專利名稱：一種真菌菌株及其用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種野生稻內生的真菌菌株及其在促進植物生長和增加生物量上的用途， 屬于微生物及微生物應用領域。
背景技術：
植物與周圍環境生物的互作是一種普遍現象，其中植物一微生物的相互作用是重要形 式之一。有兩類有益的植物一微生物共生 一類是有營養功能的，如固氮細菌或菌根真菌
(mycorrhizal fungi); —類是有防御功能的，如抑制病原菌的內生菌和附生菌。這兩類 有益的共生微生物都能提高植物的適應能力。農用化學物質(化肥和農藥)和"精耕細作" 的栽培方式在農業生產中發揮著重要作用。在這種栽培方式下，栽培作物中植物一微生物 這一平衡體系被打破，有益的植物一微生物共生缺乏，使得作物生產高度依賴于化肥和農 藥。而化肥農藥的頻繁使用造成了全球環境的污染，并且污染物最終通過食物鏈進入人體。 因此外源應用有益微生物，從而重建生態友好的、有益的植物一微生物共生體受到人們的 極大關注，并顯示了應用這種微生物制劑進行生物防治的潛力。
內生真菌(endophytic fungi)是一類在植物體內普遍存在的真菌。它的整個生活周 期或大部分階段都在植物體內生活，通常與宿主植物形成互惠共生關系， 一方面內生真菌 從宿主植物中獲取自身生長所需的養分，另一方面內生真菌可以促進植物生長、增強宿主 植物的抗生物和非生物脅迫的能力。
內生真菌具有提高宿主抗逆性的功能(Arnold et a丄，2003; Redman e￡ a人，2002)。 有研究表明內生真菌除了直接分泌抗生物質如生物堿等，也能誘導植物體產生相似的抗性 反應，如激活植物組織內的谷胱甘肽一抗壞血酸代謝途徑(glutathione-ascorbate pathway)、增強細胞抗氧化能力，從而提高了植物抗真菌病害和耐鹽的能力(Waller " a丄， 2005)。
有些內生真菌還具有促進植物養分吸收、促進植物生長的功能，如內生真菌通過活化 硝酸還原酶(Sherameti W a丄，2005)和磷酸酶(Malla a丄，2004)等形式促進植 物養分吸收，從而更利于植物生長；有些內生真菌能分泌生長素促進植物生長(Sirrenbergeta丄，2007);還有些內生真菌能通過抑制植物體內的乙烯信號途徑來提高植物生長活 力(Barazani et s丄，2007)。
根系和葉片組織是植物體受外界生物和非生物因子脅迫最大的部位，因此根系和葉片 內生真菌對于保護植物組織免受傷害起著尤為重要的作用。植物體的根圍區域是一個能量 和物質交換異常活躍的區域，植物和土壤微生物相互影響，而且植物根系被認為是一個動 態的"碳庫"(carbon sink),營養物質充足，是眾多生物相互競爭的部位，因此在這種 復雜的環境中植物的生存策略之一就是容納了與之互惠共生的內生真菌。根系是內生真菌 極其豐富的部位(Vandenkoornhuyse eta義，2002)，根系內生真菌的侵染較地上部分要 廣泛或多系統定殖。DSE (dark s印tate endophytes)是根系非菌根共生真菌的典型代表 (Mandyam & Jumpponen, 2005)。 DSE定殖在植物根系，有類似于菌根真菌的作用，如在 /feteroco/7J'鵬c/ a"05/ 丄ra和宿主植物大白菜的共生體系中，# c力a"o印ira從大白菜 中獲取植物合成的碳水化合物蔗糖供自已生長需要，另一方面"c力se&砂ira給宿主大 白菜提供氮源(Usuki & Narisawa， 2007)。
廣泛利用共生遺傳資源重建有益的栽培作物-內生真菌共生體系是提高栽培作物抗逆 性的有效途徑之一。典型例子是內生真菌戶J'ri/br/no印ora j'/7c/ica的應用尸.i/ 力'ca是 一種定殖在植物根系的類似于菌根真菌的內生真菌，它是從印度塔爾沙漠中的一種木本灌 木植物分離的，并可與很多植物形成共生體，接種尸.^7必ca和其培養濾液能促進植物生 長和增加生物量(Varma " a丄，1999; Verma et a丄，1998)，而且提高了大麥對真菌 病害和鹽脅迫的能力(Waller " a丄，2005)。
水稻是我國最重要的糧食作物，實現水稻的穩定高產是我國可持續發展的基礎。內生 真菌具有促進植物營養生長、增加生物量(產量)、并提高在逆境中的生存能力；同時內 生真菌普遍穩定存在于植物的整個組織器官中，而且受到植物體本身機械組織的保護，因 此對于土傳、氣傳病原菌的抗性和持久能力具有優越性；并且由于野生稻與水稻的親緣關 系較近，它們的互補性較好，因此研究發掘野生稻豐富的內生真菌資源，并利用野生稻內 生真菌，能促進栽培水稻的生長、增加生物量(產量)、并提高在逆境中的生存能力。目 前對水稻內生菌的研究多為內生固氮細菌的研究和利用，如對野生稻內生固氮細菌草螺菌 船rte邵j'rj7A/歷sp. B501的研究(Elbeltagy et a義，2001)，栽培水稻內生細菌固氮 成團泛菌尸a/ to朋a^7溯er朋sYS19的研究(Duan " a丄，2007; Fengeta7. ， 2006)。 而缺乏對野生稻內生真菌在提高栽培水稻生長、增加生物量(產量)、提高其在逆境中的
4生存能力方面的研究與利用。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種源于野生稻的真菌菌株，該真菌菌株能促進栽 培水稻生長，從而增加水稻的產量。
為了解決上述技術問題，本發明一種真菌菌株該菌株為稻瓶霉(戶/n'a/op/wrao7加e) 真菌菌株R5-6-l，保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址是 北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研究所，保藏日2008年10月27日，保藏號CGMCC 2737。
作為本發明的真菌菌株的改進該菌株R5-6-l屬于真菌界Fungi，子囊菌門 Ascomycota，糞殼綱Sordariomycetes， 巨座殼禾斗Magnaporthaceae，有絲分裂真菌巨座殼禾斗 mitosporic Magnaporthaceae,瓶霉屬P/ /a/o/ /zora。該菌株R5-6-l在MEA、 PDA培養基上25。C 暗培養7天的菌落直徑分別為4.5cm、 4.6 cm; MEA培養基上的氣生菌絲比PDA培養基上的 稠密，波浪狀氣生菌絲集合形成繩索狀結構；隨著培養時間延長，菌落顏色逐漸變成灰色 至黑色，菌落表面成殼狀，產生大量分生孢子。該菌株R5-6-l在PDA培養基上，菌絲有隔， 寬1.3-2.0pm，無色至褐色；分生孢子梗不分枝至l-2次分枝，多數單生，有時2-3個帚狀生； 瓶梗著生在分生孢子梗頂端，燒瓶形，長5.6-13.8)im，最寬處寬2.5-3.1 iam，基部寬1.5-2.0 pm，頸部寬0.5-1.2 pm，淡褐色至褐色；分生孢子堆積在瓶梗頂端成粘液狀，無色，單細 胞，鐮刀形，強烈彎曲，長7.5-9.0 urn,最寬處寬0.8-1.2pm;具有厚垣孢子。
作為本發明的真菌菌株的進一步改進該菌株R5-6-l的內轉錄間隔區核糖體DNA的全 序列如SEQIDNO: l所示。
本發明還同時提供了上述真菌菌株的用途用于促進植物生長或增加生物量。 作為本發明的真菌菌株用途的改進該植物為水稻。
本發明的稻瓶霉(iVif(i/oj^ora oo;z從)真菌菌株(R5-6-l)系從我國云南版納自然保 護區采集的野生稻根中分離得到。
本發明的稻瓶霉CGMCC 2737，具有促進水稻等植物生長和增加生物量的作用，具有 開發出新型、高效、無毒的天然微生物制劑的巨大潛力。
下面結合附圖對本發明的具體實施方式
作進一步詳細說明。
圖l為本發明的稻瓶霉化iaJ叩力ors orj^se菌株R5-6-l系統發育示意圖；圖l中A為菌株R5-6-1在PM培養基上25 。C暗培養7天的菌落形態，B為菌株R5-6-1在 MEA培養基上25 。C暗培養7天的菌落形態，C為菌株R5-6-1在PDA培養基上25 。C暗培養25天 的菌落形態，D為菌株R5-6-l的瓶梗，E為菌株R5-6-l的分生孢子，F-G為菌株R5-6-l的分 生孢子梗及其上積聚的分生孢子；
圖2為本發明的稻瓶霉尸力i^，力ora or/幼e菌株R5-6-l的掃描電鏡圖； 圖2中A、 B、 C為菌株R5-6-1的瓶梗及其聚集著生的鐮狀分生孢子，D為串珠狀著生 的厚垣孢子。
圖3為本發明的稻瓶霉州ia7，力,s oir幼e菌株R5-6-1的系統發育圖4為本發明的稻瓶霉Zfe'sJop/^ra ozy幼e菌株R5-6-1的盆栽試驗水稻幼苗對比
圖4中左側5株水稻幼苗代表實驗組，右側5株水稻幼苗代表對照組； 圖5為本發明的稻瓶霉P/ 2's&p力ora oxy幼e菌株R5-6-1的盆栽試驗水稻幼苗干重 統計圖6為本發明的稻瓶霉尸MaJop力ora ozy幼e菌株R5_6-1的菌絲定殖在水稻根部組織 中的示意圖。
具體實施例方式
參照上述附圖，對本發明的具體實施方式
進行詳細說明。 實施例l、菌株R5-6-l的分離培養
2%麥芽汁瓊脂培養基(malt extract agar, MEA):麥芽浸出粉20g，瓊脂20g,蒸餾水 1000 mL。
馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(potato dextrose agar, PDA):馬鈴薯200g，葡萄糖20g,瓊 脂20g,蒸餾水1000 mL。
在實驗室中按下列條件分離培養，即可獲得本發明所述的稻瓶霉。從我國云南版納自 然保護區采集野生稻(OF"gmmJ"to)，將采集的野生稻用自來水漂洗干凈，野生稻根莖 在75% (v/v)酒精溶液中消毒30秒，然后在1% (v/v)次氯酸鈉溶液中消毒10分種，無 菌水漂洗3次。用無菌刀片將根切成約0.6cm長的片段，置于分別含50ng'm^氨節青霉 素和鏈霉素的2%麥芽汁瓊脂(MEA)平皿上，25r暗培養，待菌絲長出后，將菌絲頂端 移接到PDA培養基獲得純培養。
實施例2、菌株R5-6-l的鑒定
6馬鈴薯葡萄糖培養液(potato dextrose broth, PDB):馬鈴薯200g,葡萄糖20g,蒸餾水1000 mL。
下面列舉了瓶霉屬(i^i"/o;^om)真菌形態鑒定和利用rDNA序列進行系統發育關系分析的相關參考文獻，有關分子操作還可見于《精編分子生物學實驗指南》(科學出版社，1998)等分子生物學技術指導書。
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參照上述文獻的方法對內生真菌菌株R5-6-l進行形態鑒定，觀察在PDA、 MEA培養 基上的菌落形態、顏色和生長速率，并采用光學顯微鏡和真空冷凍掃描電子顯微鏡觀察菌 株的分生孢子梗、產孢瓶梗和分生孢子的顯微形態特征。
形態鑒定結果(圖l、圖2)表明菌株R5-6-l在MEA、 PDA培養基上25°C暗培養7 天的菌落直徑分別為4.5cm、 4.6 cm。 MEA培養基上的氣生菌絲比PDA培養基上的稠密， 波浪狀氣生菌絲集合形成繩索狀結構；隨著培養時間延長，菌落顏色逐漸變成灰色至黑色， 菌落表面成殼狀，產生大量分生孢子。菌株R5-6-l在PDA上，菌絲有隔，寬1.3-2.0 (im， 無色至褐色。分生孢子梗不分枝至1-2次分枝，多數單生，有時2-3個帚狀生。瓶梗著生 在分生孢子梗頂端，燒瓶形，長5.6-13.8 pm，最寬處寬2.5-3.1 pm，基部寬1.5-2.0 nm， 頸部寬0.5-1.2 pm，淡褐色至褐色。分生孢子堆積在瓶梗頂端成粘液狀，無色，單細胞， 鐮刀形，強烈彎曲，長7.5-9.0 nm，最寬處寬0.8-1.2 nm。具有厚垣孢子。
參照文獻的方法對內生真菌菌株R5-6-l進行ITS rDNA基因測序，利用BLAST程序 進行比對，利用PAUP程序進行系統發育分析。
將內生真菌菌株接種于PDA培養基上，24-26t:暗培養3-5天，再移接至PDB液體培 養基中，24-26°C、 150rpm培養4天。用濾紙濾取菌絲，吸水紙吸干水份后在液氮中研成粉末，按每管約lOOmg的量分裝于 1.5mL離心管中。采用DNeasy Plant Mini Kits (QIAGEN)，按廠商的程序提取基因組DNA。 在100 mg菌體粉末中加入400 (al裂解緩沖液API和4 (il 100 mg/ml RNase A貯存液，劇烈 振蕩混勻60秒，65C保溫IO分鐘裂解細胞，隔3分鐘振蕩混勻1次；裂解液中加130^il 緩沖液AP2，混勻，冰浴5分鐘后14,000rpm離心5分鐘；取上清液至QIAshredder離心 柱，14000 rpm離心2分鐘；將濾過液移至1.5ml eppendorf管，加1.5倍沉淀緩沖液AP3/E， 用槍頭吸打混勻；取650 pi反應液至DNeasy微型柱，11000 rpm離心1分鐘，棄去收集管 中的濾液；將余下的反應液移至DNeasy微型柱,11000rpm離心1分鐘，棄去收集管和濾液； 將DNeasy微型柱置于另一收集管，加500 pl緩沖液AW至DNeasy微型柱,11000 rpm離心 l分鐘，棄去收集管中的濾液；將DNeasy微型柱重新置于收集管中，力[]500 ^緩沖液AW 至DNeasy微型柱,14000 rpm離心2分鐘，棄去收集管和濾液；將DNeasy微型柱置于另一 1.5 ml eppendorf管上，加100 pi預熱(65°C)的緩沖液AE至DNeasy膜上,室溫靜止5分 鐘，11000 rpm離心l分鐘，收集濾液即為基因組DNA。 -20°。保存備用。取5 ^樣品在 1.4% Agarose膠上電泳，檢測DNA的分子大小，同時取1 (il稀釋50倍，測定OD260/OD280, 檢測DNA含量及質量。
ITS rDNA基因序列的擴增采用通用引物ITS 1 (5'-TCC GTA GGT GAA CCT GCGG-3') 和ITS4 (5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3')， PCR體系DNA模板(100ng/pl) l.(Hil， 10xPCR緩沖液(含25腿ol/L MgC12)5.0pl， dNTP(5mmo1 / L)1.0^d,引物(50ng/ml)各0.5 pl， Taq DNA聚合酶(2U/nI )ljal，加水補足50pl，混勻后在MJ Research公司的Minicycler PTC-150型PCR儀上進行PCR反應，PCR反應條件94 °C 3min; 94°C 40s， 55°C 50s， 72。C60s， 30個循環；72°C 10min。 PCR擴增產物經1.0%瓊脂糖凝膠電泳，PCR擴增產物 用QIAGEN公司的QIAquick PCR純化試劑盒純化在PCR反應產物中加5倍體積的PB 緩沖液，渦旋混勻；將上述混合液轉至QIAquick微型柱中，離心柱置于2mL收集管上， 13000rpm離心30-60s;棄去收集管中的濾液，將微型柱重新放回收集管中；加0.75mLPE 緩沖液至微型柱中，13000rpm離心30-60s;棄去收集管中的濾液，將微型柱重新放回收集 管中，14000 rpm離心lmin;將微型柱置于1.5mL離心管上，加30pL EB緩沖液或水，靜 止lmin后13000 rpm離心lmin，收集濾液即為純化的PCR產物。純化后的PCR產物-20。C 保存備用。取2pL濾液在瓊脂糖凝膠上電泳，估算濃度。
純化后的PCR產物委托上海英駿生物技術有限公司測序，測序用美國ABI3730測序
9儀(ABI 3730 sequencer, Applied Biosystems, USA)，測序引物同上述的ITS1和ITS4。
獲得的ITS rDNA基因序列在GenBank上的登錄號EU636699,并用該序列在GenBank
上進行BLAST搜索，BLAST結果表明菌株菌株R5-6-l屬于瓶霉屬。
基于BLAST結果，用軟件Clustal X 1.81將菌株R5-6-l的序列與GenBank上瓶霉屬
其它已知種的序列進行比對，然后進行系統發育分析。系統發生樹的構建由軟件PAUP*
4.0bl0完成，應用最大簡約法中的啟發式搜尋法進行系統發生分析，具體設置如下用逐
步添加法生成樹，添加隨機序列，重復1000次；樹-對分-重接法作為分枝交換運算法則； 序列中單個缺口作為第五種堿基對待，插入的序列若與其他序列不同源則被刪除；應用自
舉分析評估樹的可靠性，設置自舉值為1000個重復。系統發育分析(圖3)表明菌株R5-6-l 與已報道的瓶霉屬其它種不同，屬于瓶霉屬新種，將其命名為稻瓶霉(尸W"/op/wraoo;^e)。 ITS rDNA只是菌株R5-6-l的部份基因序列，但本發明所述的菌株R5-6-l并不局限于 上述部分基因序列。
該真菌菌株R5-6-l為稻瓶霉(i^/a/印/wra w^z加)，保藏單位中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心，保藏日2008年10月27日，保藏號CGMCC2737。
實施例3、菌株R5-6-l促進水稻生長的盆栽試驗及菌株在根部定殖的顯微鏡觀察 根據Newshani, K. K. (1999).暗色有隔內生菌 一禾生瓶霉對鼠茅草的促生作用，新 植物學家，144: 517-524，報道了一種暗色有隔內生真菌未生瓶霉侵染鼠茅草根系，并促 進其生長的作用(Phialophora graminicola, a dark septate ungus， is a beneficial associate of the grass Vulpia ciliata ssp. ambigua. New phytologist, 144: 517-524.)。
MS基本培養基硝酸鉀(KN03) 1900 mg/L，硝酸銨(NH4N03) 1650 mg/L，硫酸鎂 (MgS04'7H20 ) 3 70 mg/L，磷酸二氫鉀(KH2P04) 170 mg/L，氯化銬(CaCl2.2H20) 440 mg/L, 硫酸錳(MnSCV4H20 ) 22 . 3mg/L，硫酸鋅(ZnS04-4H20) 8. 6mg/L，硼酸(H3B03) 6. 2 mg/L ， 碘化鉀(KI) 0. 83 mg/L，鉬酸鈉(Na2Mo04'2H20) 0. 25 mg/L，硫酸銅(CuS04-5H20) 0. 025 mg/L， 氯化鈷(CoCl2.6H20) 0.025 mg/L，硫酸亞鐵(FeS04-7H20) 27. 8 mg/L， Na2'EDTA 37. 3 mg/L, 甘氨酸2.0mg/L，鹽酸硫胺素(Thiamine HC1) 0. 1 mg/L，鹽酸吡咳醇(Pyridoxine HC1) 0.5 mg/L,煙酸(Nicotinic acid) 0.5 mg/L，肌醇(Inositol) 100 mg/L。
水稻種子(秀水128)去殼，在75% (v/v)酒精溶液中消毒3分種，然后在1% (v/v)次氯酸鈉溶液中消毒3分種，無菌水漂洗10次。置于含1/10濃度的PDA培養基(即馬鈴 薯20g,葡萄糖2g,瓊脂20g,蒸餾水1000 mL組成)的平皿上，24°C、光照(16h/8h， 即16小時光照，8小時無光照)下催芽5天，將每個無菌水稻幼苗置于直徑3.5 cm、高 30cm加40mL半量MS培養基的試管中，在植物生長箱中24°C、光照(16h/8h)、濕度80% 條件下培養。半量MS培養基是在每lOOOmL的1/2濃度的MS基本培養基的基礎上，加入 30g蔗糖和5g瓊脂組成。
待水稻幼苗長出三片真葉(苗高約15cm)后，隨機選擇5顆上述水稻幼苗作為實驗組、 5顆上述水稻幼苗作為對照組。在每個實驗組的水稻幼苗根部接種2個直徑5mm的稻瓶霉 R5-6-1菌絲塊。將實驗組和對照組在相同的盆栽培養條件下共培養1個月，盆栽培養條件 為植物生長箱中24。C、光照(16h/8h)、濕度80%。
肉眼觀察實驗組(即接種處理的)和對照組的水稻幼苗的生長情況，并測定水稻幼苗 的干重，顯微鏡觀察稻瓶霉菌絲在水稻幼苗根系中的定殖情況。按參考文獻[Newsham, 1999] 方法進行，根系用無菌水漂洗三次，在4。/。(w/v) K0H濃度中37。C浸泡4天，再用無菌水漂 洗三次，然后在3% (v/v) HA溶液中漂白3分鐘，用2。/。(v/v) HC1淋洗45分鐘，最后用 0. 05%(w/v)苔酚藍60°C下染色50分鐘，再用無菌水漂洗后顯微觀察。
盆栽試驗結果(如圖4所示)表明，稻瓶霉R5-6-l菌株接種水稻后，水稻長勢旺，苗 壯，根系顏色呈褐色，水稻干重顯著增加(如圖5所示)，具體結果如表1所示；顯微觀 察表明稻瓶霉菌絲定殖在水稻根部細胞內和細胞間隙(如圖6所示)。表明稻瓶霉R5-6-l 菌株能顯著促進水稻生長和增加生物量。
表l 、水稻(秀水128)的對比數據
處理干重(克)重復l重復2重復3重復4重復5平均值*標準偏差
實驗組(接種 R5-6-l)0. 1060. 1080. 1200. 0980. 0860.10360. 0126
對照組0. 0590. 0700. 0620. 0690. 0750. 0670 b0.0064
*小寫字母代表差異顯著性？<0.01
實施例4、將秀水128水稻的種子分別改成浙粳22和嘉花1號水稻的種子，其余內容同 實施例3，盆栽試驗結果表明，稻瓶霉R5-6-l菌株接種水稻后，水稻長勢旺，苗壯，根系顏 色呈褐色，水稻干重顯著增加，具體結果分別如表2和表3所示。表2 、水稻(浙粳22)的對比數據
處理1 識重復l重復2重復3重復4重復5平均值*標準偏差
實驗組(接種 R5-6-l)0. 1010. 0960. 1050. 0890. 1170. 10160. 0105
對照組0. 0610. 0760. 0640. 0680. 0720. 0682 b0. 0060
^J、寫字母代表差異顯著性P0.01 表3 、水稻(嘉花l號)的對比數據處理干重(克)重復l重復2重復3重復4重復5平均值*標準偏差
實驗組(接種 R5-6-1)0.0940. 1050. 1180. 0890. 1100. 1032 a0.0118
對照組0. 0710. 0690. 0780. 0620. 0650. 0690 b0. 0061
"J、寫字母代表差異顯著性P0.01
最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發明的若干個具體實施例。顯然，本發明 不限于以上實施例，還可以有許多變形。本領域的普通技術人員能從本發明公開的內容直 接導出或聯想到的所有變形，均應認為是本發明的保護范圍。
12序列表
SEQIDNO: 1
aacctgcgga gggatcatta aagagttgaa aaactccaac ccctgtgaac cttaccttta 60
ctgttgcttc ggcggacgac ggcccttcgt ggcccgaggc cgccggaggt tccaaactct 120
aaatctttag tgtatctctg aggaaaataa accaataatt aaaactttca acaacggatc 240
tcttggttct ggcatcgatg aagaacgcag cgaaatgcga taagtaatgt gaattgcaga 300
attcagtgaa tcatcgaatc tttgaacgca cattgcgccc gccggtattc cggcgggcat 360
gcctgttcga gcgtcatttc accactcaag cccagcttgg tgttggggca cccggccgcc 420
cggcggtcgg ggcccccaag tacatcggcg gtetcgctag gaccctgagc gcagtaactc 480
gcggtaaaac gcgcctcgct cggaagttcc cagcgggctt ccagccgcta aaccccccct 540 aattttctta ggttgacctc ggatcaggta ggaatacccg ctgaacttaa gcatatcaat 600
權利要求
1、一種真菌菌株，其特征在于該菌株為稻瓶霉(Phialophora oryzae)真菌菌株R5-6-1，保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日2008年10月27日，保藏號CGMCC2737。
2、 根據權利要求l所述的真菌菌株，其特征是所述菌株R5-6-l屬于真菌界Fimgi，子囊 菌門Ascomycota,糞殼綱Sordariomycetes，巨座殼科Magn叩orthaceae，有絲分裂真菌巨座殼科 mitosporic Magnaporthaceae，并瓦霉屬她油/ Aora。
3、 根據權利要求2所述的真菌菌株，其特征是所述菌株R5-6-l在MEA、 PDA培養基上 25。C暗培養7天的菌落直徑分別為4.5 cm、 4.6 cm; MEA培養基上的氣生菌絲比PDA培養基上 的稠密，波浪狀氣生菌絲集合形成繩索狀結構；隨著培養時間延長，菌落顏色逐漸變成灰色 至黑色，菌落表面成殼狀，產生大量分生孢子；在PDA培養基上，菌絲有隔，寬1.3-2.0 pm，無色至褐色；分生孢子梗不分枝至l-2次分 枝，多數單生，有時2-3個帚狀生；瓶梗著生在分生孢子梗頂端，燒瓶形，長5.6-13.8pm，最 寬處寬2.5-3.1 pm，基部寬1.5-2.0pm，頸部寬0.5-1.2 pm，淡褐色至褐色；分生孢子堆積在瓶 梗頂端成粘液狀，無色，單細胞，鐮刀形，強烈彎曲，長7.5-9.0 最寬處寬0.8-L2 具有厚垣孢子。
4、 根據權利要求l、 2或3所述的真菌菌株，其特征是所述菌株R5-6-l的內轉錄間隔區核 糖體DNA的全序列如SEQ ID NO: l所示。
5、 如權利要求1 4中任意一種真菌菌株的用途，其特征是用于促進植物生長或增加生 物量。
6、 根據權利要求5所述的真菌菌株的用途，其特征是所述植物為水稻。
全文摘要
本發明公開了一種真菌菌株該菌株為稻瓶霉(Phialophora oryzae)真菌菌株R5-6-1，保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日2008年10月27日，保藏號CGMCC 2737。該真菌菌株能用于促進植物(特別是水稻)的生長和增加其生物量。
文檔編號C12N1/14GK101486970SQ20081016253
公開日2009年7月22日 申請日期2008年12月1日 優先權日2008年12月1日
發明者林福呈, 章初龍, 袁志林 申請人:浙江大學