專利名稱：一種雞蛋提取溶菌酶的方法
技術領域：
本發明涉及溶菌酶的提取方法和工藝，尤其是一種高效、簡便地從雞蛋中提取溶菌酶的方法和工藝。
背景技術：
溶菌酶的分子量為14388，由129個安基酶組成堿性球蛋白，是一種穩定的蛋白質，在雞蛋蛋清中含量最豐富。溶菌酶是一種國內外很緊俏的生化物質，廣泛用于醫藥、化工、食品等行業。在醫藥上，溶菌酶可水解細胞壁，所以具有抗炎作用并保護機體不受感染，在化工上可作多種生產原料的中間體應用，在食品上可在用于抗腐保鮮，尤其重要的是近年來溶酶已成為基因工程及細胞工程必不可少的工具酶，隨著生物工程的發展，提取溶菌酶具有重要的戰略意義。
溶菌酶的生產一般以雞蛋清為原料，主要有樹脂吸附、鹽析與結晶及超濾法等提取方法。結晶純化法態費時，且生產率較低。超濾純化濃縮法需要特殊設備，蛋清必需用磷酸鹽緩沖液(I＝0.2)稀釋10倍，蛋清蛋白質難于回收利用。純化液常用冷凍干燥法，冷凍設備昂貴、耗電多。以上種種原因使高活性的溶菌酶生產成本高、而產品在國際上定價低、限制了溶菌酶的規模化生產。
發明內容
本發明的任務是提供一種操作簡便，提取效率高，且產品品質優良的從雞蛋蛋清中提取溶菌酶的方法和工藝，從而可降低溶菌酶的生產成本和生產提取門檻。
發明內容溶菌酶的所述提取方法步驟是A、取新鮮雞蛋，除去雜質，將處理過的蛋清，在攪拌條件下按15％加入724型離子交換樹脂，使樹脂全部懸浮在蛋清中，于5-15℃攪拌吸附6小時，陰涼處靜置過夜，待分層后棄去上清液，下層沉淀用樹脂反復沖洗幾次，除去蛋白，最后濾干樹脂；B、將10％硫酸銨溶液倒入樹脂中，攪拌；C、1600ml水加160克硫酸銨攪拌2小時過濾；D、1200ml水加120克硫酸銨攪拌1小時過濾。
E、將二次過濾的溶菌酶溶液混合，加入總量3％的硫酸銨即84克，攪拌溶化，沉淀過濾。
F、將過濾出的溶菌酶放在陰涼通風的地方晾干，包裝即可。
緩沖液的配比800ml水加磷酸氫二鈉28.64克，磷酸二氫鈉12.48克，攪拌溶化。
最后，將用過的樹脂用清水沖干凈，然后用1200ml水加96克氫氧化鈉溶液倒入樹脂里浸泡三小時，沖洗樹脂至PH6.5克，再用緩沖液浸泡備用。
用本方法提取溶菌酶所需原料及工具有離心機、攪拌器、PH試紙、透折袋、真空旋轉蒸發器、真空泵。試劑有硫酸銨、磷酸鹽緩沖液、鹽酸、氫氧化鈉，724樹脂、鹽酸(36％-38％)、氫氧化鈉、無水乙醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、硫酸銨。
該方法簡便，可是取效率高，對加入此行的企業要求不高，可大大提高提取溶菌酶的產量。
具體實施例方式
本發明的工藝流程是蛋清→攪拌→與樹脂混合→沖洗→加緩沖液→沖洗→硫酸氨→過濾→硫酸氨→沉淀→過濾→成品歸納前述，本發明所說方法和工藝大致可分為五大步1、取蛋清、除雜質；2、洗脫在724樹脂中加入等體積PH值6.5，0.15摩爾/升緩沖液，攪拌20分鐘，棄去緩沖液，按同法再處理一次，最后將除去雜物的樹脂加入1倍量濃度為10％的硫酸銨溶液，攪拌洗脫1小時，濾出并收集洗脫液，按上法再收集一次合并二次洗脫液放入沉淀缸中。
3、沉淀在沉淀缸中按洗脫液體積分別加入32％的固體硫酸銨，充分攪拌使其完全溶解，此時，白色沉腚產生，在冷處置過夜，去上清液，收集沉淀。
4、透析將沉淀用量蒸餾水全部溶解，然后裝入透折袋中，在冷水透析過夜，收集透所液。
5、鹽析、干燥將透析過認收集在溶器中用1∶5的鹽酸(即1份鹽酸加5份水)調PH3.5，加入5％的氫氧化鈉，攪均，冷處放置48小時左右，收集沉淀物干燥即得溶菌酶產品。
實施例蛋清1178克，按比例加處理好的724樹脂、攪拌吸附6小時。離心、收集樹脂，用水和磷酸鹽緩沖液分別洗去雜蛋白，再用等體積10％的硫酸銨浸泡、攪拌洗脫。三次洗脫液的總體積為820ml。每83ml洗脫液加32克細硫酸銨攪拌至完全溶解，靜置分層后，離心，收集鹽析沉淀。沉淀對水透折，透析后調整PH4-5、離心、棄褐色沉淀。其上清液(約40ml)調整PH＝5.5、再加1mol/L磷酸氫二鈉～磷酸二氫鉀緩沖液(PH＝5.5)最終濃度為10mmol/L(約0.4ml)，靜置10分鐘，離心、棄沉淀。其純化液在(40±2)℃下真空旋轉蒸發，變濁時倒出，冷凍后25℃以下真空干燥。獲產品為淡黃色大顆粒結晶0.7248克，其產品活性范圍13539U/mg～15741U/mg。回收的蛋清可直接食用，磷酸鹽、硫酸銨及蛋白質廢水液可回收作肥料。724樹脂經酸、堿處理，可反復利用。這樣除可大大降低成本，實現蛋清的綜合應用之外，主要是使溶菌酶的生產綜合效率較傳統方法可提高近15倍，效益顯著。
權利要求
1.一種雞蛋提取溶菌酶的方法，其特征是，按如下步驟提取A、取新鮮雞蛋，除去雜質，將處理過的蛋清，在攪拌條件下按15％加入724型離子交換樹脂，使樹脂全部懸浮在蛋清中，于5-15℃攪拌吸附6小時，陰涼處靜置過夜，待分層后棄去上清液，下層沉淀用樹脂反復沖洗幾次，除去蛋白，最后濾干樹脂；B、將10％硫酸銨溶液倒入樹脂中，攪拌；C、1600ml水加160克硫酸銨攪拌2小時過濾；D、1200ml水加120克硫酸銨攪拌1小時過濾。E、將二次過濾的溶菌酶溶液混合，加入總量3％的硫酸銨即84克，攪拌溶化，沉淀過濾。F、將過濾出的溶菌酶放在陰涼通風的地方晾干，包裝即可。
2.如權利要求1所說的雞蛋提取溶菌酶的方法，其特征是，緩沖液的配比為800ml水加磷酸氫二鈉28.64克，磷酸二氫鈉12.48克，攪拌溶化。
3.如權利要求1所說的雞蛋提取溶菌酶的方法，其特征是，其工藝流程是蛋清→攪拌→與樹脂混合→沖洗→加緩沖液→沖洗→硫酸氨→過濾→硫酸氨→沉淀→過濾→成品。
全文摘要
一種雞蛋提取溶菌酶的方法，所需原料及工具有離心機、攪拌器、pH試紙、透折袋、真空旋轉蒸發器、真空泵。試劑有硫酸銨、磷酸鹽緩沖液、鹽酸、氫氧化鈉，724樹脂、鹽酸(36％－38％)、氫氧化鈉、無水乙醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、硫酸銨。工藝流程是蛋清→攪拌→與樹脂混合→沖洗→加緩沖液→沖洗→硫酸氨→過濾→硫酸氨→沉淀→過濾→成品。該方法簡便，可是取效率高，對加入此行的企業要求不高，可大大提高提取溶菌酶的產量。
文檔編號C12N9/36GK1727475SQ20041006063
公開日2006年2月1日 申請日期2004年7月26日 優先權日2004年7月26日
發明者涂小燕 申請人:涂小燕