一種治療風濕、類風濕性關節炎的藥物組合物的制作方法

專利名稱：：一種治療風濕、類風濕性關節炎的藥物組合物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種治療類風濕性關節炎的藥物組合物，具體地，是以姜黃、肉桂為原料制備而成的藥物組合物。屬中藥領域。
背景技術：
：類風濕性關節炎(RheumatismArthritis,RA)是一種以慢性進行性關節病變為主的自身免疫性疾病，為對稱性的多關節炎，以雙手、腕、肘、膝、踝和足關節受累最常見。類風濕關節炎可反復發作，遷延多年，最終導致關節畸形及功能喪失。類風濕關節炎是一個世界范圍內的疾病，分布于所有種族和民族，患病率為0.4%1.0%，患病率有黑種人高于白種人、歐美人高于日本人的傾向。類風濕性關節炎可以發生在任何年齡，但是隨著年齡增大，其患病率也隨之增高，高發年齡為4060歲。性別與類風濕關節炎發病有很大關系，資料顯示，女性發病率約為男性的3倍。據1994年第15屆國際關節炎與自身免疫病會議報道，我國類風濕性關節炎的患病率約為0.3%。根據SFDA南方醫藥經濟研究所調査數據顯示，近兩年，在我國治療類風濕關節炎的三大類藥物中，非甾體抗炎藥一直是類風濕治療藥物的主要用藥類別，同時慢作用藥物和中成藥的市場份額近兩年均有所增長，說明這兩類藥物的使用范圍正在擴大。由于類風濕關節炎疾病具有慢性、長期、難徹底根治的特點，患者需要長期服藥，不少患病多年的老患者通過自身的用藥經驗和醫生的處方，而自行轉向零售市場購藥。通過SFDA南方所調查數據顯示，醫院市場和零售市場的藥品使用格局有所差異。醫院市場中非甾體抗炎藥占有的市場份額最高，其次是慢作用藥，最后為中成藥。而零售市場中也是非甾體抗炎藥所占的市場份額最高，其次是中成藥，最后是慢作用藥。2003年，全國非甾體類風濕治療藥物仍然以COX-2新型非甾體抗炎藥為主，該類藥物的市場份額進一步上升，其中輝瑞的西樂葆和默克的萬絡占據了非甾體抗炎藥將近47%的巿場份額；慢作用藥中，蘇州長征-欣凱的愛若華(來氟米特)上市時間雖然不長，但其市場份額上升很快，2003年以31.79%的市場份額成為慢作用藥巿場的領頭羊，其余品牌的市場均非常小，而且較去年有所下降，對其形成不了威脅。而中成藥市場中，雅安三九的帕夫林以小比例的優勢居首位，競爭格局呈分散的形態，各品牌之間的市場份額差距不大，市場競爭激烈。類風濕性關節炎屬于中醫"痹證"范疇。中醫認為類風濕病的發生，外因以風、寒、濕邪為主，兼有飲食、情志等因素。內因是人體肝腎虧虛使寒濕、瘀血集于經絡、肌肉，導致經絡塞滯.肢體萎縮變形。現代醫學認為類風濕關節炎屬自身免疫性疾病，主要病變為慢性滑膜炎，增生形成血管翳。侵犯關節軟骨、軟骨下骨、韌帶和肌腿等，造成關節軟骨、骨和關節囊破壞，最終導致關節畸形和功能喪失。主要臨床表現為關節腫脹，疼痛，活動受限，晨僵現象。后期造成關節強直、畸形、功能喪失甚至殘廢。中國醫學認為風濕，痹證之屬。系正氣不足，風寒濕熱燥乘虛而人，致肢體、關節、肌肉疼痛、重著、麻木、腫脹、屈伸不利，甚或關節變形，或累及臟腑。本病因虛致痹，因痹致虛，虛邪痰瘀雜至，"不通"、"不榮"并見。鑒于臨床，用藥當行氣活血、溫經通絡。風濕性關節炎是一種與溶血性鏈球菌感染有關的變態反應性疾病，以全身結締組織的炎癥病變為特點，鏈球菌感染后，鏈球菌的毒素和代謝產物為抗原，機體產生相應抗體，抗原和抗體在結締組織結合，使之發生炎癥變性和破壞，從而形成風濕性關節炎。2007年初發生的法國安萬特公司所生產的來氟米特不良反應事件以及萬絡召回事件給非甾體抗炎藥和慢作用藥物市場造成了較大的沖擊，但與此同時也給中成藥帶來了發展的機遇，中成藥以其毒性小、安全性高的特點將會在市場上占據更大的份額，市場地位將會進一步提升，類風濕關節炎治療藥物的市場格局也將隨之產生變化。目前尚無單獨將中藥材姜黃、肉桂配伍用于治療風濕、類風濕性關節炎的相關報道。
發明內容本發明的技術方案是涉及一種治療風濕、類風濕性關節炎的藥物組合物。本發明還提供了該藥物組合物的制備方法和用途。本發明提供了一種治療風濕、類風濕性關節炎的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑姜黃l-9份、肉桂9-l份。進一步優選地，它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑姜黃l-5份、肉桂l-2份。更進一步優選地，它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑姜黃l-5份、肉桂1份。更進一步優選地，它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑姜黃2份、肉桂1份。本發明藥物組合物是由姜黃、肉桂的水或有機溶劑提取物為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。其中，所述的藥劑為膠囊劑、片劑、丸劑、口服液或顆粒劑。其中，所述的藥劑中每制劑單位含姜黃素(C21H8。06)的重量百分含量為不少于7.0%。本發明還提供了一種制備該藥物組合物的方法，它包括如下步驟a、取藥材姜黃、肉桂；b、姜黃加入乙醇提取，乙醇濃度為》65%;肉桂采用水蒸汽蒸餾，得揮發油，合并兩種提取物，加入藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學上常用的藥劑。其中，b步驟所述的乙醇濃度為70%乙醇，提取方法為乙醇滲濾法。本發明提供了該藥物組合物在制備治療類風濕性關節炎的藥物中的用途。本發明還提供了該藥物組合物在制備治療風濕性關節炎的藥物中的用途。本發明藥物原料中姜黃辛苦溫通，功專行氣活血止痛，肉桂辛熱溫散，可溫經通絡止痛，二藥同用，可使寒去瘀通，氣血暢行，則諸痛可止，與中醫"風濕"、"痹證"病機相符，故可用于風濕、類風濕性關節炎的治療，且藥效明確，具有協同增效作用。具體實施方式實施例1本發明藥物的制備姜黃2000g肉桂1000g以上二味原料藥材共制成膠囊1000粒。以上二味，姜黃粉碎成粗粉，照流浸膏與浸膏劑項下滲濾法(中國藥典2005年版一部附錄I0)用70%乙醇作溶劑，浸潤半小時后進行滲濾，俟濾液達到12000ml，停止滲濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.351.38(60°C)的清膏；肉桂切成粗顆料，加水5倍量，水蒸汽蒸餾提取5小時，收集揮發油。浸膏、揮發油加到聚乙二醇400中，填裝軟膠囊，制成1000粒，即得。實施例2本發明藥物的制備姜黃卯00g肉桂1000g以上二味原料藥材共制成膠囊1000粒。以上二味，姜黃粉碎成粗粉，照流浸膏與浸膏劑項下滲濾法(中國藥典2005年版一部附錄I0)用65%乙醇作溶劑，浸潤半小時后進行滲濾，俟濾液達到12000ml，停止滲濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.351.38(60°C)的清膏；肉桂切成粗顆料，加水5倍量，水蒸汽蒸餾提取5小時，收集揮發油。浸膏、揮發油加到聚乙二醇400中，填裝軟膠囊，制成1000粒，即得。實施例3本發明藥物的制備姜黃1000g肉桂9000g以上二味，姜黃粉碎成粗粉，照流浸膏與浸膏劑項下滲濾法(中國藥典2005年版一部附錄I0)用80%乙醇作溶劑，浸潤半小時后進行滲濾，俟濾液達到12000ml，停止滲濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.351.38(60°C)的清膏；肉桂切成粗顆料，加水5倍量，水蒸汽蒸餾提取5小時，收集揮發油。浸膏、揮發油揮合，裝入膠囊劑中，制成1000粒膠囊，即得。實施例4本發明藥物的制備姜黃1000g肉桂1000g以上二味，姜黃粉碎成粗粉，照流浸膏與浸膏劑項下滲濾法(中國藥典2005年版一部附錄IO)用90%乙醇作溶劑，浸潤半小時后進行滲濾，俟濾液達到12000ml，停止滲濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.351.38(60°C)的清膏；肉桂切成粗顆料，加水5倍量，水蒸汽蒸熘提取5小時，收集揮發油。揮發油經環糊精包合，與浸膏混合，加入輔料，壓片，得1000片。實施例5本發明藥物的制備姜黃5000g肉桂2000g以上二味，姜黃粉碎成粗粉，照流浸膏與浸膏劑項下滲濾法(中國藥典2005年版一部附錄I0)用95%乙醇作溶劑，浸潤半小時后進行滲濾，俟濾液達到12000ml，停止滲濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.351.38(60°C)的清膏；肉桂切成粗顆料，加水5倍量，水蒸汽蒸餾提取5小時，收集揮發油。浸膏、揮發油混合，制備成口服液，1000支，每支lml。實施例6本發明藥物的制備姜黃5000g肉桂1000g按實施例1所述的方法制備成軟膠囊。實施例7本發明藥物的質量控制方法姜黃素照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統適用性試驗用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；異丙醇水冰醋酸(20:27:48:5)為流動相；檢測波長為420nm。理論塔板數以姜黃素峰計算應不低于2000。對照品溶液的制備精密稱取在6(TC減壓干燥4小時的姜黃素對照品適量，加甲醇制成每lml含15txg的溶液，即得。供試品溶液的制備精密稱取本品內容物25mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解，搖勻，定容，即為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。本發明藥物軟膠囊內容物含姜黃素(C21H8()06)應不少于7.0°/。。以下通過藥效學試驗證明本發明有益效果。1、實驗目的與實驗設計本發明藥物有由姜黃等中藥組成的現代復方制劑，能散寒、除濕、止痛等作用，用于類風濕關節炎、風濕關節炎。藥效評價部分采用能較好反映RA癥狀表現的佐劑性關節炎模型(AA)，以及多種急、慢性炎癥模型，疼痛模型等全面評價其作用。雷公藤多雷公藤多苷湖北湔江制藥廠，批號060422。羅通定片國藥準字H51021203。規格30mg/片，100片/瓶。成都市湔江制藥廠，批號050602。地塞米松片:國藥準字H4424469。規格0.75mg/片，100片/瓶。廣東華南制藥廠，批號030501。冰乙酸分析純，500ml/瓶(525g)，成都長聯化工試劑有限公司，批號20050321。二甲苯分析純，500ml/瓶。成都化學試劑廠，批號20001206。苯酚規格500g/瓶。成都科龍化工試劑廠，批號20040202。梭甲基纖維素規格500g/袋。成都科龍化工試劑廠，批號20031201。戊巴比妥鈉規格25g/瓶。上海行知化工廠，SERVA進口分裝。批號921019。注射用環磷酰胺國藥準字H32020857。規格0.2g/瓶，5瓶/盒。江蘇恒瑞醫藥股份有限公司出品，批號06030412，印度墨汁規格50ml/瓶。北京市西中化工廠，批號980331生理鹽水(0.9。/。氯化鈉注射液)國藥準字H51021158。四川科倫大藥廠有限責任公司產品凍干皮上劃痕用卡介苗上海生物制品研究所雷公藤多貳片由湖南協力藥業有限公司生產，國藥準字243020138大鼠腫瘤壞死因子-a定量ELA試劑盒(進口分裝)，上海森雄公司大鼠腫瘤白介素-ip定量ELA試劑盒(進口分裝)，上海森雄公司超氧化物歧化酶(SOD)測試盒:南京建成生物工程研究所丙二醛(MDA)測定試劑盒:南京建成生物工程研究所提供.一氧化氮(NO)測定試劑盒:南京建成生物工程研究所提供.一氧化氮合成酶(NOS)測定試劑盒:南京建成生物工程研究所提供3實驗動物與環境3.1實驗動物Km(昆明種)小鼠，清潔級，SCXK(川)2005—19號，由四川省中藥研究所實驗動物中心提供。SD大鼠，清潔級，SCXK(川)2005—19號，由四川省中藥研究所實驗動物中心提供。3.2實驗環境實驗環境符合國家小鼠、大鼠、豚鼠、兔屏障系統使用設施標準(四川省實驗動物管理會許可證第100號)。4、實驗儀器EB-3200D電子天平(日本島津)；JA1003A電子天平(上海精天電子儀器有限公司)；金雀牌電子秒表(上海手表五廠)；溫度計(HANNAinstmments'H198501)RF-5301熒光分光光度計(日本島津)XZC—2B型自控溫度熱板儀，(由山東省醫學科學院設備維修供應站)電熱恒溫鼓風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司)PV—200足趾腫脹儀(四川泰盟)酶標儀ZS-3(北京航薪)，2500E型C02培養箱(無錫科達)試驗例1本發明藥物原料配伍篩選試驗(不同配伍比例組合對小鼠二甲苯耳腫脹的影響)昆明種小鼠90只，雌雄各半，體重1822g，按體重隨機分成9組，每組10只。第一組為模型對照組(灌胃色拉油)，第二組為陽性對照組(撲炎痛，5g/dl)，三至九組為本發明藥物不同配伍比例組合，給藥劑量8g(原生藥)/kg。灌胃容積為0.lml/10g體重，每日1次，連續3天。末次給藥后40min，將二甲苯(0.015ml/只)均勻涂抹于小鼠右耳正反兩面致炎(陰性對照組除外)，20分鐘后處死，沿耳廓基線剪下兩耳，以兩耳片重量之差作為腫脹度(mg)，計算各組腫脹抑制率(％)。腫脹度(mg)=右耳片重一左耳片重模型組耳片腫脹度一給藥組耳片腫脹度腫脹抑制率(％)=-X100°/o模型組耳片腫脹度由下表1實驗結果顯示，本發明藥物不同重量配伍比例組合(姜黃肉桂=9:11:9)均對二甲苯耳腫脹有抑制作用(p<0.050.01)或者抑制作用趨勢(p>0.05)，抑制率在11.5433.40%之間。以姜黃(1-5):肉桂(1-2)配伍為優選配比范圍，進一步優選姜黃肉桂為2:1時，對二甲苯致小鼠耳廓腫脹抑制作用最強，具有顯著抗炎作用。表1本發明藥物原料不同配伍比例組合對小鼠二甲苯耳腫脹的影響(hs)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與模型組比較*p>0.05**p<0.05;***p<0.01.試驗例2不同配伍比例組合對醋酸所致小鼠扭體次數的影響昆明種小鼠90只，雌雄兼有，體重1822g，按體重隨機分成9組，每組10只，第一組為陰性對照組(灌胃色拉油)，第二組為陽性對照組(羅通定片，0.08g/kg)，三至九組為本發明藥物不同配伍比例組合，給藥劑量8g(原生藥)/kg。每日定時灌胃小鼠一次，連續3天。末次給藥40分鐘后，各鼠腹腔均注射0.75%醋酸，0.2ml/只。觀察注射后20分鐘內各組出現扭體反應(腹部內凹，伸展后肢，臀部抬高)的次數。由下表2實驗結果顯示，本發明藥物不同配伍比例組合(姜黃肉桂=(9:1)(1:9))均對小鼠扭體次數有抑制作用(p<0.050.01)或者抑制作用趨勢(p>0.05)，以姜黃肉桂(1-5):(1-2)時，配伍為優選配比范圍，進一步優選為姜黃肉桂(1-2):1，其中以姜黃肉桂為2:1時，抑制作用最強，對乙酸腹腔注射引起的大面積深部疼痛有顯著對抗作用。敦本發明藥物原料不同配伍比例組合對醋^^f至小鼠扭體次數的影響()<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與模型組比較*p>0.05**p<0.05;***p<0.01.結論綜合考慮以上2個實驗結果，說明姜黃、肉桂配伍使用，發揮了協同增效的作用，其中以姜黃肉桂為2:1配伍組抗炎作用、鎮痛作用最強，為最佳配伍比例組。試驗例3本發明藥物的抗炎作用下述試驗使用的本發明藥物，lg提取物相當于原生藥7.78g，由實施例1制備而成。批號2006043;臨床用量0.4g(原生藥)/kg(體重)。配成80%、40%、20%三個濃度溶液，給藥劑量分別為8、4、2g(原生藥)/kg，相當于臨床劑量的20、10、5倍。用法口服，1ml/100g(BW)。1、對小鼠二甲苯耳腫脹的影響(1)目的給小鼠耳殼涂抹一定濃度的二甲苯可引起誘發小鼠耳殼急性炎性水腫。該模型可觀察本發明藥物對炎癥早期的對抗作用。(2)方法昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重1822g，按體重隨機分成5組，每組10只。第一組為模型對照組(灌胃色拉油)，第二組為陽性對照組(撲炎痛，5g/dl)，三至五組為本發明藥物大、中、小劑量組。灌胃容積為O.lml/10g體重，每日1次，連續3天。末次給藥后40min，將二甲苯(0.015ml/只)均勻涂抹于小鼠右耳正反兩面致炎(陰性對照組除外)，20分鐘后處死，沿耳廓基線剪下兩耳，以兩耳片重量之差作為腫脹度(mg)，計算各組腫脹抑制率(％)。腫脹度(mg)=右耳片重一左耳片重模型組耳片腫脹度一給藥組耳片腫脹度腫脹抑制率(％)=--X100%模型組耳片腫脹度(3)實驗結果由表3，本發明藥物大劑量組小鼠耳廓腫脹度均顯著低于模型對照(p<0.05)，故認為本發明藥物對二甲苯致小鼠耳廓腫脹具有抑制作用。_表3本發明藥物對小鼠二甲苯耳腫脹的影響(^s)組別動物數劑量腫脹度腫脹抑制(只)(g/kg*d)(ml)(%)模型對照組1039.63±9.26本發明藥物組108X329.65±10.22**25.74本發明藥物組104X331.40±15.54*15.3本發明藥物組102X339.25±16.32*10.4撲炎痛照組100.005X320.33±11.24林*42.89與模型組比較*p>0.05**p<0.05;***p<0.01.2、對大鼠角叉菜膠足爪腫脹的影響(1)目的選擇在注入后24小時腫脹達峰值的中效致炎劑角叉菜膠局部注射誘發大鼠足爪腫脹，該模型的特點是致炎局部PG合成增加，并與血管活性物質和激肽類一起誘發水腫。通過測量致炎前后大鼠足腫脹容積的變化來觀察本發明藥物的抗炎作用。(2)方法取大鼠50只，全雄，體重100120g，按體重隨機分成5個組，每組10只。第一組為陰性對照組(灌胃色拉油)，第二組為陽性對照組(撲炎痛片，0.6g/kg)，三至五組為本發明藥物大、中、小劑量組。每日定時灌胃小鼠一次，連續3天。末次用藥前l天，用記號筆在大鼠右后肢踝關節周圍做一標記，用排水法測定每只大鼠右后肢正常足跖容積。末次給藥30niin后，分別在大鼠右后肢足跖皮下注射1%角叉菜膠混懸液0.05ml/只致炎。分別于致炎后l、2、4、6、8h，5個時點皆各測一次右后肢足跖容積，觀察致炎前后足容積變化，并計算腫脹率。致炎后容積一致炎前容積<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>(3)實驗結果由表4可見，本發明藥物大劑量組在至炎后l、2小時，本發明藥物中劑量組在至炎后1小時，足爪體積顯著小于模型組。故可認為本發明藥物對角叉菜膠局部注射誘發大鼠腫脹具有明顯抑制作用，主要作用于角叉菜膠局部注射后1小時足爪腫脹形成期。表4本發明藥物對角叉菜致大鼠足跖腫脹的影響(3T±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與模型組比較*P〉0.05**p<0.05;***p<0.01.3、對小鼠棉球肉芽腫的影響(1)目的將高壓滅菌的棉球植入小鼠蹊部皮下，可產生與炎癥后期病理相似的結締組織增生。該模型可觀察本發明藥物對抗炎癥后期結締組織增殖作用。(2)方法小鼠60只，雌雄各半，體重1822g，按體重隨機分成5組，每組12只。第一組為模型對照組(灌胃色拉油)，第二組為陽性對照組(地塞米松，15mg/dl)，三至五組為本發明藥物大、中、小劑量組。腹腔注射戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉小鼠，仰臥固定，碘酒、酒精消毒下腹部皮膚，沿腹中線剪開長約0.5cm切口，將2個滅菌棉球(每個棉球10mg)高壓滅菌，分別滴加800u/ml青霉素和650u/ml各0.05ml，5(TC烘干)分別植入小鼠左、右蹊部皮下。術后當日開始采用等容積不等濃度藥液灌胃給藥，每日1次，連續7天。末次給藥后lh頸椎移位處死動物，將棉球連同周圍結締組織一起取出，剔除脂肪組織，置于55r烘箱24hr烘干，冷卻后稱重。干重減去原棉球重量，即得肉芽組織重量。肉芽腫重量以mg(肉芽腫)/10g(體重)表示。(3)實驗結果由表5，本發明藥物大劑量組肉芽重量和肉芽指數顯著小于模型對照組異(p<0.05)，故該藥可抑制棉球肉芽組織的形成，對慢性炎癥有一定抑制作用。表5本發明藥物對小鼠棉球肉芽腫的影響(3T±S)動物數劑量肉芽重量肉芽重量組別(只)(g/kg永d)(mg)(mg/10g體重)模型對照組1223.65±10.587.28±2.66本發明藥物128X719.95±7.22**5.86±1.13**本發明藥物124X723.00±3.94*6.54±2.13*本發明藥物122X724.25±4.177.24±1.44*地塞米松組120.015X715.5±4.12***4.23±1.03***與模型組比較*P>0.05**p<0.05;林*卩<0.01.4、對小白鼠腹腔毛細血管通透性的影響(1)目的采用低濃度醋酸作致炎因子，引起腹腔急性炎癥反應。再從尾靜脈注入染料伊文思蘭，測定腹腔染料的通透量可代表炎性滲出的多少。通過分光光度計測定給藥后腹腔染料的OD值來判斷藥物的抗炎效果(2)實驗方法取小鼠60只，1822g，雄性，按體重隨機分為5組，每組12只，第一組為模型對照組(灌胃色拉油)，第二組為陽性對照組(阿斯匹林，0.02g/kg)，三至五組為本發明藥物大、中、小劑量組。每日定時灌胃一次，連續3天。末次給藥后40min，尾靜脈注射l%伊文思蘭0.lml/10g，同時腹腔注射0.6y。醋酸0.2ml/只，20min后斷頭處死，剪開腹腔后用5ml生理鹽水反復沖洗腹腔，用吸管吸取腹腔洗出液，最后加入生理鹽水定容至10ml，3000r/min離心10min，取上清液3ml于分光光度計590nm處測吸光度A。(3)實驗結果由表6可見，本發明藥物大劑量組和中劑量組吸光度A值明顯低于模型組(P〈0.05)。故可認為本發明藥物可降低O.6%醋酸所至小鼠腹腔毛細血管通透性。表6本發明藥物對小白鼠腹腔毛細血管通透性的影響(3T±S)組別動物數(只)劑量(g/kg)A值抑制率(％)模型組90.18±0.11阿司匹林100.02X30.04±0.02"*76.63大劑量98X30.05±0.04'"73.36中劑量104X30.05±0.04"*73.46小劑量102X30.12±0.09*33.3與模型組比較*P>0.05**p<0.05;林*卩<0.01.5、本發明藥物對大鼠胸腔白細胞游走的影響(1)目的采用角叉菜膠作致炎因子，引起腹腔急性炎癥反應。測定腹腔滲出液量和滲出液中白細胞總數，評價本發明藥物對炎細胞的抑制作用。(2)實驗方法SD大鼠50只，100—120g，雌雄兼有，按體重隨機分為5組，第一組為模型對照組(灌胃色拉油)，第二組為陽性對照組(阿斯匹林，0.02g/kg，為臨床劑量的10倍)，三至五組為本發明藥物大、中、小劑量組。每日定時灌胃一次，連續3天末次給藥后1小時，將大鼠用乙醚淺麻醉，仰位固定在手術臺上，從大鼠右側胸腔角注入0.5y。角叉萊膠0.05ml/只。5小時后斷頭處死大鼠，在橫隔周邊部打開胸膛，用注射器吸出胸腔液測量滲出液量，用細胞計數儀測定滲出液中白細胞總數(3)實驗結果由表7可見，本發明藥物大、中劑量組滲出液白細胞總數顯著低于模型組(P<0.01),本發明藥物大劑量組滲出液體積顯著低于模型組(p<0.05)。故可認為，本發明藥物對0.5°/。角叉萊膠所至大鼠胸腔白細胞游和液體滲出有抑制作用。_表7本發明藥物對大鼠胸腔白細胞游走的影響(BS)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>試驗例4本發明藥物的鎮痛作用1、對醋酸所致小鼠扭體次數的影響(1)目的給小鼠腹腔注射一定濃度的乙酸可誘發小鼠腹腔深部大面積而較持久的疼痛，致使小鼠產生扭體反應。該模型可觀察本發明藥物的非特異性鎮痛作用。(2)實驗方法小鼠50只，雌雄兼有，體重1822g，按體重隨機分成5組，每組10只，第一組為陰性對照組(灌胃色拉油)，第二組為陽性對照組(羅通定片，0.08g/kg)，三至五組為本發明藥物大、中、小劑量組。每日定時灌胃小鼠一次，連續3天。末次給藥40分鐘后，各鼠腹腔均注射0.75%醋酸，0.2ml/只。觀察注射后20分鐘內各組出現扭體反應(腹部內凹，伸展后肢，臀部抬高)的次數。(3)實驗結果由表8，本發明藥物大、中劑量組小鼠扭體次數低于模型對照組小鼠，并有顯著性差異(P〈0.05)。故可認為本發明藥物對乙酸腹腔注射引起的大面積深部疼痛有對抗作用。表8本發明藥物對醋酸所至小鼠扭體次數的影響(BS)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>2、對熱板所至小鼠疼痛反映的影響(1)實驗方法按體重隨機分成5組，每組IO只。第一組為正常對照(灌胃色拉油)，第二組為陽性對照組(羅通定片，0.04g/kg，為臨床劑量的IO倍)，三至五組為本發明藥物大、中、小劑量組。每日定時灌胃小鼠一次，連續3天。預先調節熱板儀，使溫度恒定在60土0.3t:，熱板需預熱10分鐘。篩選合格雌性小鼠(放上熱板至出現添后足所需時間作為該鼠的痛閾值，凡添足時間小于5秒或大于30秒或跳躍者棄之不用)50只，重復測正常痛閾值，取兩次正常痛閾平均值，作為該鼠給藥前的痛閾值。末次給藥后測定小鼠30、60、90、120分鐘的痛閾值。如60秒鐘小鼠仍無反應，將小鼠取出，以免燙傷，其痛閾以60秒計算。給藥后痛閾值一給藥前痛閾值計算鎮痛百分率(％)=-X100%給藥前痛閾值實驗結果由表9可見，本發明藥物大劑量組在30min、60min以及中劑量組30min小鼠痛閾值高于正常對照組小鼠痛閾值，具有顯著性差異(P<0.05)，故可認為本發明藥物熱板所致非特異性疼痛有一定抑制作用。表9本發明藥物對熱板所至小鼠疼痛反映的影響()<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與正常對照組比較*p>0.05;**p<0.05;***p<0.01.試驗例5本發明藥物的免疫調節作用1、本發明藥物對2.4—二硝基氯苯(DNCB)所致小鼠遲發性變態反應的影響(1)目的觀察本發明藥物對小鼠遲發變態反應的影響，可反映藥物對機體特異免疫反應的調節作用。(2)實驗方法取昆明種小鼠50只，雌雄各半，18—22g，按體重隨機分為5組。第一組為模型對照組(灌胃色拉油)，第二組為陽性對照組，隔天皮下注射O.015g/kg環磷酰胺，三至五組為本發明藥物大、中、小劑量組。其余各組每天給藥l次，連續灌胃給藥7天。DNCB配制致敏或攻擊前以丙酮和麻油l:l為溶劑新鮮配制。給藥前3d每鼠背部脫毛3X3cm;給藥當日將50ully。DNCB溶液均勻涂抹于小鼠背部，于次日再強化l次。致敏7d后，將20ulP/oDNCB溶液均勻涂抹于均勻涂抹于每只小鼠右耳進行攻擊，24h后脫頸處死動物，稱重，沿耳廓基線剪下兩耳稱重，并取胸腺、脾臟稱重。以左右耳片重量之差表示腫脹度，并計算脾指數，胸腺指數。胸腺重量(mg)胸腺指數-X100%體重(g)脾重(mg)脾指數二-~X100%體重(g)(3)實驗結果由表IO，本發明藥物大劑量組腫脹度顯著小于模型組對組(p<0.05)，故認為本發明藥物對DNCB所致小鼠遲發性變態反應有抑制作用。表IO本發明藥物對2.4—二硝基氯苯所致小鼠遲發性變態反應的影響(3T±S)動物數劑量胸腺指數脾臟指數腫脹度組另IJ(只)(g/kg*d)(mg/10g)(mg/10g)(mg)模型對照組10一0.52土0.0800.39±0.02047.22±10.30本發明藥物組108X30.41±0.03**0.33±0,021*35.56±11.14**本發明藥物組104X30.47±0.09*0.35±0.074*40.76±10.33*本發明藥物組102X30.49±0.11*0.38±0.055*44.38±8.82*環磷酰胺組100.02X70.31±0.16*氺承0.25±0.034***12.14±9.95林*與模型組比較*p〉0.05**p<0.05;***p<0.01.2、對小鼠網狀內皮系統吞噬功能的作用(l)目的觀察本發明藥物對小鼠單核巨噬細胞系統吞噬功能的影響，可反映藥物對機體非特異免疫反應的調節作用。(2)方法昆明種小鼠72只，雌雄各半，體重1822g，按體重和性別隨機分成6組，每組12只。第一組為模型對照組(灌胃色拉油)，第二組為陽性對照組(地塞米松，10mg/dl)，三至五組為本發明藥物大、中、小劑量組。灌胃容積為O.lml/10g體重，每日1次，連續7天。末次給藥后l小時，尾靜脈注射印度墨汁(l:4稀釋)0.lml/10g體重，注射后30s和10min分別從眶后靜脈叢取血50ul，加入O.線Na2C03ml溶液中，搖勻，675nm波長比色，讀取光密度A^和Ah^，按下式計算吞噬指數k和校正吞噬指數a。lgA30s—lgAI0Blin吞噬指數k二-t「t！—體重(g)校正吞噬指數。=3vl^X-肝脾合重(g)(3)實驗結果本發明藥物各劑量組均能降低吞噬指數，大劑量組有顯著差異(p<0.05)。該藥對小鼠網狀內皮系統吞噬功能的作用有抑制作用。表ll本發明藥物對對小鼠網狀內皮系統吞噬功能的作用(i±s)組別動物數(只)劑量(g/kg*d)吞噬指數k校正吞噬指數a模型對照組122.023±0.2192.07±0.50本發明藥物組128X70.309±0.063**1.25±0.16**本發明藥物組124X70.430±0.328*1.60±0.23*本發明藥物組122X71.934±0.611*1.90±0.35*地塞米松組120.010X70.284±0.161林*l.OO土O.23**與模型組比較*p〉0.05**p<0.05;***p<0.01.3、對小鼠溶血素抗體生成的影響(1)目的給小鼠腹腔注射5%雞紅細，誘發體內產生抗體，評價本發明藥物對機體非特異免疫反應的調節作用。(2)實驗方法取昆明種小鼠60只，雌雄各半，按體重隨機分為6組。連續給藥3天后每只小鼠腹腔注射5%雞紅細胞懸液0.3ml/只進行免疫。第一組給等體積色拉油作為空白對照組;第二組為環磷酰胺；第三組為雷公藤組；第三組第四至六組支灌胃本發明藥物高、中、低濃度的藥液作為給藥組,連續給藥7天。環磷酰胺組分別于第2.4.6天皮下注射環磷酰胺0.02g/kg，免疫后7天即摘除眼球取血進行溶血素抗體測定。雞血細胞的制備:無菌條件下，取雞血于盛有Alsever's溶液的滅菌錐形瓶中，雞血與Alsever's溶液比例為1:5，混勻，4"C冰箱保存。使用時以生理鹽水洗滌3次，前兩次離心速度1000r/min，離心5min，棄上清液和界面白細胞層，最后應連續兩次離心(1500r/min，5min)，直至紅細胞壓積值恒定，按比值用生理鹽水配成所需濃度的紅細胞懸液。免疫后7天即摘除眼球取血進行溶血素抗體測定。取血約后，2000r/min離心10min，取血清10u1用生理鹽水lml稀釋100倍，然后取稀釋血清lml于試管內，與5%雞紅細胞懸液0.5ml和l:10稀釋后的新鮮豚鼠血清O.5ml混合，混勻，立即放入37。C恒溫水浴鍋恒溫30min，然后立即取出放入冰浴中終止反應，離心，取上清液于540nm處比色，以lml生理鹽水加5%雞紅細胞懸液0.5ml，10%豚鼠血清0.5ml作為空白對照，分別測定吸光度(A)值。(3)實驗結果由表12可見，本發明藥物大劑量組光密度值顯著低于模型對照組(p<0.05)，表明該藥對小鼠溶血素抗體生成具有抑制作用。表12對小鼠溶血素抗體生成的影響(3T±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>結論綜上所述，本發明藥物灌胃給藥，對二甲苯致小鼠耳廓腫脹、對角叉菜膠局部注射誘發大鼠足爪腫脹、大鼠胸腔白細胞游走、小白鼠腹腔毛細血管通透性以及小鼠棉球肉芽腫均有明顯抑制作用，表明本發明藥物具有抗炎作用。本發明藥物灌胃給藥，可以顯著抑制熱板法所致小鼠添足次數，對抗熱板所致非特異性疼痛；還可顯著抑制醋酸法致小鼠扭體次數，對乙酸腹腔注射引起的大面積深部疼痛具有對抗作用。本發明藥物灌胃給藥對正常小鼠網狀內皮系統吞噬作用有明顯抑制作用；對DNCB誘發DTH反應及血清溶血素抗體生成都有明顯抑制作用。本發明藥物灌胃給藥，對完全弗氏佐劑致大鼠關節炎(AA)原發病變和繼發病變有明顯改善作用，可以減輕滑膜增生、纖維組織增生、減少多種炎細胞浸潤等多種病理學改變。能降低佐劑性關節炎大鼠(AA)血清中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量，及一氧化氮合成酶(NOS)活力；提高超氧化物歧化酶(SOD)活力。表現一定抗氧化作用。可降低佐劑性關節炎大鼠(AA)血清中炎性細胞因子TNF-a、IL-P含量。本發明藥物抗類風濕的機理或與抗氧化、調節炎性細胞因子有關。綜上，本發明藥物具有抗炎作用、鎮痛作用，免疫調節及抗氧化作用，對佐劑關節炎動物模型有顯著改善作用，故可用于治療風濕、類風濕性關節炎治療。權利要求1、一種治療風濕、類風濕性關節炎的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑姜黃1-9份、肉桂9-1份。2、根據權利要求1所述的治療風濕、類風濕性關節炎的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑姜黃l-5份、肉桂l-2份。3、根據權利要求2所述的治療風濕、類風濕性關節炎的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑姜黃l-5份、肉桂1份。4、根據權利要求3所述的治療風濕、類風濕性關節炎的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑姜黃2份、肉桂1份。5、根據權利要求l-4任一項所述的治療風濕、類風濕性關節炎的藥物組合物，其特征在于它是由姜黃、肉桂的水或有機溶劑提取物為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑，所述的藥劑為膠囊劑、片劑、丸劑、口服液或顆粒劑。6、根據權利要求5所述的治療風濕、類風濕性關節炎的藥物組合物，其特征在于所述的膠囊劑為軟膠囊，每粒含姜黃素C2iH8o06的重量百分含量為不少于7.0%。7、一種制備權利要求l-6任一項所述的治療風濕、類風濕性關節炎的藥物組合物的方法，它包括如下步驟a、取藥材姜黃、肉桂；b、姜黃加入乙醇提取，乙醇濃度為》65%;肉桂采用水蒸汽蒸餾，得揮發油，合并兩種提取物，加入藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學上常用的藥劑。8、根據權利要求7所述的治療風濕、類風濕性關節炎的藥物組合物，其特征在于b步驟所述的乙醇濃度為70%乙醇，提取方法為乙醇滲濾法。9、權利要求1所述的藥物組合物在制備治療類風濕性關節炎的藥物中的用途。10、權利要求1所述的藥物組合物在制備治療風濕性關節炎的藥物中的用途。全文摘要本發明提供了一種治療風濕、類風濕性關節炎的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑姜黃1-9份、肉桂9-1份。本發明還提供了該藥物組合物的制備方法和用途。本發明藥物治療風濕、類風濕性關節炎，藥效明確，姜黃與肉桂配伍使用，發揮了協同增效的作用，為臨床提供了一種新的選擇。文檔編號A61K9/10GK101229353SQ20081010123公開日2008年7月30日申請日期2008年2月29日優先權日2008年2月29日發明者楊安東,趙軍寧申請人:四川省中醫藥科學院