專利名稱：楊樹胚性細胞發生技術體系的建立方法
技術領域：
本發明楊樹胚性細胞發生技術體系的建立方法涉及一種通過選擇適當的外植體并利用合理的激素配比和培育方法，獲得大量楊樹胚性細胞的方法。
背景技術：
胚性細胞(embryogenic cell)是一類與分生細胞相似，通常較小、近圓形，具較大的核和核仁并能夠高度染色、胞質濃厚，可直接發育成為體細胞胚的獨特細胞。
胚性細胞發生是細胞工程中植株細胞全能性表達形成的重要途徑之一，對于進行體細胞融合、突變體篩選、種質資源保存、人工種子研制、基因轉化技術及優良雜交組合擴繁等都具有重要的意義。隨著細胞生物學和分子生物學等理論與技術的發展，胚性細胞發生技術將在植物抗病、抗蟲、抗逆、改良性狀以及基因工程育種等方面發揮更大的作用。
楊樹(poplar)是世界上分布最廣、適應性最強的樹種，具有速生、優質、適應性強等特點，主要分布于北緯22°～70°的北半球溫帶和寒溫帶。我國有豐富的楊樹資源，天然林面積約300萬公頃，并且越來越受到人們的重視。但林木的生活周期長，限制了傳統的常規育種的進展。通過研究楊樹胚性細胞發生技術，以期為楊樹育種等工作提供幫助。
發明內容
本發明楊樹胚性細胞發生技術體系的建立方法的目的在于為楊樹育種提供一種新的方法。
為達上述目的，本發明提供一種楊樹胚性細胞發生技術體系的建立方法，即通過組培技術達到楊樹胚性細胞發生最多時期，包括下述步驟第一步，以苗齡30～50天、苗高4～5cm的楊樹組培苗莖段切成1～2mm作為外植體；第二步，接于XF培養基上脫分化100～140小時；第三步，第二步所得的愈傷組織轉接至Y-2培養基上，進行再分化72～96小時。
所述的XF培養基為MS+2，4D 0-0.5mg/L+NAA 0-0.2mg/L+ZT 0-0.1mg/L+蔗糖25-35g/L+瓊脂4-8g/L。
所述的Y-2培養基為MS+6-BA 0-0.4mg/L+KT 0.05-0.4mg/L+IAA 0.05-0.2mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂4-8g/L。
本發明的優點是通過培養基培養，克服了林木生活周期長，個體大的劣勢，獲得大量的，具有細胞全能性的楊樹胚性細胞，為楊樹育種提供幫助。
具體實施例方式
實施例1一種楊樹胚性細胞發生技術體系的建立方法，即通過組培技術達到楊樹胚性細胞發生最多時期，包括下述步驟
第一步選擇組培日齡40天，苗高4～5cm的瓶苗歐美楊(黑楊派)組培苗，將莖段切成1mm作為外植體；第二步接于XF培養基，即MS+2，4D 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂4gg/L上脫分化120小時；第三步第二步所得的愈傷組織轉接至Y-2培養基，即MS+6-BA0.2mg/L+KT 0.2mg/L+IAA 0.05+蔗糖30g/L+瓊脂4g/L上，進行再分化72小時，此時即為胚性細胞發生最多的時期。
實施例2一種楊樹胚性細胞發生技術體系的建立方法，即通過組培技術達到楊樹胚性細胞發生最多時期，包括下述步驟第一步選擇苗齡30天，苗高4～5cm的毛白楊組培苗，將莖段切成1.5mm作為外植體；第二步接于XF培養基，即MS+NAA 0.1mg/L+ZT 0.05mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂4g/L上脫分化140小時；第三步第二步所得的愈傷組織轉接至Y-2培養基，即MS+KT 0.2mg/L+ZT 0.1mg/L+IAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂4g/L上，進行再分化96小時，此時即為胚性細胞發生最多的時期。
權利要求
1.一種楊樹胚性細胞發生技術體系的建立方法，即通過組培技術達到楊樹胚性細胞發生最多時期，包括下述步驟第一步以苗齡30～50天、苗高4～5cm的楊樹組培苗莖段切成1～2mm作為外植體；第二步接于XF培養基上脫分化100～140小時；第三步第二步所得的愈傷組織轉接至Y-2培養基上，進行再分化72～96小時。
2.根據權利要求1所述的楊樹胚性細胞發生技術體系的建立方法，其特征在于所述的XF培養基為MS+2，4D 0-0.5mg/L+NAA 0-0.2mg/L+ZT 0-0.1mg/L+蔗糖25-35g/L+瓊脂4-8g/L。
3.根據權利要求1所述的楊樹胚性細胞發生技術體系的建立方法，其特征在于所述的Y-2培養基為MS+6-BA 0-0.4mg/L+KT 0.05-0.4mg/L+IAA 0.05-0.2mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂4-8g/L。
全文摘要
一種楊樹胚性細胞發生技術體系的建立方法，即通過組培技術達到楊樹胚性細胞發生最多時期，包括下述步驟第一步以苗齡30～50天、苗高4～5cm的楊樹組培苗切成1～2mm的莖段作為外植體；第二步接于XF培養基上脫分化100～140小時；第三步第二步所得的愈傷組織轉接至Y－2培養基上，進行再分化72～96小時。本發明的優點是通過培養基培養，克服了林木生活周期長，個體大的劣勢，獲得大量的，具有細胞全能性的楊樹胚性細胞，為楊樹育種提供幫助。
文檔編號C12N5/04GK1962853SQ20061011868
公開日2007年5月16日 申請日期2006年11月23日 優先權日2006年11月23日
發明者蘇敏, 宋學孟, 董舉文, 張艷, 龐瑞華, 許雄山, 章振華, 王凌健, 張承妹 申請人:上海光兆植物速生技術有限公司