專利名稱：：一種微生物生產葡萄糖胺的方法
技術領域：
：本發明涉及一種以低成本的新穎培養基培養微生物生產葡萄糖胺的方法。
背景技術：
：葡萄糖胺為關節軟骨的組成成份之一，可提供關節組織的營養，增加滑液恢復潤滑功能，促進退化關節再生，進而有效減輕骨頭磨擦產生的痛苦，阻止關節炎癥狀的惡化。人體可自行合成葡萄糖胺，但隨年齡增加，人體內合成葡萄糖胺的速度不及分解葡萄糖胺的速度，于是容易產生體內及關節缺乏葡萄糖胺的現象，并影響關節內細胞的代謝。葡萄糖胺的特點為(1)刺激軟骨母細胞的新生，促進其新陳代謝，供給骨骼營養，使發炎減少，疼痛消失。(2)保護軟骨細胞不受藥物、外力的傷害，防止骨關節的退化。(3)增加滑液量及其黏性，促進關節潤滑作用，改善骨關節機能。(4)改善腰酸背痛效果。且在歐洲，葡萄糖胺業已被廣泛用于治療骨關節炎；人體經食用葡萄糖胺后，可將它快速吸收并運送到體內各組織加以利用經大鼠急性毒性測試以及微生物變異原性試驗證實，葡萄糖胺為一安全無毒的健康食品，及早補充葡萄糖胺更可達到預防關節炎的效果。葡萄糖胺有來自天然海中蝦蟹甲殼幾丁質的提煉出和化學合成的來源，在目前工業上生產葡萄糖胺仍是使用蝦蟹殼于鹽酸溶液中進行水解，生產葡萄糖胺(glucosamine)的方法是以酸或酵素水解幾丁質而來，但不同來源的蝦蟹殼是否會影響葡萄糖胺的純度，以及當被污染的蝦蟹殼其制造出的葡萄糖胺是否不具有毒性，再者，進行蝦殼、蟹殼水解作用之前，需費工沖洗該蝦殼、蟹殼以避免惡臭；而葡萄糖胺也并非水解蝦蟹殼作用中唯一的產物，仍須進行純化以分離葡萄糖胺與其它副產物。葡萄糖胺有來自天然海中蝦蟹甲殼幾丁質的提煉出和化學合成的來源，在目前工業上生產葡萄糖胺仍是使用蝦蟹殼于鹽酸溶液中進行水解，但不同來源的蝦蟹殼是否會影響葡萄糖胺的純度，以及當被污染的蝦蟹殼其制造出的葡萄糖胺是否不具有毒性，況且水解反應前須將蝦蟹殼進行前處理沖洗以免發臭，為了減少前處理繁瑣的步驟以及減少人體服用后的過敏副作用后遺癥考慮，本發明選擇利用微生物生產方式代替傳統的化學法。除了上述水解方法外，目前亦有兩種使用微生物來生產葡萄糖胺的方法，其一為利用真菌的胞內或胞外酵素來分解幾丁質；另一為將微生物的初級代謝培養基轉換為二級代謝培養基，以該培養基生產葡萄糖胺。根據Deng等人于2005年的研究指出，目前也有使用基因轉殖技術制造可生產葡萄糖胺的大腸桿菌(Escherichiacoli)，由于該調節機制太過復雜，使得大腸桿菌培養基中葡萄糖胺的偵測量極低，每公升約為幾毫克；以基因轉殖技術制得的大腸桿菌，可以使胺基醣的產量增加，該基因轉殖策略是啟動與葡萄糖胺運轉及分解代謝(catabolism)有關的基因，以及使葡萄糖胺合成酶(glucosaminesynthase)的基因過度表現(overexpression)；該方法可增加15倍葡萄糖胺的產量，但其濃度(titer)仍維持在毫克的程度；glucosaminesynthase的回饋抑制(Feedbackinhibition)被確認為該途徑關鍵性的因素，酵素的篩選可增加葡萄糖胺的生產，并可使其濃度增加至數克；然而，在寄主細胞內的葡萄糖胺的快速降解、葡萄糖胺的抑制效果以及其降解產物，皆會阻礙葡萄糖胺濃度的增力口[Deng，Ming-de，K.D.Severson，D.A.Grund,S.L.Wassink，R.P.Burlingame，Α.Berry,J.A.Running，C.A.Kunesh，L.Song，Τ.A.JerrellandR.A.Rosson，FromConcepttoProcess:MetabolicEngineeringforProductionofGlucosamineandN-Acetylglucosamine,MetabolicEngineering，7(3)，201-214(2005)]。現有技術及文獻中，針對以微生物二級代謝產物來生產葡萄糖胺的研究并不多也不完整，只有下列少數幾種真菌(fungi)被提到其二級代謝產物中含有葡萄糖胺1.紅曲菌屬(Monasus)蘇遠志等人于1970年發表的文獻中指出，紅曲菌(Monascusanka)白勺二^^^^7Y-aminobutyricacid(GABA)、monacolinK>y-aminobutyricacid以及葡萄糖胺(glucosamine)[蘇遠志，陳文亮，方鴻源，翁浩慶，王文祥，紅曲菌(Monascusanka)的菌學研究，中國農業化學會志，8，45_58(1970)]；然而，絕大多數的注意力都集中在monacolinK以及GABA的含量上，鮮少人注意到紅曲菌屬含有葡萄糖胺的現象；Hsieh等人在2007年的研究指出，在培養基為20g/LRicebran(米糠)、25g/LB-gradewhitecrystalsugar(二級白砂糖)、15g/LAmmoniumchloride(NH4Cl)可使紅曲菌屬菌株Monascuspilosus產生0.72g/L葡萄糖胺，其最佳化條件為pH5，30°C[Hsieh,J.W.,H.S.Wu,Y.H.Wei,andS.S.Wang,Determinationandkineticsofproducingglucosamineusingfungi,Biotechnol.Prog.,23,1009-1016(2007)]。2.曲菌屬(Aspergillus)曲菌屬為一群廣泛存在自然界的絲狀真菌，許多曲菌屬的真菌會產生對人體有害的二級代謝產物，其中最著名的為Aspergillusflavus及Aspergillusparasiticus所產生的黃曲毒素(Aflatoxin)，黃曲毒素被認為是一種具有致癌效果的物質；然而，Hsieh等人在2007年的研究指出，在培養基為可使曲菌屬菌株Aspergillussp.產生3.43g/L葡萄糖胺，其最佳化條件為pH7,30°C[Hsieh,J.W.,H.S.ffu,Y.H.Wei,andS.S.Wang,Determinationandkineticsofproducingglucosamineusingfungi,Biotechnol.Prog.，23，1009—1016(2007)]。由此可知，上述現有生產葡萄糖胺的方法仍有諸多缺失，然而以微生物法進行葡萄糖胺的產量無法大幅提升且培養基成本無法降低，實非一良好的設計，而亟待加以改良。
發明內容本發明的目的即在于提供一種低成本的培養基培養微生物生產葡萄糖胺的方法，是開發一低成本的新穎培養基用以培養微生物，經發酵以生產葡萄糖胺的生產方法，以取代現有培養基，并降低培養基的成本。本發明的次一目的是在于提供一種低成本的培養基培養微生物生產葡萄糖胺的方法，先以搖瓶培養方式，進行生產葡萄糖胺的產量最佳化研究，再推出發酵模式；進而以發酵槽發酵生產葡萄糖胺，以提升微生物生產葡萄糖胺的產量。可達成上述發明目的的一種低成本的培養基培養微生物生產葡萄糖胺的方法，是以臺糖、黃豆、米糠作為培養基以培養微生物生產葡萄糖胺的方法，是于一適當條件下發酵培養一適用的微生物，以使其生產葡萄糖胺。其中該適用的微生物為可產生葡萄糖胺的微生物，包含但不限于紅曲菌(Monascuspilosus)以及曲菌屬菌(Aspergillussp.)。其中紅曲菌(Monascuspilosus)為一常用菌種易于市售取得，也可購于財團法人食品工業發展研究所(臺灣，新竹)，如寄存編號為BCRC31527、或可于美國菌種保存中心ATCC取得，如寄存編號為ATCC22080；其中曲菌屬菌(Aspergillussp.)也為一常用菌種可市售取得，也可購于財團法人食品工業發展研究所(臺灣，新竹)，如寄存編號為=BCRC31742、或菲律賓大學(TheUniversityofthePhilippinesConcertChorus，UPCC)，如寄存編號為UPCC3868。上述菌種的來源及種類并非用以限制本發明的可實施方式。在本發明中選用MonascuspilosusBCRC31527及Aspergillussp.BCRC31742培養在本發明提供的新穎低成本培養基，以生產葡萄糖胺。該微生物MonascuspilosusBCRC31527置于RBA液體培養基中發酵培養；該RBA25g/LRicebran()>25g/LB-gradewhitecrystalsug￡ir(二雙白砂糖)以及15g/LNH4Cl。該微生物MonascuspilosusBCRC31527置于150300rpm的攪拌速度下發酵，較佳為150250rpm，最佳為200rpm；該微生物置于pH4pH6的環境下發酵，較佳為pH4.5pH5.5，最佳為？!15；該微生物置于24°C37°C的環境下發酵，較佳為28°C33°C，最佳為30°C。該微生物Aspergillussp.BCRC31742分別置于WP、WS或WPS液體培養基中發酵-,MrPiMWPy^f^JtlfS^'^'iS^^iSWSuperiorwhitefinegranulatedsugar(^級白砂糖)、適當濃度的P印tone(蛋白胨)、0.5g/LΚΗ2Ρ04、0·5g/LMgSO4·7Η20以及0.lg/LCaCl2·2Η20；較佳WP液體培養基(WPl)包含25g/LSuperiorwhitefinegranulatedsugar(高級白砂糖)、20g/LP印tone(蛋白胨)、0·5g/LKH2PO4、0.5g/LMgSO4·7H20以及0.lg/LCaCl2·2H20；最佳WP液體培養基(WP2)包含33.9g/LSuperiorwhitefinegranulatedsugar(高級白砂糖)、40.6g/LPeptone(蛋白胨)、0.5g/LKH2P04、0.5g/LMgSO4·7H20以及0.lg/LCaCl2·2H20；其中該WS液體培養基包含適當濃度的Superiorwhitefinegranulatedsugar(高級白砂糖)、適當濃度的Soybeanmeal(大豆粕)或Soybean(大豆)、0.5g/LΚΗ2Ρ04、0·5g/LMgSO4·7H20以及0.lg/LCaCl2·2H20；較佳WS液體培養基(WSl)包含25g/LSuperiorwhitefinegranulatedsugar(高級白砂糖)、50g/LSoybeanmeal(大豆粕)、0·5g/LΚΗ2Ρ04、0·5g/LMgSO4·7H20以及0.lg/LCaCl2·2H20；較佳WS液體培養基(WS2)包含25g/LSuperiorwhitefinegranulatedsugar(高級白砂糖)、20g/LSoybean(大豆)、0·5g/LΚΗ2Ρ04、0·5g/LMgS04·7Η20以及0.lg/LCaCl2·2Η20；其中該WPS液體培養基包含適當濃度的Superiorwhitefinegranulatedsugar(高級白砂糖)、適當濃度的P印tone(蛋白胨)、適當濃度的Soybean(大豆)、0.5g/LKH2PO4,0.5g/LMgSO4·7H20以及0.lg/LCaCl2·2H20；較佳WPS液體培養基(WPSl)包含25g/LSuperiorwhitefinegranulatedsugar(高級白砂糖)、lOg/LPeptone(蛋白月東)、23g/LSoybean(大豆)、0·5g/LΚΗ2Ρ04、0·5g/LMgSO4·7H20以及0.lg/LCaCl2·2H20；較佳WPS液體培養基(WPS2)包含25g/LSuperiorwhitefinegranulatedsugar(高級白砂糖)、40g/LP印tone(蛋白胨)、46g/LSoybean(大豆)、0·5g/LΚΗ2Ρ04、0·5g/LMgS04·7H20以及0.lg/LCaCl2·2H20。該微生物Aspergillussp.BCRC31742置于150300rpm的攪拌速度下發酵，較佳為150250rpm，最佳為200rpm；該微生物置于pH6pH8的環境下發酵，較佳為pH6.5pH7.5，最佳為？!17；該微生物置于24°C37°C的環境下發酵，較佳為28°C33°C，最佳為30°C。該微生物經發酵培養后，并進一步將其發酵液抽氣過濾取得該微生物菌體，并將該微生物菌體經過破細胞、鹽酸化反應、中和反應及過濾等步驟，以取得該微生物所生產的葡萄糖胺；該鹽酸化反應為1克濕菌量與6NHCl于10(TC下進行4小時鹽酸化反應，以取得趨于一平穩值的葡萄糖胺濃度；而該中和反應是以NaOH將反應液中和至pH7。本發明所提供的以低成本培養基培養微生物生產葡萄糖胺的方法，與其它現有技術相互比較時，更具有下列的優點1.本發明的方法所生產的葡萄糖胺產量，與前人提出的文獻報告比較，皆高于文獻所報導的產量。2.本發明所提供的生產葡萄糖胺的培養基成本，與前人提出的文獻報告比較，皆較文獻所報導的成本更為低廉。3.本發明所提供的分析方法操作簡單，步驟少，比文獻報告所使用的分析方法簡單。具體實施例方式本發明以下面的實施例予以示范闡明，但本發明不受下述實施例所限制。實施例1試驗培養基1.試驗菌株本發明是利用未經過基因轉殖的微生物改變培養基來進行發酵作用，以生產葡萄糖胺的方法，所用的微生物如下紅曲菌(MonascuspilosusBCRC31527)，以及曲菌屬菌(Aspergillussp.BCRC31742)；上述二菌株皆購自財團法人食品工業發展研究所(臺灣，新竹)。2.培養基依照上述二菌株不同的特性來選擇其適當的培養基，以進行葡萄糖胺的生產；各菌株選用的培養基如表1所示。表1各菌株生產葡萄糖胺所用的培養基菌株培養基名稱培養基成分濃度(g/L)Ricebran厶JMonascusPilosusRBA(pH5)B-gradewhitecrystalsugar“BCRC3152715NH4ClSuperiorwhitefinegranulatedsugar25WP1(PH7)Peptone20_Basicmedia_Superiorwhitefinegranulatedsugar33.9WP2_7)Peptone40.6_Basicmedia_Superiorwhitefinegranulatedsugar25Aspergillussp.WS1(pH7)S0ybeanmeal(大豆粕)50BCRC31742_Basicmedia_Superiorwhitefinegranulatedsugar25WS2(PH7)Soybean20_Basicmedia_Superiorwhitefinegranulatedsugar25WPS1_7)Peptone10Soybean23BasicmediaSuperiorwhitefinegranulatedsugar25Peptone40WPS2(pH7)Soybean46Basicmedia注下述各組成成分皆于市售可得。RBA=Ricebran(米糠，市售)+B-gradewhitecrystalsugar(臺糖二級白砂糖，購于TSCTaiwan)+Ammoniumchloride(氯化胺，NH4Cl,購于R.D.H,Germany)。WPSuperiorwhitefinegranulatedsugar(高級白砂||)+Peptone+Basicmedia。WS:Superiorwhitefinegranulatedsugar+Soybean(大豆，市售)+Basicmedia。WPS:Superiorwhitefinegranulatedsugar+Peptone+Soybean+Basicmedia。Basicmedia(基本培養基)0·5g/LΚΗ2Ρ04+0.5g/LMgSO4·7Η20+0·lg/LCaCl2·2Η20。WSl其中soybeanmeal是將大豆磨成粉末后，取50g/Lsoybeanmeal添加于培養基中。WS2是直接取20g/Lsoybean(未做磨粉等處理)加入培養基中。WPSl及WPS2是將soybean打成粉末泡于蒸餾水中攪拌均勻，以濾布濾去大部份的豆渣，取濾液添加于培養基中，其濃度的介定則是由重量差計算所得。實施例2搖瓶發酵試驗分別將實施例1所述的各菌株先以PDA(200g/LDicedpotatoes(切塊土豆)，20g/LGlucose(葡萄糖)，15g/LAgar(瓊脂))固態培養基于30°C下，三區劃線培養活化5天，再將單一菌落置入內含200ml己滅菌PDB(PotatoDextroseBroth:20g/LDicedpotatoes,4g/LGlucose)液態培養基的250ml搖瓶，進行二次活化，以恒溫培養箱在30°C、200rpm下培養7天。取各活化后的菌株接種至其適當的培養基(如表1)內，分別控制其培養基酸堿值微生物MonascuspilosusBCRC31527的培養基酸堿值為pH5、微生物Aspergillussp.BCRC31742的培養基酸堿值為pH7，于溫度30°C下，轉速200rpm，培養7天，取樣分析干菌重及葡萄糖胺產量取MonascuspilosusBCRC31527的發酵液倒入250ml離心瓶中，于4°C下，以轉速12，OOOrpm離心30min，將液體倒掉，將菌塊以100°C烘干，稱得干菌重(Celldryweight)，再將其粉碎后，加入10ml6NHCl于100°C下反應24小時，得含葡萄糖胺的液體。取Aspergillussp.BCRC31742的發酵液，經抽氣過濾后得菌塊，將菌塊取樣以100°C烘干，稱得濕/干菌重比(ratioofwetcellweighttodrycellweight)，另將濕菌經細胞破碎機破碎后，加入IOml6NHCl于100°C下反應4小時，得含葡萄糖胺的液體。待收集得的液體冷卻后加入IOml超純水，以NaOH將反應液中和至pH7，再以抽氣過濾收集液體，取0.Iml至試管中，加入0.Iml3，5-二硝基氰苯(3，5_dinitrobenzonitrileacetonitrile)溶液作為內部標準品，再加入0.Iml的40mol/m3l-萘基異硫氰酸酯嘧啶(1-naphthylisothiocyanatepyridine)溶液，于50°C的恒溫水浴反應1小時，反應后取10μL進行葡萄糖胺鑒定分析。以高效液相層析技術(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)進行葡萄糖胺鑒定分析，HPLC分析條件如下HPLCpumpShimadzuLC-10AS偵測器=ShimadzuModelSPD-IOAvpUV-VISindexdetector管柱LichroCARTRP-18(5μm)，250χ4mmI.D.移動相Water/AcetonitriIe(87/13)流速1.3ml/minUV偵測波長23Onm再依葡萄糖胺鹽酸鹽衍生物對內部標準品波峰面積比，代入以葡萄糖胺鹽酸鹽衍生物對內部標準品波峰面積比的葡萄糖胺鹽酸鹽檢量線，以內插法求得葡萄糖胺的克數，換算出葡萄糖胺濃度(GlucosamineConcentration)、葡萄糖胺成分含量(GlucosamineContent)，以及對于發酵培養的碳源換算求得其產率(Yield)，并與工作天數換算求得生產率(Productivity)，結果如表2所示。如表2所示，本實施例所使用的二種菌株中，以Aspergillussp.BCRC31742在WP2培養基環境下培養，可產生的葡萄糖胺濃度最高(5.48g/L)。在WS2培養基環境下培養，可使生產葡萄糖胺培養基成本最低(0.04USD/g-葡萄糖胺)。且，本實施例以新穎培養基環境下培養Aspergillussp.BCRC31742或MonascuspilosusBCRC31527，分別相較于參考文獻1，本發明所提供的新穎培養基可促使Aspergillussp.BCRC31742或MonascusPilosusBCRC31527產生更多的葡萄糖胺，且所用的培養基成本更為低廉。表2文獻(粗體字)與各菌株經搖瓶培養所產出的葡萄糖胺濃度、葡萄糖胺含量、產率和生產率<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>&:RBA:Ricebran,0.4USD/Kg；B-gradewhitecrystalsugar,0.97USD/Kg；Ammoniumchloride,55USD/Kg.RSA=Ricebran,0.4USD/Kg；Sucrose()，88.8USD/Kg；Ammoniumchloride,55USD/Kg.WPl，WP2,WSl，WS2,WPSl，WPS2Superiorwhitefinegranulatedsugar,0.9/USD/Kg；Peptone,78USD/Kg；Soybean,1.3USD/Kg；MgSO4·7H20,52USD/Kg；KH2PO4,39USD/Kg；CaCl2·7Η20，45·5USD/Kg.GP:Glucose,45.8USD/Kg；Peptone，78USD/Kg；MgSO4·7H20,52USD/Kg；KH2PO4,39USD/Kg；CaCl2·7Η20，45·5USD/Kg.Mo-31527=MonascuspilosusBCRC31527；Mo=MonascuspilosusBCRC31527(參考文獻1)；As-31742Aspergillussp.BCRC31742；AsAspergillusspBCRC31742(參考文獻1)。參考文獻1=Hsieh,J.W.，H.S.Wu,Y.H.Wei,andS.S.Wang,Determinationandkineticsofproducingglucosamineusingfungi,Biotechnol.Prog.,23,1009-1016(2007)實施例3發酵槽發酵試驗首先分別將實施例1所述的Aspergillussp.BCRC31742進行二次活化培養，方式同實施例2所述。以一批次攪拌式發酵槽進行發酵試驗，將活化后的Aspergillussp.BCRC31742接種100ml菌液至WPl培養基的發酵槽中，工作體積為2L，其酸堿值為pH7，于溫度30°C下，轉速200rpm進行發酵培養，以外加管線通入純氧，溶氧量控制在10%，控制在搖瓶實驗所得的最適化條件。發酵槽收槽后，經抽氣過濾后得菌塊，將菌塊取樣以100°C烘干，稱得濕/干菌重比(ratioofwetcellweighttodrycellweight)，另將濕菌經細胞破碎機破碎后，加入10ml6NHCl于100°C下反應4小時，得含葡萄糖胺的液體。待至冷卻后加入IOml超純水，以NaOH將反應液中和至pH7，再以抽氣過濾收集液體，取0.Iml至試管中，加入0.Iml3,5-dinitrobenzonitrileacetonitrile溶液為內部標準品，再加入0.Iml的40mol/m31-naphthylisothiocyanatepyridine溶液，于50°C的恒溫水浴反應1小時，反應后取10μL進行葡萄糖胺鑒定分析；同樣以HPLC進行葡萄糖胺鑒定分析，HPLC分析條件如實施例2所述。再依葡萄糖胺鹽酸鹽衍生物對內部標準品波峰面積比，代入以葡萄糖胺鹽酸鹽衍生物對內部標準品波峰面積比的葡萄糖胺鹽酸鹽檢量線，以內插法求得葡萄糖胺的克數，換算出葡萄糖胺濃度、葡萄糖胺成分含量，以及對于發酵培養的碳源換算求得其產率，并與工作天數換算求得生產力，結果如表3所示。表3文獻(粗體字)與實施例3ASpergilluSsp.BCRC31742經發酵槽培養所產出的葡萄糖胺濃度、葡萄糖胺含量、產率和生產力的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注參考文獻1:Hsieh,J.W.，H.S.Wu,Y.H.Wei,andS.S.Wang,Determinationandkineticsofproducingglucosamineusingfungi,Biotechnol.Prog.,23,1009-1016(2007)如表3所示，將文獻1上提及使用Aspergillussp.BCRC31742發酵以產生葡萄糖胺的條件，與本實施例所使用的條件比較；Hsieh等人于2007年以GP培養基培養曲菌屬菌Aspergillussp.以生產葡萄糖胺(葡萄糖胺濃度為2.31g/L)的結果，與本實施例所使用的培養基比較，在使用相同微生物發酵的條件下，本實施例所用的WP培養基于10%溶氧量所得的葡萄糖胺濃度(3.91g/L)，比文獻報導者高。上列詳細說明是針對本發明之一可行實施例的具體說明，該實施例并非用以限制本發明的專利范圍，凡未脫離本發明的等效實施或變更，例如微生物培養基的變化的等效性實施例，均應包含于本案的專利范圍中。權利要求一種微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于所述方法是在低成本培養基條件下發酵培養選自紅曲菌(Monascuspilosus)或曲菌屬菌(Aspergillussp.)的微生物，以使其生產葡萄糖胺。2.如權利要求1所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該微生物紅曲菌(Monascuspilosus)置于RBA液體培養基中發酵培養。3.如權利要求2所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該RBA液體培養基包含25g/L米糠、25g/L二級白砂糖以及15g/LNH4C1。4.如權利要求2所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該微生物置于PH4pH6的環境下發酵。5.如權利要求1所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該微生物曲菌屬菌(Aspergillussp.)置于WP液體培養基中發酵培養。6.如權利要求1所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該微生物曲菌屬菌(Aspergillussp.)置于WS液體培養基中發酵培養。7.如權利要求1所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該微生物曲菌屬菌(Aspergillussp.)置于WPS液體培養基中發酵培養。8.如權利要求5所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該WP液體培養基包含25g/L高級白砂糖、20g/L蛋白胨、0.5g/LΚΗ2Ρ04、0·5g/LMgS04·7H20以及0.lg/LCaCl2·2H20。9.如權利要求5所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該WP液體培養基包含33.9g/L高級白砂糖、40.6g/L蛋白胨、0.5g/LKH2PO4、0.5g/LMgS04·7H20以及0.lg/LCaCl2·2H20。10.如權利要求6所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該WS液體培養基包含25g/L高級白砂糖、50g/L大豆粕、0.5g/LΚΗ2Ρ04、0·5g/LMgS04·7H20以及0.lg/LCaCl2·2H20。11.如權利要求6所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該WS液體培養基包含25g/L高級白砂糖、20g/L大豆、0.5g/LΚΗ2Ρ04、0·5g/LMgS04·7H20以及0.lg/LCaCl2·2Η20。12.如權利要求7所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該WPS液體培養基包含25g/L高級白砂糖、10g/L蛋白胨、23g/L大豆、0.5g/LKH2P04、0.5g/LMgS04·7H20以及0.lg/LCaCl2·2H20。13.如權利要求7所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該WPS液體培養基包含25g/L高級白砂糖、40g/L蛋白胨、46g/L大豆、0.5g/LKH2P04、0.5g/LMgS04·7H20以及0.lg/LCaCl2·2H20。14.如權利要求5所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該微生物置于pH6pH8的環境下發酵。15.如權利要求6所述的以微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該微生物置于pH6pH8的環境下發酵。16.如權利要求7所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該微生物置于pH6pH8的環境下發酵。17.如權利要求1所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該微生物發酵培養后，將其發酵液抽氣過濾取得該微生物菌體，并將該微生物菌體經過細胞破碎機破碎、鹽酸化反應、中和反應及過濾等步驟，以取得該微生物所生產的葡萄糖胺。18.如權利要求17所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該鹽酸化反應為1克濕菌量與6NHCl于100°C下進行4小時鹽酸化反應，以取得趨于一平穩值的葡萄糖胺濃度。19.如權利要求17所述的微生物生產葡萄糖胺的方法，其特征在于該中和反應是以NaOH將反應液中和至pH7。全文摘要本發明公開了一種微生物生產葡萄糖胺的方法，是以低成本且新穎的培養基發酵培養選自Monascuspilosus及Aspergillussp.所構成的群組之中的微生物，以使其生產葡萄糖胺；其中該培養基包含臺糖的食用糖、黃豆及米糠等；其發酵的適當環境為150～300rpm、pH4～pH8、24℃～37℃；經發酵培養后，并將其發酵液抽氣過濾取得該微生物菌體，并將該微生物菌體經過破細胞、鹽酸化反應、中和反應及過濾等步驟，以取得該微生物所生產的葡萄糖胺。本發明生產葡萄糖胺的方法操作簡單、步驟少，成本低廉，產量高。文檔編號C12R1/66GK101812490SQ200910117918公開日2010年8月25日申請日期2009年2月20日優先權日2009年2月20日發明者吳和生,張玉芬,魏玉嬌申請人:元智大學