5′－核糖核苷酸含量高的醇母提取物及其制備方法

專利名稱：5′－核糖核苷酸含量高的醇母提取物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物及其制備方法。
背景技術：
酵母提取物作為天然調料被廣泛利用，為了提高呈味性(呈味性)，提出了各種5’-核糖核苷酸含量提高了的5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物或其制備方法。例如，在專利文獻1中，公開了使用核酸含量高的酵母菌體，預先加熱使酵母菌體的核糖核酸酶失活后，在pH8～12的范圍提取RNA和提取物成分，然后，讓5’-磷酸二酯酶和5’-腺苷酸脫氨基酶作用，使5’-核苷酸合計含有14重量％或以上的方法。在專利文獻2中，公開了在易于提取RNA的堿性條件下，將酵母懸浮液的在RNA不分解成非呈味性核苷酸的溫度下，并且為了抑制其它成分的提取，在短時間內結束提取工序后，讓5’-磷酸二酯酶和5’-腺苷酸脫氨基酶作用，使含有5’-鳥苷酸和5’-肌苷酸各8重量％或以上，且肽和游離氨基酸合計16重量％或以上的方法。另外，在專利文獻3中，公開了將用酸性水溶液處理(pH2～5，30～90℃，10～60分鐘)的酵母菌體懸浮在水中，提取RNA和提取物成分后，讓5’-磷酸二酯酶和脫氨基酶作用，制備分別含有10重量％或以上的5’-鳥苷酸、5’-肌苷酸、5’-胞苷酸、5’-尿苷酸的5’-核苷酸含量高的酵母提取物的制備方法。
專利文獻1特公平7-93871號公報專利文獻2專利第2604306號說明書專利文獻3特開2002-101846號公報
發明內容本發明的目的在于提供5’-核糖核苷酸和氨基酸含量比以往更高的、呈味性進一步提高的酵母提取物及其制備方法。
本發明人為了提高酵母提取物的5’-核糖核苷酸和氨基酸含量，不斷進行悉心的研究，結果發現，將食用酵母的酸性水溶液處理與離心分離后水洗沉淀物、用放線菌產生的酶類處理相結合，可以得到與以往的酵母提取物相比，5’-核糖核苷酸和氨基酸含量大大提高的高質量的酵母提取物，從而完成了本發明。
即，本發明提供(1)5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物，其特征在于含有5’-肌苷酸和5’-鳥苷酸合計24重量％或以上(以鈉鹽水合物計)、肽20重量％或以上、以及肽和游離氨基酸合計28重量％或以上，(2)上述(1)所述的酵母提取物，其含有5’-肌苷酸和5’-鳥苷酸各12重量％或以上(以鈉鹽水合物計)，(3)上述(1)所述的5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物制備方法，其特征在于用酸性水溶液處理食用酵母，離心分離，所得沉淀物用水洗滌后，與放線菌產生的酶接觸，(4)上述(3)所述的制備方法，其中在pH1.0～2.0，50～90℃下，進行酸性水溶液的處理10～60分鐘。
(5)上述(3)所述的制備方法，其中在pH4.0～6.0，50～90℃下，進行水洗處理10～60分鐘，(6)上述(3)所述的制備方法，其中在酶反應前，在70～100℃下，加熱10～60分鐘，在pH6.0～8.0與放線菌產生的酶接觸，和(7)上述(3)所述的制備方法，其中濃縮所得5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物，所得濃縮液在50℃或以上加熱，并噴霧干燥。
通過本發明可以得到5’-核糖核苷酸和氨基酸含量比以往大幅提高且呈味性顯著得到改善的高質量的酵母提取物。

圖1是表示試驗例2中的洗滌處理pH與IG含量的關系的圖。
圖2是表示試驗例3的洗滌處理中酵母懸浮濃度與IG含量的關系的圖。
具體實施方式用作本發明酵母提取物原料的酵母只要是食用酵母，對其沒有特別的限定，鮮酵母、用其公知的方法適當干燥得到的干酵母均可，例如，可以使用葡萄酒酵母、面包酵母、清酒酵母、啤酒酵母等。特別優選RNA含量高的產蛋白假絲酵母(Candida utilis)，從工業上的產率看，優選以干酵母的形式使用。
本發明的酵母提取物的特征在于，以鈉鹽水合物計，含有5’-肌苷酸和5’-鳥苷酸合計24重量％或以上，肽20重量％或以上以及肽和游離氨基酸合計28重量％或以上。特別優選含有5’-肌苷酸和5’-鳥苷酸各12重量％或以上。
這里，肽是總氨基酸量減去游離氨基酸量的值，5’-核糖核苷酸含量、總氨基酸量、游離氨基酸量是用后面所示的方法測定的值。
本發明的酵母提取物是粉末、液體、糊等任何形態均可，用后面所示的方法測定的溶解色是1.0或以下的淡色，在粉末的情況下，優選粗比體積(粗比容)2.0或以下、休止角為40度或以下的流動性好的酵母提取物。
本發明的酵母提取物可以如下制備用酸性水溶液處理食用酵母，然后離心分離，所得沉淀物用水洗滌后，與放線菌產生的酶接觸。
用酸性水溶液處理酵母時，作為原料酵母，使用例如干酵母時，通常以5～30重量％，優選10～20重量％的濃度，將酵母懸浮在水(例如，離子交換水等)中。懸浮液的濃度過低時，導致產率降低，而濃度過高時，粘度過于增高，攪拌等變得困難。用鹽酸等酸將該懸浮液調節到pH1.0～2.0，在50～90℃加熱、攪拌10～60分鐘，進行酸性水溶液處理。
接著，用常規方法離心分離，收集含有RNA的酵母菌體的沉淀物。
將所得沉淀物以例如1～30重量％的濃度再次懸浮在水中，用氫氧化鈉等堿調節到pH4.0～6.0，在50～90℃加熱、攪拌10～60分鐘，洗滌，再次離心分離。該洗滌可以提高5’-核糖核苷酸的含量。洗滌時固體成分濃度越低，可以更有效地提高含量。使這里所得的沉淀物與放線菌產生的酶接觸，進行酶處理。
作為在本發明中使用的放線菌產生的酶類，可以舉出以5’-磷酸生成型核酸酶、脫氨基酶和蛋白酶作為必需構成酶的酶類，例如，用本身公知的方法培養鏈霉菌屬的菌株，含有5’-磷酸生成型核酸酶、脫氨基酶和蛋白酶的培養物可以直接使用，或者使用培養濾液、菌體、菌體破碎物、它們的提取液、其濃縮物、干燥物等，或者用公知的方法收集以5’-磷酸生成型核酸酶、脫氨基酶和蛋白酶作為必需構成酶的酶類，可以使用其粗制物或以純化酶的形式使用。
由于培養液要么體積大，要么為防止腐敗需要冷凍保存等措施，添加量增多時，存在在生產現場的計量等費力等問題，最好以沒有這些問題的適于工業生產的干酵母形式使用，特別是以酶效價不降低而粉末化的酶形式使用。作為干燥方法，只要是品溫(品溫)在80℃以下，不使酶失活的干燥方法，公知的例如恒溫干燥、減壓(真空)干燥、冷凍干燥等任何方法均可，優選冷凍干燥等。
作為放線菌產生的酶類，例如，使用干燥培養液的水溶性部分而得到的干燥物時，通常相對于酵母，使用0.1～3.0重量％左右。也可以使用以該干燥物換算的效價為基準，用水適當稀釋干燥培養液的水溶性部分得到的物質，另外，使用培養液本身時，通常相對于酵母，可以以5.0～50.0重量％左右的比例使用。
酶處理時，例如，以5～30重量％，優選10～20重量％的濃度將上述沉淀物懸浮在水中，用堿調節到pH6.0～8.0，在70～100℃，加熱10～60分鐘后，在35～60℃，優選35～45℃的初期溫度下，該酵母固體成分中添加0.1～3.0重量％；優選0.2～2.0重量％的放線菌產生的酶類，經3～10小時，優選3～8小時，升溫至60～70℃。接著，在60～70℃，優選62～68℃，對該液體作用1～8小時，優選2～5小時。酶處理后，在90～100℃加熱10～60分鐘使酶失活，然后冷卻至約60℃以下。
對所得液體進行精密過濾。精密過濾按照本身公知的方法，例如，用采用平均孔徑0.05～0.2μm，優選0.1～0.2μm的氧化鋁陶瓷膜的微孔過濾器進行。這種氧化鋁陶瓷膜例如可以從日本ガイシ(株)、ノリタケカンパニ-リミテド購得。另外，對過濾溫度沒有特別的限定。
與高分子膜材料比較，氧化鋁陶瓷材質的膜由于膜面的細孔徑分布均勻且分布窄，因此可以得到高的過濾精度，與高分子膜材質相比，耐熱、耐壓、耐磨損性、耐鹽或酸、堿和醇等有機溶劑耐性非常優異，可以高過濾壓力運轉、對高粘性高漿液有效、可以蒸汽殺菌等，在衛生上是優選的。
通過這種精密過濾，可以得到透明且味道、氣味、顏色等外觀等優異、風味良好的所需的5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物。
根據需要，精密過濾后，也可以濃縮使濾液的固體成分濃度為10～50重量％，優選30～40重量％。對濃縮方法沒有特別的限定，例如，可以采用常壓加熱濃縮、減壓過熱濃縮、冷凍濃縮等公知的濃縮方法。而且，也可以用公知的方法，干燥、制成粉末。特別優選加熱至50℃以上并噴霧干燥作為防止濃縮液凝膠化的方法。
本發明的5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物可以和公知的酵母提取物一樣使用，例如，可以將所得酵母提取物用在農產加工食品(包括蔬菜、水果、谷物等加工品)、水產加工食品(包括魚貝類、海藻等加工品)、畜產加工食品(包括畜肉、蛋、乳制品等加工品)、海帶、木魚煮的湯、高湯、調味汁、醬油、豆醬、所有調合在一起的調料等中。
通過以下的實施例和試驗例更詳細地說明本發明，但本發明不限定于它們。另外，除非特別說明，“％”是指重量％。
在下面的實施例和試驗例中，固體成分濃度是按照《食品衛生檢查指南》理化學編厚生省主編社團法人日本食品衛生協會(1991年)的試驗法1.水分(3)干燥助劑法，在105℃經3小時測定水分，由100減去測定的水分算出。
食鹽濃度用《衛生試驗法注解》日本藥學會編，金原出版(1990)(10)氯離子1)摩爾法測定。
總氮量用微量凱氏定氮法(ミクロケルダ一ル法)測定。另外，總氮量乘以6.25為蛋白質量。
對于RNA含量，用社團法人日本化學會編，生化學實驗講座2，“核酸的化學L-分離精制-”，6-8頁(1975年，株式會社東京化學同人發行)中記載的Schmidt-Thannhauser-Schneider法，測定用適當蒸餾水稀釋試樣，用膜濾器(0.45μm)過濾而制備的檢測液。
對于5’-核苷酸含量，用日立制作所制的高效液相色譜儀L5020型測定用適量蒸餾水稀釋試樣，用膜濾器(0.45μm)過濾制備的檢測液。另外，柱子使用Develosil ODS-UG5(野村化學制)，檢測在254nm處進行，流動相液體使用用蒸餾水將85％磷酸13ml和磷酸鉀0.34g溶解并定容為1L的液體。
對于總氨基酸，將試樣(相當于蛋白質5mg)與20％鹽酸1ml一起放入耐熱性玻璃容器中，密封，在110℃水解20小時后，用蒸發器除去鹽酸，和以下游離氨基酸的測定同樣地進行測定。
對于游離氨基酸，使用島津制作所制的高效液相色譜儀LC-10氨基酸分析系統，測定用適量蒸餾水稀釋試樣，最終稀釋是用pH2的檸檬酸緩沖液稀釋，用膜濾器(0.45μm)過濾制備的檢測液。
對于溶解色，用分光光度計，在測定波長440nm、1cm比色杯中測定用蒸餾水稀釋試樣成為固體成分1％的水溶液，用膜濾器(0.45μm)過濾制備的檢測液。
對于比體積，將試樣用漏斗平穩地倒入量筒中，測定倒入的試樣的重量和容積，用每單位重量的體積表示。
實施例1用36％鹽酸將產蛋白假絲酵母(Candida utilis)(RNA11％)的10％懸浮液調節到pH1.7，在60℃加熱10分鐘。將其離心分離，得到沉淀物。往該沉淀物中加水，制成8％懸浮液，用30％NaOH調節至pH5.0，離心分離，得到沉淀物。在90℃下加熱該沉淀物的10％懸浮液10分鐘后，用30％NaOH調節至pH7.7，加入放線菌產生的酶類干燥粉末，在40℃至65℃保持12小時。反應結束后，在90℃加熱10分鐘，冷卻至60℃。過濾反應結束后的液體，用蒸發器濃縮濾液。將濃縮液保溫在60℃，用噴霧干燥機干燥，得到粉末。
所得酵母提取物的成分分析值示于表1中。
表1
※15’-肌苷酸2鈉7水合物的形式※25’-鳥苷酸2鈉7水合物的形式※3總氨基酸-游離氨基酸實施例2用36％鹽酸將產蛋白假絲酵母(Candida utilis)(RNA11％)的10％懸浮液調節到pH1.7，在60℃加熱10分鐘。將其離心分離，得到沉淀物。往該沉淀物中加水，制成2％懸浮液，用30％NaOH調節至pH5.0，在90℃下加熱30分鐘后，離心分離，得到沉淀物。用30％NaOH將該沉淀物的10％懸浮液調節至pH7.7，加入放線菌產生的酶類干燥粉末，在40℃至65℃保持12小時。反應結束后，在90℃加熱10分鐘，冷卻至60℃。過濾反應結束后的液體，用蒸發器濃縮濾液。將濃縮液保溫在60℃，用噴霧干燥機干燥，得到粉末。
所得酵母提取物的成分分析值示于表2中。
表2
※15’-肌苷酸2鈉7水合物的形式※25’-鳥苷酸2鈉7水合物的形式※3總氨基酸-游離氨基酸試驗例1對含有5’-核糖核苷酸的酵母提取物的洗滌處理條件的研究(1)用36％鹽酸將產蛋白假絲酵母(Candida utilis)(RNA11％)的10％懸浮液調節到pH1.7，在60℃加熱10分鐘。將其離心分離，得到沉淀物。往該沉淀物中加水，分別離心分離以下部分制成2％懸浮液的物質(試驗區A)；制成2％懸浮液后，在90℃加熱30分鐘得到的物質(試驗區B)；和制成2％懸浮液后，調節至pH5.0，在90℃加熱30分鐘得到的物質(試驗區C)，得到沉淀物。將這些沉淀物制成10％的懸浮液，只將試驗區A在90℃加熱10分鐘。用30％NaOH將各試驗區的10％懸浮液調節至pH7.7，加入放線菌產生的酶類干燥粉末，在40℃至65℃保持12小時。反應結束后，在90℃加熱10分鐘，冷卻至60℃。測定離心分離反應結束后的液體所得上清液中以固形物計的5’-核糖核苷酸含量，結果如表3所示。沉淀物的2％懸浮液經pH調節、加熱處理的試驗區C的5’-核糖核苷酸含量最高。
表3
※5’-肌苷酸和5’-鳥苷酸試驗例2對含有5’-核糖核苷酸的酵母提取物的洗滌處理條件的研究(2)用36％鹽酸將產蛋白假絲酵母(Candida utilis)(RNA11％)的10％懸浮液調節到pH1.7，在60℃加熱10分鐘。將其離心分離，得到沉淀物。往該沉淀物中加水，制成2％懸浮液，調節至pH3～7后，進行加熱處理和非加熱處理，分別離心分離，得到沉淀物。將這些沉淀物制備成10％的懸浮液，只對非加熱處理區在90℃加熱10分鐘。之后，用30％NaOH將各10％的懸浮液調節至pH7.7，加入放線菌產生的酶類的干燥粉末，在40℃至65℃保持12小時。反應結束后，在90℃加熱10分鐘，冷卻至60℃。
測定離心分離反應結束后的液體所得上清液中以固形物計的5’-核糖核苷酸含量。
結果示于圖1中。
如圖1所示，調節至pH5和6且加熱的液體的5’-核糖核苷酸的含量(圖中IG含量)最高。
試驗例3對含有5’-核糖核苷酸的酵母提取物的洗滌處理條件的研究(3)用36％鹽酸將產蛋白假絲酵母(Candida utilis)的10％懸浮液調節到pH1.7，在60℃加熱10分鐘。將其離心分離，得到沉淀物。往該沉淀物中加水，制成2～8％懸浮液，調節至pH5后，在90℃加熱30分鐘后，分別離心分離，得到沉淀物。用30％NaOH將這些沉淀物的10％懸浮液調節至pH7.7，加入放線菌產生的酶類的干燥粉末，在40℃至65℃保持12小時。反應結束后，在90℃加熱10分鐘，冷卻至60℃。
測定離心分離反應結束后的液體所得上清液中以固形物計的5’-核糖核苷酸含量。
結果示于圖2中。
如圖2所示，懸浮濃度越低，5’-核糖核苷酸含量(圖中IG含量)越高。
工業實用性如以上所記載的，本發明可以得到5’-核糖核苷酸和氨基酸含量非常高、呈味性顯著得到改善的酵母提取物。
權利要求
1.一種5′-核糖核苷酸含量高的酵母提取物，其特征在于含有5′-肌苷酸和5′-鳥苷酸合計24重量％或以上(以鈉鹽水合物計)，肽20重量％或以上，以及肽和游離氨基酸合計28重量％或以上。
2.權利要求1所述的酵母提取物，含有5′-肌苷酸和5′-鳥苷酸各12重量％或以上(以鈉鹽水合物計)。
3.權利要求1所述的5′-核糖核苷酸含量高的酵母提取物的制備方法，其特征在于用酸性水溶液處理食用酵母，離心分離，所得沉淀物用水洗滌后，與放線菌產生的酶接觸。
4.權利要求3所述的制備方法，其中在pH 1.0～2.0、50～90℃下，進行酸性水溶液的處理10～60分鐘。
5.權利要求3所述的制備方法，其中在pH 4.0～6.0、50～90℃下，進行水洗處理10～60分鐘。
6.權利要求3所述的制備方法，其中在酶反應前，在70～100℃下，加熱10～60分鐘，在pH 6.0～8.0下與放線菌產生的酶接觸。
7.權利要求3所述的制備方法，其中將所得5′-核糖核苷酸含量高的酵母提取物濃縮，所得濃縮液在50℃或以上加熱，并噴霧干燥。
全文摘要
本發明提供5′－核糖核苷酸和氨基酸含量比以往更高的酵母提取物及其制備方法。用酸性水溶液處理食用酵母，離心分離，所得沉淀物用水洗滌后，與放線菌產生的酶接觸，由此制備含有5′－肌苷酸和5′－鳥苷酸合計24重量％或以上，肽20重量％或以上，以及肽和游離氨基酸合計28重量％或以上的5′－核糖核苷酸含量高的酵母提取物。
文檔編號C12P21/06GK1961743SQ20051012494
公開日2007年5月16日 申請日期2005年11月9日 優先權日2004年11月9日
發明者小谷弘一, 木田隆生, 波多野廣行, 宮垣太郎, 三柳一樹 申請人:武田麒麟食品株式會社