專利名稱：草烏甲素的制備方法
技術領域：
本發明屬于天然藥物制備領域，具體涉及高純度草烏甲素的制備方法。
背景技術：
草烏甲素(Bulleyaconitine A，分子式為C35H49NOltl,分子量為643. 77)具有較強的鎮痛抗炎等藥理活性，試驗證實草烏甲素屬于中樞性鎮痛劑，具有較強的鎮痛活性且無成癮性。目前以草烏甲素為原料的草烏甲素片劑、口服液、注射劑等劑型用于臨床，主要用于治療癌癥晚期疼痛、風濕及類風濕性關節炎、肩周炎、肩臂痛、落枕、骨關節炎、良性關節痛、腰及四肢關節扭傷、挫傷、腰肌勞損及腰背痛、坐骨神經痛、肌纖維炎及肋軟骨炎、帶狀皰疹、感冒頭痛、牙痛等。
現有技術中，中國專利200910094477. X公開了制備草烏甲素的方法為酸醇提取，純化時洗脫劑為石油醚/環己烷-丙酮-二乙胺；CN101830849 A公開了制備草烏甲素的方法為草烏的塊根用堿溶液提取，純化時洗脫劑為石油醚/汽油/正己烷-乙酸乙酯-二乙胺/三乙胺。這些方法涉及的洗脫溶劑均為三元系統，溶劑回收后極性發生改變，不容易回收再利用，成本高且方法步驟復雜。
發明內容
針對現有技術存在的上述不足，本發明通過科學實驗，旨在發明一種提取率高、毒性低且適合工業化生產的草烏甲素的制備方法。下述的技術方案是用來實現上述的發明目的一種草烏甲素的制備方法，包括提取、萃取分離、柱層析分離純化、結晶純化步驟，所述的提取是將干燥的直緣烏頭塊根粉碎，適量甲醇浸潤24小時，用甲醇或乙醇進行滲濾提取，甲醇或乙醇的用量為藥材量的8 15倍，合并滲濾液，濃縮至膏狀；所述的萃取分離是將提取步驟所得的膏用I. 5%的鹽酸溶液溶解,過濾,酸水液繼用25%濃氨水調pH至9，堿液用石油醚萃取2次，繼用氯仿或乙酸乙酯萃取3次，合并氯仿或乙酸乙酯萃取部分并減壓回收至膏狀，得粗總堿；所述的柱層析分離純化是將萃取分離步驟所得的粗總堿，用氯仿溶解吸附于I. 5倍量硅膠拌樣，室溫揮干，進行硅膠柱層析，以50-20:1-2的石油醚二乙胺進行梯度洗脫，收集洗脫液，以草烏甲素為對照用薄層色譜TLC跟蹤檢測，合并主含草烏甲素的流份，回收溶劑至干，得到主要含草烏甲素部分；所述的結晶純化是將柱層析分離步驟所得的主要含草烏甲素的部分，用丙酮或甲醇或乙醇溶解進行結晶和重結晶，得草烏甲素純品O上述方法中，提取步驟所用的甲醇或乙醇的量為藥材料量的8-10倍。上述方法中，柱層析分離純化步驟中所用的硅膠為200-300目，柱層析的硅膠用量為樣品量的10 - 30倍。本發明的方法以毛茛科烏頭屬植物直緣烏頭(Aconitum transsectum Diels.)塊根為原料，采用甲醇或乙醇滲濾提取，純化時洗脫劑為石油醚-二乙胺，此方法為二元系統，較現有技術的三元系統相比，溶劑更容易回收再利用，極性大小的調節更容易趨于一致，從而大大減低了生產成本。此方法更為簡單，流水化程度更高，更適合于工業化生產。
圖I為本發明制備方法所得到的草烏甲素的HPLC檢測結果圖，草烏甲素含量檢測采用2010年版《中國藥典》的方法；圖2為本發明制備方法所得到的草烏甲素的 結構示意圖。
具體實施例方式下面結合附圖，用本發明的實施例進一步對本發明作詳細說明，但不構成對本發明的任何限制。實施例I :本發明提供的草烏甲素的制備方法具體包括以下工藝步驟(I)提取將干燥的直緣烏頭(Aconitum transsectum Diels.)塊根粉碎,適量甲醇浸潤24小時，用甲醇進行滲濾提取，甲醇的用量為藥材量的8 15倍，合并滲濾液，濃縮至膏狀。(2)萃取分離將步驟(I)所得的膏用I. 5%的鹽酸溶液溶解,過濾，酸水液繼用濃氨水(25%)調PH至9，堿液用石油醚萃取2次，繼用氯仿或乙酸乙酯萃取3次，合并氯仿或乙酸乙酯并減壓回收氯仿至膏狀，得粗總堿。(3)柱層析分離純化將步驟(2)所得的粗總堿，用氯仿溶解吸附于I. 5倍量硅膠拌樣，室溫揮干，進行硅膠柱層析，以石油醚二乙胺(50-20 :1-2)進行梯度洗脫，收集洗脫液，以草烏甲素為對照用薄層色譜(TLC)跟蹤檢測，合并主含草烏甲素的流份，回收溶劑至干，得到主要含草烏甲素部分。(4)結晶純化將步驟(3)所得主要含草烏甲素的部分，用丙酮、甲醇或乙醇溶解進行結晶和重結晶，即得草烏甲素純品。經上述步驟所得草烏甲素純品，按2010年版《中國藥典》草烏甲素項下的條件進行檢測，按面積歸一化法計算，純度大于98%。取直緣烏頭干燥塊根10 kg，粉碎，適量甲醇浸潤24小時，用甲醇進行滲濾提取，甲醇的用量為藥材量的12倍，合并滲濾液，濃縮至膏狀，用I. 5%的鹽酸溶液溶解，過濾，酸水液繼用濃氨水(25%)調pH至9，堿液用石油醚萃取2次，每次5升；繼用氯仿萃取3次，每次5升，合并氯仿液，減壓回收至膏狀，得粗總堿108 g。粗總堿用氯仿300 ml溶解并吸附于162 g 20(Γ300目硅膠上拌樣，室溫揮干，進行硅膠柱層析，以石油醚二乙胺(50:1-20:2)進行梯度洗脫，收集洗脫液，以草烏甲素為對照用薄層色譜[展開劑為石油醚丙酮二乙胺(20:1:1)]跟蹤檢測，合并主含草烏甲素的流份，回收溶劑至干，得到主要含草烏甲素部分35 g，繼用丙酮200 ml溶解進行結晶，再用丙酮200 ml溶解進行重結晶，即得草烏甲素純品24. 5 g。所得純品高效液相色譜法(HPLC)檢測草烏甲素含量為98. 6% (見圖I)。
實施例2 取直緣烏頭干燥塊根10 kg，粉碎，適量甲醇浸潤24小時，用甲醇進行滲濾提取，甲醇的用量為藥材量的10倍，合并滲濾液，濃縮至膏狀，用I. 5%的鹽酸溶液溶解，過濾，酸水液用濃氨水(25%)調pH至9，堿液用石油醚萃取2次，每次5升；繼用氯仿萃取3次，每次5升，合并氯仿液，減壓回收至膏狀，得粗總堿110 g。粗總堿用300 ml氯仿溶解并吸附于164 g 20(Γ300目硅膠上拌樣，室溫揮干，進行硅膠柱層析，以石油醚二乙胺(50:1-20:2)進行梯度洗脫，收集洗脫液，以草烏甲素為對照用薄層色譜[展開劑為石油醚丙酮二乙胺(20:1:1)]跟蹤檢測，合并主含草烏甲素的流份，回收溶劑至干，得到主要含草烏甲素部分37 g，繼用丙酮200 ml溶解進行結晶，再用丙酮200 ml溶解進行重結晶，即得草烏甲素純品25. 2 g。所得純品高效液相色譜法(HPLC)檢測草烏甲素含量為98.8%。實施例3 取直緣烏頭干燥塊根10 kg，粉碎，適量甲醇浸潤24小時，用甲醇進行滲濾提取，甲醇的用量為藥材量的8倍，合并滲濾液，濃縮至膏狀，用I. 5%的鹽酸溶液溶解，過濾，酸水液繼用濃氨水(25%)調pH至9，堿液用石油醚萃取2次，每次5升；繼用氯仿萃取3次，每次5升，合并氯仿液，減壓回收至膏狀，得粗總堿105 g。粗總堿用氯仿300 ml溶解并吸附于160 g 20(Γ300目硅膠上拌樣，室溫揮干，進行硅膠柱層析，以石油醚二乙胺(50:1-20:2)進行梯度洗脫，收集洗脫液，以草烏甲素為對照用薄層色譜[展開劑為石油醚丙酮二乙胺(20:1:1)]跟蹤檢測，合并主含草烏甲素的流份，回收溶劑至干，得到主要含草烏甲素部分34 g，繼用丙酮200 ml溶解進行結晶，再用丙酮200 ml溶解進行重結晶，即得草烏甲素純品24. 8 g。所得純品高效液相色譜法(HPLC)檢測草烏甲素含量為98. 3%。本發明草烏甲素的制備方法采用室溫提取，不會水解草烏甲素；且硅膠柱色譜分離洗脫劑僅使用二元體系，溶劑更容易回收利用，極性大小的調節更容易趨于一致，從而大大減低了生產成本；制備方法簡單，易于工業化生產，流水化程度高，產品純度高。
權利要求
1.一種草烏甲素的制備方法，包括提取、萃取分離、柱層析分離純化、結晶純化步驟，所述的提取是將干燥的直緣烏頭塊根粉碎，適量甲醇浸潤24小時，用甲醇或乙醇進行滲濾提取，甲醇或乙醇的用量為藥材量的8 15倍，合并滲濾液，濃縮至膏狀；所述的萃取分離是將提取步驟所得的浸膏用I. 5%的鹽酸溶液溶解,過濾,酸水液繼用25%濃氨水調pH至9，堿液用石油醚萃取2次，繼用氯仿或乙酸乙酯萃取3次，合并氯仿或乙酸乙酯萃取部分并減壓回收至膏狀，得粗總堿；所述的柱層析分離純化是將萃取分離步驟所得的粗總堿，用氯仿溶解吸附于I. 5倍量硅膠拌樣，室溫揮干，進行硅膠柱層析，以50-20:1-2的石油醚二乙胺進行梯度洗脫，收集洗脫液，以草烏甲素為對照用薄層色譜TLC跟蹤檢測，合并主含草烏甲素的流份，回收溶劑至干，得到主要含草烏甲素部分；所述的結晶純化是將柱層析分離步驟所得的主要含草烏甲素的部分，用丙酮或甲醇或乙醇溶解進行結晶和重結晶，得草烏甲素純品O
2.根據權利要求I所述的方法，其特征在于提取步驟所用的甲醇或乙醇的用是為藥材料量的8-10倍。
3.根據權利要求I所述的方法，其特征在于柱層析分離純化步驟中所用的硅膠為200-300目，柱層析的硅膠用量為樣品量的10 - 30倍。
全文摘要
一種高純度草烏甲素的制備方法包括提取、萃取分離、柱層析分離純化、結晶純化步驟，經高效液相色譜法(HPLC)檢測所得產品草烏甲素含量大于98%。本方法采用室溫提取，不會水解草烏甲素；且硅膠柱色譜分離洗脫劑僅使用二元體系，溶劑更容易回收利用，極性大小的調節更容易趨于一致，從而大大減低了生產成本；制備方法簡單，易于工業化生產，流水化程度高，產品純度高。
文檔編號C07D221/22GK102775349SQ20121022304
公開日2012年11月14日 申請日期2012年7月2日 優先權日2012年7月2日
發明者字淑慧, 張麗梅, 李曉波, 沈勇, 艾洪蓮, 趙大克, 鄭麗 申請人:云南農業大學