00GK1853489SQ200510011649
公開日2006年11月1日 申請日期2005年4月28日 優先權日2005年4月28日
發明者林開春, 徐雪蓮, 代鵬, 馮斌, 張用梅 申請人:武漢綠世紀生物工程有限責任公司, 武漢天惠生物工程有限公司