的固體發酵培養基于121°C滅菌40分鐘。
[0032]5、成品干燥
[0033]通過鏡檢，確認90%以上的多粘芽孢桿菌產孢后，將發酵基質置于熱循環烘箱內干燥，干燥溫度為50 °C。
[0034]6、產品處理
[0035]干燥后粉碎，粉碎的基質粉即為多粘芽孢桿菌孢子粉。檢測孢子含量為279X10scfu/g。
[0036]實施例2固體發酵生產多粘芽孢桿菌孢子
[0037]包括以下步驟:
[0038]步驟1-3同實施例1。
[0039]步驟4:固體發酵
[0040]將二級液體種子液按18%的接種量接種至固體發酵培養基中，于淺盤發酵設備中35°C，培養期間通入無菌空氣，通氣量2.5L/min，相對濕度85%以上的條件下，培養2.5天后用滅菌的噴灑壺向固體發酵培養基上噴灑補加經滅菌的液體補料培養基，補料的比例為1:4干物質量計。補料的比例為1:4干物質量計。繼續培養2天，鏡檢產孢量達到85%以上，提高培養箱溫度值45°C，繼續培養6小時后取出培養物，干燥至水分含量為8%以下。
[0041]每天對發酵盤取樣鏡檢，如有雜菌感染則取出滅菌后丟棄。
[0042]用于固體發酵生產多粘芽孢桿菌孢子的固體發酵培養基配方為:玉米秸桿粉(細度為20目)2份、豆柏粉2份和0.5 %氯化鈉溶液4份。將配制好的固體發酵培養基于121°C滅菌40分鐘。
[0043]步驟5:成品干燥
[0044]通過鏡檢，確認90%以上的多粘芽孢桿菌產孢后，將發酵基質置于熱循環烘箱內干燥，干燥溫度為50 °C。
[0045]步驟6:產品處理
[0046]干燥后粉碎，粉碎的基質粉即為多粘芽孢桿菌孢子粉。檢測孢子含量為222X 10scfu/g。
[0047]實施例3固體發酵生產多粘芽孢桿菌孢子
[0048]包括以下步驟:
[0049]步驟1-3同實施例1。
[0050]步驟4:固體發酵
[0051]將二級液體種子液按15%的接種量接種至固體發酵培養基中，于淺盤發酵設備中35°C，培養期間通入無菌空氣，通氣量2.5L/min，相對濕度85%以上的條件下，培養1.5天后用滅菌的噴灑壺向固體發酵培養基上噴灑補加經滅菌的液體補料培養基，補料的比例為1:4干物質量計。繼續培養2.5天，鏡檢產孢量達到85%以上，提高培養箱溫度值45°C，繼續培養6小時后取出培養物，干燥至水分含量為8%以下。
[0052]每天對發酵盤取樣鏡檢，如有雜菌感染則取出滅菌后丟棄。
[0053]用于固體發酵生產多粘芽孢桿菌孢子的培養基配方為:玉米秸桿粉(細度為20目)4.5份、豆柏粉4.5份和0.5%氯化鈉溶液6份。將配制好的固體發酵培養基于121°C滅菌40分鐘。
[0054]步驟5:成品干燥
[0055]通過鏡檢，確認90%以上的多粘芽孢桿菌產孢后，將產品置于熱循環烘箱內干燥，干燥溫度為50 °C。
[0056]步驟6:產品處理
[0057]干燥后粉碎，粉碎的基質粉即為多粘芽孢桿菌孢子粉。檢測孢子含量為241X10scfu/g。
[0058]雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發明作了詳盡的描述，但在本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發明要求保護的范圍。
【主權項】
1.多粘芽孢桿菌固體發酵產孢的方法，其特征在于，包括多粘芽孢桿菌菌種活化、一級液體種子液的制備、二級液體種子液的制備及固體發酵的步驟； 其中，固體發酵步驟中使用的固體發酵培養基包括如下重量份的各組分:玉米秸桿粉2-4.5、豆柏粉2-4.5和0.5%氯化鈉溶液4-6 ； 液體補料培養基為:蔗糖5g/L、蛋白胨10g/L、氯化鈉5g/L、磷酸二氫鉀2g/L、硫酸錳5g/L、硫酸猛 5g/Lo2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述固體發酵培養基包括如下重量份的各組分:玉米秸桿粉2.5、豆柏粉2.5和0.5%氯化鈉溶液5。3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述玉米秸桿粉的細度為20目。4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，一級液體種子液的制備方法為:將活化后的多粘芽孢桿菌挑2-3環菌種接種至盛有400ml肉湯培養基的1000ml三角瓶中，于35°C，200r/min的條件下發酵20h，發酵過程中控制pH值7.0，即得一級液體種子液。5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，二級液體種子液的制備方法為:將一級液體種子液按10%的接種量接種至肉湯培養基中，于發酵罐中，35°C，180r/min，通氣量3L/min條件下，發酵培養18h，即得二級液體種子液。6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，固體發酵的方法為:將二級液體種子液按15% -20%的接種量接種至固體發酵培養基中，于淺盤發酵設備中35°C，通氣量2.5L/min，相對濕度85%以上的條件下，培養1.5-2.5天，然后進行培養基補充，即向固體發酵培養基上噴灑液體補料培養基，繼續培養，待產孢量達到85%以上時，提高培養溫度至45°C，繼續培養6h后取出培養物。7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，進行培養基補充時，向固體發酵培養基上噴灑液體補料培養基，補料的比例為1:4干物質量計，繼續培養2-2.5天，待產孢量達到85%以上時，提高培養溫度至45°C，繼續培養6h后取出培養物，干燥至水分含量為8%以下。8.根據權利要求1-7任一項所述的方法，其特征在于，用于發酵生產多粘芽孢桿菌孢子的多粘芽孢桿菌菌株購自中國農業微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為10122。9.多粘芽孢桿菌孢子粉的制備方法，其特征在于，根據權利要求1-8任一項所述的方法，固體發酵培養結束后，將發酵基質干燥后粉碎，即得多粘芽孢桿菌孢子粉。10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，干燥溫度為50°C。
【專利摘要】本發明提供一種多粘芽孢桿菌固體發酵產孢的方法，包括多粘芽孢桿菌菌種活化，一級液體種子液的制備和二級液體種子液的制備，再采用固體發酵方法發酵產生孢子。所述固體發酵使用的固體發酵培養基由玉米秸稈粉、豆粕粉和無機鹽組成，固體發酵過程中向培養基上噴灑補料培養基。采用本發明提供的多粘芽孢桿菌固體發酵產孢的方法，可產生大量的孢子，基質孢子量最高可達279×108cfu/g，發酵單位高，生產過程不產生廢料，環保無污染。發酵獲得的孢子-基質混合物經干燥后可直接用于農作物的生防。
【IPC分類】C12R1/12, C12N3/00
【公開號】CN105255808
【申請號】CN201510676975
【發明人】羅志威, 譚石勇, 豐來, 徐滔明, 易子霆, 周芳茹
【申請人】遼寧泰谷生物科技有限公司
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年10月16日