一株可降解pva的不動桿菌菌株的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一株可降解PVA的不動桿菌菌株，命名為不動桿菌Acinetobactersp.TD33，于2013年10月13日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO：M2013469，經發酵優化產PVA降解酶酶活力達到0.87U/ml。此菌株是從活性污泥中篩選得到，具有降解PVA1799的效果。該菌株能高效降解培養基及退漿污水中的PVA1799污染物組分。可以用于制備紡織等工業棉布退漿廢水處理的微生物退漿菌劑，能夠有效除去污染物PVA1799，既可以減少了環境污染又能降低污水處理成本。
【專利說明】—株可降解PVA的不動桿菌菌株
【技術領域】:
[0001]本發明涉及到一株降解PVA1799的不動桿菌菌株及其應用，尤其涉及一種能獨立降解環境中PVA1799的不動桿菌屬菌株，屬于生物工程【技術領域】。
【背景技術】:
[0002]聚乙烯醇(PVA)在紡織工業中被廣泛用作上漿劑，其中PVA1799更是占有相當大的比例。經PVA上漿的棉織物必須經過退漿處理，以增加棉織物對水的吸收性。目前常用的退漿方法是使用熱水在棉織物表面洗脫PVA，有時使用氧化劑如NaBrO2等，這就導致紡織廠排出的廢水中含有大量的PVA和氧化劑，這些會對環境造成極大的污染。
[0003]如果能將PVA降解酶或PVA降解菌運用于紡織工業的退漿工藝，在退漿工段就實現對PVA的生物降解，不僅能大大減少PVA廢水的排放，還能避免化學退漿過程中高溫和氧化造成的棉纖維損傷。研究和篩選PVA降解微生物及PVA降解酶將有助于其在退漿工藝上的運用，對于減輕環境污染將具有重大的意義。
[0004]本發明所報道的不動桿菌菌株屬能單獨降解的培養基中的PVA1799，純菌的獲得對PVA降解酶尤其是PVA氧化酶的研究有很大幫助。
【發明內容】
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[0005]本發明要解決的技術問題是提供了一種獨立降解溶液中PVA1799的菌株TD33，命名為不動桿菌Acinetobac tersp.TD33，于2013年10月13日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:M2013469，保藏地址為:中國武漢、武漢大學。
[0006]所述不動桿菌能夠降解溶解態的PVA1799。
[0007]用于培養權利要求1所述不動桿菌的最佳培養基:(g/L):PVA17991，酵母粉1，蛋白胨 1，KH2PO4L 6，K2HPO40.02，NH4SO40.5，FeSO4 ? 7H200.02，CaCl2 ? 2H200.064, MgSO4 ?7H200.1, NaCl0.02，pH7.5。發酵培養基為(g/L):PVA17991，酵母粉 0.01，KH2PO4L 6，K2HPO4O
?02，NH4SO40.5，FeSO4.7H200.02, CaCl2.2H200.064, MgSO4.7H200.1，NaCl0.02，pH7.5。
[0008]所述培養基的最佳培養溫度為30°C，最適pH為7.5。
[0009]本發明還提供了一種應用所述不動桿菌降解培養基中PVA1799的方法，將所述不動桿菌種子接種入發酵培養基。
[0010]優選方案為:將種子液30D離心后,重懸接種入發酵培養基中，30°C培養條件下,9天內培養基中的PVA1799能夠被完全降解。
【專利附圖】
【附圖說明】:
[0011]圖1為篩選純化所得TD33在PVA1799唯一碳源的瓊脂平板上的菌落形態及Finley法顯色后的透明圈圖。
[0012]TD5為陽性對照。
[0013]圖2為將TD33接種入發酵培養基后搖瓶降解特性圖[0014]圖3為TD33的系統發育樹圖【具體實施方式】；
[0015]實施例1特異性降解PVA菌株的定性篩選
[0016]1、菌株來源:活性污泥
[0017]2、培養方法:將采樣所得活性污泥10g，加入90mL無菌生理鹽水，搖床(200rpm)震蕩6h。
[0018]3、篩選:將菌懸液稀釋不同倍數后涂布PVA唯一碳源平板上，30°C培養，Finley法顯色后，選取可以產生透明圈的菌株反復進行3次平板純化，最終獲得純目的菌株，于2013年10月13日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:M2013469，保藏地址為:中國武漢、武漢大學。
[0019]實施例2PVA降解酶酶活的測定
[0020]UFinley法(改良):取400 u L發酵液上清，加入標準1OmL比色管中，加入3mL25g/L的硼酸溶液，加入300 u L0.lmol/L的I2-KI，補充水至10mL。避光反應5min，于波長690nm下測定吸光值。
[0021]2、PVA降解酶總酶活測定:取發酵液IOmL左右，在4°C下經超聲波破碎15min左右，即為粗酶液(包含胞外酶和胞內酶)，經微孔濾膜(孔徑0.45 ym，直徑50mm)過濾，然后用0.lmol/L磷酸鉀緩沖液(pH7.5)透析24h，即為粗酶液。在5X 15試管中加入0.5mL粗酶液和0.5mL底物(lg/LPVA1799溶于pH7.5的磷酸鉀緩沖液中)，將此混合體系于35°C反應6h，分別測定反應前后反應混合液所對應PVA含量的吸光度。每分鐘吸光度下降0.001定義為一個酶活單位。
[0022]實施例3菌株TD33對溶液中lg/LPVA1799的降解
[0023]1、種子的制備
[0024]取_80°C甘油管保藏的TD33菌株100 U L接種于權利要求3所述種子培養基，30°C培養16h。
[0025]2、TD33降解發酵培養基中PVA1799
[0026]取30D種子培養基離心保留菌體，并以發酵培養基重懸種子菌體接種入權利要求3所述的發酵培養基。結果顯示，7天內，發酵培養基中的PVA1799可被完全降解。
[0027]雖然本發明已以較佳實施例公開如上，但其并非用以限定本發明，任何熟悉此技術的人，在不脫離本發明的精神和范圍內，都可做各種的改動與修飾，因此本發明的保護范圍應該以權利要求書所界定的為準。
【權利要求】
1.一株可降解PVA的不動桿菌菌株，于2013年10月13日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:M2013469，經發酵優化產PVA降解酶酶活力達到0.87U/ml。
2.根據權利要求1所述的不動桿菌菌株，其特征在于能單獨的在9天內降解培養基中lg/L 的 PVA1799。
3.用于培養權利要求1所述不動桿菌菌株的種子培養基(g/L):PVA17991，酵母粉1，蛋白胨 1，KH2P041.6，K2HPO40.02，NH4SO40.5，FeSO4 ? 7H200.02，CaCl2 ? 2H200.064, MgSO4 ?7H200.1, NaCl0.02, pH7.5。
4.用于培養權利要求1所述不動桿菌菌株的發酵培養基(g/L):PVA17991，酵母粉0.01，KH2PO4L 6，K2HPO40.02，NH4SO40.5，FeSO4.7H200.02，CaCl2.2H200.064, MgSO4.7H200.1, NaCl0.02, pH7.5。
5.權利要求3或4所述培養基的最佳培養溫度為30°C，最適pH為7.5。
6.應用權利要求1所述不動桿菌菌株降解PVA1799的方法，其特征在于，將所述不動桿菌菌株至少30D種子液離心、重懸菌體接種到所要降解的PVA1799溶液中應用。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于所述不動桿菌菌株，接種至少30D種子到lg/L的發酵培養基中時，能在9內能夠降`解發酵培養基中的PVA1799。
【文檔編號】C12N1/20GK103740621SQ201410004931
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月6日 優先權日:2014年1月6日
【發明者】陳堅, 李江華, 堵國成, 李坤, 劉龍 申請人:江南大學