其構建方案，由此提供了將感蟲植物轉化成為抗蟲 植物、將普通主栽品系/品種轉化為抗蟲的主栽品系/品種的育種方法。具體而言，本發明 涉及下述方面： 1. 一種核酸分子，其選自： a) 包括SEQIDN0:2的核苷酸序列的核酸分子或其全長互補體； b) 編碼包括SEQIDNO: 1的氨基酸序列或其片段的多肽的核酸分子； c) 編碼包括與SEQIDNO: 1中所示的氨基酸序列或其片段具有至少90%同一性的氨 基酸序列的多肽的核酸分子；和 d) 編碼包括與SEQIDNO: 1中所示的氨基酸序列或其片段相比具有缺失、替換、插入一 個或多個氨基酸的氨基酸序列的多肽的核酸分子。
[0012] 2. -種DNA構建體，其包括第1項的核酸分子。
[0013] 3.第3項的DNA構建體，其進一步包括編碼異源多肽的核酸分子。
[0014] 4. 一種宿主細胞，其包含第2或3項的DNA構建體，所述宿主細胞優選細菌細胞和 真核生物細胞，更優選植物細胞和酵母細胞，所述植物細胞優選禾本科植物細胞，特別優選 水稻safiraL.)細胞。
[0015] 5. -種轉基因植物，其包括第4項的宿主細胞。
[0016] 6.第5項的植物的轉化的種子，其中所述種子包括第2或3項的DNA構建體。
[0017] 7. -種具有殺昆蟲害蟲活性的多肽，其選自： a) 包括SEQIDNO: 1的氨基酸序列或其片段的多肽； b) 包括與SEQIDNO: 1中所示的氨基酸序列或其片段具有至少90%同一性的氨基酸 序列的多肽；和 c) 包括與SEQIDNO: 1中所示的氨基酸序列或其片段相比具有缺失、替換、插入一個或 多個氨基酸的氨基酸序列的多肽；或 d) 由SEQIDNO: 1所示的氨基酸序列編碼的多肽。
[0018] 8.第7項的多肽，其進一步包括異源氨基酸序列。
[0019] 9. 一種組合物，其包括第7項的多肽。
[0020] 10.第9項的組合物，其中所述組合物選自粉末、粉屑、小丸、顆粒、噴霧劑、乳劑、 膠體和溶液。
[0021] 11.第9或10項的組合物，其包括約1重量％ -約99重量％的所述多肽。
[0022] 12. -種用于控制昆蟲害蟲群體的方法，其包括使所述群體與殺蟲有效量的第7 項的多肽接觸。
[0023] 13. -種用于殺死昆蟲害蟲的方法，其包括使所述害蟲與殺蟲有效量的第7項的 多肽接觸，或給所述害蟲喂食殺蟲有效量的第7項的多肽。
[0024] 14. -種用于產生具有殺昆蟲害蟲活性的第7項的多肽的方法，其包括在其中表 達編碼多肽的核酸分子的條件下，培養第4項的宿主細胞。
[0025] 15. -種已將DNA構建體穩定摻入到其基因組內的植物，所述DNA構建體包括編碼 具有殺昆蟲害蟲活性的蛋白質的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列選自： a) 包括SEQIDN0:2的核苷酸序列的核酸分子或其全長互補體； b) 編碼包括SEQIDNO: 1的氨基酸序列或其片段的多肽的核酸分子； c) 編碼包括與SEQIDNO: 1中所示的氨基酸序列或其片段具有至少90%同一性的氨 基酸序列的多肽的核酸分子；和 d) 編碼包括與SEQIDNO: 1中所示的氨基酸序列或其片段相比具有缺失、替換、插入一 個或多個氨基酸的氨基酸序列的多肽的核酸分子； 其中所述核苷酸序列與啟動子可操作地連接，所述啟動子驅動編碼序列在植物細胞中 的表達。
[0026] 16. -種用于保護植物不受昆蟲害蟲的方法，其包括將包括第項1的核苷酸序列 的至少一種表達載體引入所述植物或其細胞內，所述核苷酸序列編碼殺蟲多肽。
[0027] 17.第16項的方法，其中所述植物產生具有針對昆蟲害蟲的殺蟲活性的殺蟲多 肽。
[0028] 18. -種改良植物抗逆性的方法，其包括將包括第1項的核苷酸序列的至少一種 表達載體引入所述植物或其細胞內，所述核苷酸序列編碼殺昆蟲害蟲多肽。
[0029] 19. -種植物育種方法，其包括將包括第1項的核苷酸序列的至少一種表達載體 引入所述植物或其細胞內，所述核苷酸序列編碼殺昆蟲害蟲多肽。
[0030] 20.根據第15-19項任一項的方法，其中所述植物優選禾本科植物，特別優選水 稻。
[0031] 21.根據第12-19項任一項的方法，其中所述昆蟲害蟲優選鱗翅目害蟲，更優選水 稻螟蟲和斜紋夜蛾。
【附圖說明】
[0032] 圖1?原核表達質粒載體pETVip3A6結構圖。
[0033] 圖2?農桿菌質粒載體pSBVip3A6結構圖。
[0034] 圖3.轉基因抗性愈傷中Vip3ArLrl的PCR檢測。圖中，M:分子量標記；+:質 粒陽性對照；一：空質粒陰性對照；1 一 10 :轉化的愈傷；箭頭所指為目標帶。
[0035]圖 4.Vip3ArLrl蛋白檢測結果。圖中，12GV-19、12GV-26、12GV-37 和 12GV-43 為 Vip3ArLrl獨立轉化系。
[0036] 發明詳述 為解決上述問題，本發明人在大量試驗結果的基礎上，完成了本發明。以下結合附圖及 實施例數據和表格對本發明進行具體說明。
[0037] 截至目前為止，從蘇云金桿菌天然菌株中所克隆的Vip3基因對對鱗翅目科、屬、 種中的許多害蟲如草地貪夜蛾、斜紋夜蛾、棉鈴蟲和菜青蟲包括地老虎等具有高度的和專 一的殺蟲活性，但從未有報道表明這些天然菌株產生的K/a?基因對水稻二化螟、三化螟 和稻縱卷葉螟等鱗翅目害蟲具有殺蟲活性。FangJ.等（2007)曾報道一個人工嵌合基因 對玉米螟產生抗性，首次證實K/a?基因間的5' -端和3' -端功能域相互拼接可 以產生新的抗性。PerlakFJ.等（1990)和TuJ.等（1998)先后報道由0丁7^7和 形成的雜種基因可以綜合的高效殺蟲活性和的高度昆蟲種屬專一'丨生，從而 形成更優異的Bt殺蟲蛋白基因。
[0038] 本發明中的Vip3抗蟲基因的研制遵循蛋白質結構與功能統一原則，在確定了現 有Vip3蛋白質序列相關功能域的基礎上，對其實施人工設計改良，并最終研制出可對水稻 二化螟和稻縱卷葉螟等鱗翅目害蟲產生抗性的基因序列（SEQIDNol和SEQIDNo2)。
[0039] 本發明的實施方案涉及用于影響昆蟲害蟲特別是植物害蟲的組合物和方法。更具 體而言，根據實施方案分離的核酸及其片段和變體包括編碼殺蟲多肽(例如蛋白質）的核苷 酸序列。所公開的殺蟲蛋白質針對昆蟲害蟲例如但不限于鱗翅目的昆蟲害蟲是生物學活性 的(例如殺蟲的)。目的昆蟲害蟲包括但不限于：水稻二化螟稻縱卷 U\_^CnaphalocrocismedialisGuenee)、^iV^^^M-_XProdenialitura)。
[0040] 實施方案的組合物包括核酸及其片段和變體，其編碼殺蟲多肽或其片段，包括實 施方案的核苷酸序列的表達盒，分離的殺蟲蛋白質和殺蟲組合物。實施方案進一步提供了 用這些新型核酸轉化的植物和微生物，和涉及此種核酸、殺蟲組合物、轉化的生物及其產物 在影響昆蟲害蟲中的使用的方法。
[0041] 實施方案的核酸和核苷酸序列可以用于轉化任何生物，以產生所編碼的殺蟲蛋白 質。提供了涉及使用此種轉化的生物來影響或控制植物害蟲的方法。實施方案的核酸和核 苷酸序列還可以用于轉化細胞器。
[0042] 實施方案的核苷酸序列在用于影響害蟲的方法中直接有用，所述害蟲特別是昆蟲 害蟲，例如鱗翅目的害蟲。因此，實施方案提供了用于影響昆蟲害蟲的新方法，其不依賴于 傳統的、合成化學殺昆蟲劑的使用。實施方案涉及天然存在的、生物可降解的殺蟲劑和編碼 其的基因的發現。
[0043] 在下文說明書中，廣泛使用了許多術語。提供了下述定義以促進實施方案的理解。
[0044] 單位和符號可以以其公認形式表示。除非另有說明，否則分別地，核酸以5'到3' 方向從左往右書寫；氨基酸序列以氨基到羧基方向從左往右書寫。數字范圍包括限定范圍 的數字。氨基酸在本文中可以通過其通常已知的三字母符號或通過IUPAC-IUB生物化學命 名委員會（BiochemicalNomenclatureCommission)推薦的單字母符號提及。同樣地，核 苷酸可以通過其通常公認的單字母編碼提及。上述術語通過參考就整體而言的說明書更全 面地定義。
[0045] 如本文使用的，"核酸"包括提及單或雙鏈形式的脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚 合物。
[0046] 如本文使用的，術語"編碼"或"編碼的"當在特定核酸背景中使用時，意指核酸包 括指導核苷酸序列翻譯成特定蛋白質的必需信息。蛋白質由其編碼的信息由密碼子的使用 指定。編碼蛋白質的核酸可以包括在核酸的翻譯區內的非翻譯序列(例如內含子)，或可以 缺乏此種間插非翻譯序列(例如如在cDNA中）。
[0047] 術語"多肽"、