專利名稱：一種松烏甲素的制備方法
一種松烏甲素的制備方法技術領域 本發明涉及一種從植物中提取有效成分的方法，具體地說一種松烏 甲素的制備方法。
背景技術：
烏頭屬植物松潘烏頭(Aconitum sungpanense Hand-Mazz)分布于 甘肅、四川、青海省等地。民間用于治療跌打損傷、風濕、類風濕性關節炎等引起的疼痛。其 主要化學成分為多種生物堿，且以二萜生物堿為主。對于松潘烏頭總堿的提取方法、分離總堿中的二萜化合物的方法及操作過程已有 報道(藥學學報，松潘烏頭二萜生物堿的研究，1988，23 ；蘭州大學學報，松潘烏頭中的二萜 生物堿研究，1991，04)；這些方法都采用經典的化學法，主要適用于研究領域，而在產業化 過程中就會遇到很多問題。申請號為2007100572049，授權公告號為CN100494181C的中國 發明專利公開的一種從松潘烏頭中提取查斯曼寧的方法，也屬于純化學法。這些單純的化 學方法提取步驟繁多，操作復雜，不能適用于大規模生產，對操作人員身體健康有害，存在 產品純度不高，生產成本高，以及環境污染等諸多問題。
發明內容
本發明要解決的技術問題在于提供一種松烏甲素的制備方法，該方 法完全能適用企業產業化生產，操作簡便，工作效率高，總生物堿提取得率高，根據需要提 取不同純度的松烏甲素，有利于操作人員身體健康。為了實現上述目的，本發明采取的技術方案如下一種松烏甲素的制備方法，其特 征在于，包括兩大步驟第一，從松潘烏頭提取總生物堿；1. 1取過60 80目標準篩的松潘烏頭根粉300g，盛于5000 10000ml的細口瓶 中，加入重量百分比濃度8 15%氨水300ml ；1. 2用重量百分比濃度60 80%乙醇3000 6000ml作為提取溶劑，用超聲波提 取器超聲浸提兩次；第一次浸提后，傾出浸提液，補加800 1500ml提取溶劑，進行第二次 浸提并傾出浸提液，合并兩次所得浸提液；每次提取時間10 30min，提取溫度50 75°C;1. 3將浸提液過濾，于旋轉蒸發器將濾液濃縮，回收溶劑，用重量百分比濃度1 5%的鹽酸萃取3次，合并萃取液；加氨水調pH值至7 11，氯仿萃取2 4次，回收溶劑 后產生白色沉淀，靜置過濾，干燥恒重得松潘烏頭總生物堿；第二，用高速逆流色譜(HSCCC)將總生物堿分離制備目標化合物松烏甲素；2.1準備兩相溶劑系統將正己烷乙酸乙酯甲醇水，按照體積比為1 2 2. 3 2 2. 3 1 1. 2配比混合，或將石油醚乙酸乙酯甲醇水，按照體積比為17 19 22 24 17 20 13 16配比混合，充分搖勻后，在室溫下靜置8 12h分層為上、下相，分離兩相，上 相作為固定相，下相作為流動相；2. 2準備松潘烏頭總堿溶液取松潘烏頭總堿150 180mg溶于40 80mL的下相中，超聲助溶15 30min，移 入50mL lOOmL的容量瓶中，加下相至刻度，搖勻得松潘烏頭總堿溶液；
2. 3高速逆流色譜分離松潘烏頭總堿溶液制備較高含量的生物堿以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充滿管道后，打開主機設定螺旋柱線圈 的旋轉速度為700 900r/min，使螺線管順時針旋轉，當達到設定轉速時，以2mL/min的流 速泵入流動相；當流動相從主機出口流出時，開始進松潘烏頭總堿溶液，進樣量為5mL，流 速lmL/min，檢測波長282nm，主機溫度20 30°C ；進樣前檢測上樣液，即進樣松潘烏頭總堿溶液中松烏甲素的含量，逆流出峰后每 5mL收集一管并編號，用高效液相色譜(HPLC)檢測每管中的松烏甲素含量；經第一次HSCCC 粗分，獲得松烏甲素含量79. 1 83. 5%的生物堿；2. 4高速逆流色譜分離生物堿制備高純度松烏甲素將第一次HSCCC粗分所獲得的生物堿，溶于30 40mL的下相中，超聲助溶15 30min，移入50mL的容量瓶中，加下相至50mL刻度，搖勻得生物堿溶液；以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充滿管道后，打開主機設定螺旋柱線圈 的轉速為700 900r/min，使螺線管順時針旋轉，當達到設定轉速時，以2mL/min的流速泵 入流動相；當流動相從主機出口流出時，開始進生物堿溶液，進樣量為5mL，流速lmL/min， 檢測波長282nm，主機溫度20 30°C ；逆流出峰后每5mL收集一管并編號，用高效液相色譜(HPLC)檢測每管中的松烏甲 素含量；最高純度的松烏甲素達到99. 65%。本發明中使用的高效液相色譜(HPLC)分析條件色譜柱Hypersil_ODS柱(4. 0X 250mmX 5 ii m，Agilent)流動相甲醇-0. 1 %磷酸緩沖液-三乙胺，pH 6. 2 (70 28 1)柱溫25°C恒溫流速10mL/min進樣量20iiL檢測波長282nm。高速逆流色譜(HSCCC)是近年來發展起來的一種液_液分配色譜新技術，其特點 是被分離物質在兩相液體中進行分配，不需要任何固相載體，克服了固相載體對樣品吸附、 損失、污染、峰形拖尾等缺點，具有混合物分離回收率高、快速、預處理簡單、分離純化與制 備同步完成的特點，因而越來越多地應用于天然產物的分離。該技術已在厚樸、大黃、丹參 等中藥有效成分的分離純化中得到應用。本發明采用HSCCC技術分離純化、制備松潘烏頭 總堿中的有效成分松烏甲素，為制備高純度松烏甲素提供了一條高效實用的新途徑。溶劑系統選擇和優化是HSCCC分離制備目標化合物的基礎。上下相分離時間是評 價溶劑系統優劣的重要指標之一，一般分離時間應在20 30s內。不同的溶劑系統具有不 同的上下相之比，并且，由于溶劑系統的黏度、極性和密度等性質的差異，會對相同的成分 產生不同的溶解能力、分配能力，以至于造成分配系數的差異，最終影響分離效果。本發明專利采用高速逆流色譜為TBE-300型高速逆流色譜、NS-1007Pump單活塞 往復恒流泵、8823A-UV紫外檢測器(上海同田生化技術有限公司)。樣品分離結果測試采 用高效液相色譜(ST I 5000，Agilent，美國)，Agilent N2000工作站，T-U1221紫外-可 見分光光度計(Agilent美國)。將HSCCC得到的5個峰做高效液相色譜分析，根據實驗結果，上下相分配系數值調解在0. 5 1. 50之間為宜。表1列出初選溶劑系統的相分離時間及上下相的分配系數。由表1看出，實驗序號4，石油醚乙酸乙酯甲醇水(19 24 17 16)、序 號5，石油醚乙酸乙酯甲醇水(17 22 20 13)及序號8，正己烷乙酸乙酯 甲醇水(1 2 2 1)三個溶劑系統符合溶劑系統要求的基本條件。故，使用步驟2. 1 提供的兩相溶劑系統。表1松烏甲素在不同溶劑系統上下相分離時間和分配系數 高速逆流色譜制備松烏甲素時，螺旋柱(Ito)線圈的旋轉速度對兩相溶劑在流體 動力學平衡時的體積比影響很大，轉速越高，固定相的保留值越大。如主機轉速低于700r/ min,固定相保留值太低，達不到分離的要求；主機轉速高于900r/min，固定相對于樣品的 保留時間太長，保留值增大，也不利于分離制備。通過與傳統溶劑浸提多次對比試驗得出結論本發明方法松潘烏頭總生物堿的提 取率高，其對比試驗的結論表明，本發明方法松潘烏頭總生物堿的提取率高于傳統溶劑浸 提法20%，并且，本發明提取時間遠遠少于傳統方法。下面是其中一次的對比方式與結論取兩份300g 60 80目松潘烏頭根粉，分別盛于5000 10000ml的錐形瓶中，分 別加入8 15%氨水300ml。一份用傳統的熱回流法溶劑浸提，另一份用超聲波提取器超 聲浸提，超聲波提取器用⑶C-TQ型數控超聲波清洗器，由山東濟寧金百特工程機械有限公 司生產，頻率:26/70kHz ；前者放置2h充分浸潤，然后用重量百分比濃度80%乙醇4200ml作為浸提溶劑、 在溫度80°C條件下熱回流提取，12h內提取2次，每隔2h用力振搖，使分散均勻，當進行6h 后，傾出溶劑，重新補加1000ml溶劑，繼續浸提6h。后者用70%乙醇4200ml作為提取溶劑，提取溫度75°C，40min內超聲浸提兩次，第 一次25min，第二次15min，當第一次進行完后，傾出溶劑，再補加1200ml溶劑，進行第二次
超聲提取。將兩種方法所得溶液分別過濾，用RE-52A型旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠生產)濃縮，回收溶劑，用3 %的鹽酸萃取3次，合并萃取液，加氨水調pH值至9，氯仿萃取2 次，回收溶劑后產生白色沉淀，靜置過濾，干燥恒重得松潘烏頭總生物堿。前者得松潘烏頭總生物堿35. 14g，經HPLC分析，松烏甲素的含量為1. 28g，占總量 的 3. 64% ；后者松潘烏頭總生物堿33. 71g，經HPLC分析，松烏甲素的含量為1. 56g，占總量的 4. 62%。常規的烏頭總堿提取法提取時間長，提取率低；利用超聲波法改變了傳統提取工 藝的條件，加速有效成分進入溶劑，從而提高了提取效率，縮短了提取時間，節約了溶劑，并 且免去了高溫對有效成分的影響。是一種快速、簡便、高效的現代提取分離方法。采用高速逆流色譜(HSCCC)分離制備技術，被分離對象在兩相液體中進行分配， 不需要任何固相載體，克服了固相載體對樣品吸附、損失、污染、峰形拖尾等缺點，具有混合 物分離回收率高、快速、預處理簡單、分離純化與制備同步完成的特點，因而有利于松潘烏 頭中松烏甲素的分離制備。本發明分離制備松烏甲素耗用時間少，溶劑可以循環使用，一次制備的松烏甲素 純度達到99. 61 99. 74%，傳統方法是無法比擬的。該法既適用于制備對照品，科研和小 規模實驗，也適用于產業化生產，達到節能降耗，減排增效的清潔生產目的。
圖1是實施例1第一次用HSCCC分離松潘烏頭總堿的HPLC色譜圖；圖2實施例1第15管的HPLC色譜圖，經過HPLC檢測，證明第15管的HPLC色譜 圖中3號峰與圖3對應的3號峰一致，為松烏甲素；圖3化學分離制得松烏甲素對照品的HPLC色譜圖。
具體實施方式
實施例11、取過60 80目標準篩的松潘烏頭根粉300g，盛于3500ml的細口瓶中，加入重 量百分比濃度15%氨水300ml ；2、用重量百分比濃度70%乙醇3500ml作為提取溶劑，用超聲波提取器超聲浸提 兩次；第一次提取時間30min，提取溫度75°C，浸提后，傾出浸提液，補加重量百分比濃度 70%乙醇1000ml，進行第二次浸提，第二次提取時間20min，提取溫度55°C，浸提后，傾出浸 提液；合并兩次所得浸提液；3、將浸提液過濾，于旋轉蒸發器將濾液濃縮，回收溶劑，用重量百分比濃度的 鹽酸萃取3次，合并萃取液；加氨水調pH值至8，氯仿萃取3次，回收溶劑后產生白色沉淀， 靜置過濾，干燥恒重得松潘烏頭總生物堿33. 98g ；4、將正己烷乙酸乙酯甲醇水，按照體積比為1:2:2: 1配比混合，混合 前總體積為1. 0L ；充分搖勻后，充分搖勻后，在室溫下靜置8h分層為上、下相，分離兩相，得 到上相508mL，下相為478mL，上相作為固定相，下相作為流動相；5、取松潘烏頭總堿150mg溶于40mL的下相中，超聲助溶15min，移入100mL的容量 瓶中，加下相至100mL刻度，搖勻得松潘烏頭總堿溶液；6、用高速逆流色譜分離松潘烏頭總堿溶液制備生物堿以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充滿管道后，打開主機設定螺旋柱線圈 的旋轉速度為800r/min，使螺線管順時針旋轉，當達到設定轉速時，以2mL/min的流速泵入 流動相；當流動相從主機出口流出時，開始進松潘烏頭總堿溶液，進樣量為5mL，流速lmL/min，檢測波長282nm，主機溫度29°C ；進樣前檢測上樣液即進松潘烏頭總堿溶液中松烏甲素的含量為6. 93mg，逆流出峰 后每5mL收集一管并編號，用高效液相色譜(HPLC)檢測每管中的松烏甲素含量；經第一次 HSCCC粗分，獲得松烏甲素含量83. 21%的生物堿。用高效液相色譜(HPLC)檢測，分析結果 見圖1。7、高速逆流色譜分離生物堿制備高純度松烏甲素將第一次HSCCC粗分所獲得的生物堿，溶于35mL的下相中，超聲助溶25min，移入 50mL的容量瓶中，加下相至50mL刻度，搖勻得生物堿溶液；以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充滿管道后，打開主機設定螺旋柱線圈 的轉速為850r/min，使螺線管順時針旋轉，當達到設定轉速時，以2mL/min的流速泵入流動 相；當流動相從主機出口流出時，開始進生物堿溶液，進樣量為5mL，流速lmL/min，檢測波 長282nm，主機溫度25 °C ；逆流出峰后每5mL收集一管并編號，用高效液相色譜(HPLC)檢測每管中的松烏甲 素含量；第二次用HSCCC分離松潘烏頭總堿的結果見圖2。用HPLC檢測HSCCC制備的每管中松烏甲素的含量，面積歸一法計算各管中的純 度，其含量純度及回收率的變化見表2，依據此變化可收集不同時段的色譜峰，從而得到不 同純度的松烏甲素。經過HPLC檢測后，證明對應的3號峰為松烏甲素。分析的HPLC色譜 圖見圖2。最高純度的松烏甲素達到99. 65%。回收率為20. 13%。表2HSCCC松烏甲素餾分的純度及其回收率 表中純度=松烏甲素含量/干物質量回收率=松烏甲素含量/總堿中松烏甲素量實施例21、取過60 80目標準篩的松潘烏頭根粉260g，盛于5000ml的細口瓶中，加入重 量百分比濃度8%氨水300ml ；2、用重量百分比濃度80%乙醇3000ml作為提取溶劑，用超聲波提取器超聲浸提兩次；第一次提取時間20min，提取溫度55°C，浸提后，傾出浸提液，補加重量百分比濃度 80%乙醇1000ml，進行第二次浸提，第二次提取時間15min，提取溫度65°C，浸提后，傾出浸 提液；合并兩次所得浸提液；3、將浸提液過濾，于旋轉蒸發器將濾液濃縮，回收溶劑，用重量百分比濃度3%的 鹽酸萃取3次，合并萃取液；加氨水調pH值至11，氯仿萃取2次，回收溶劑后產生白色沉淀， 靜置過濾，干燥恒重得松 潘烏頭總生物堿32. 56g ；4、將石油醚乙酸乙酯甲醇水，按照體積比為19 24 17 16配比混合， 充分搖勻后，在室溫下靜置12h分層為上、下相，分離兩相，上相作為固定相，下相作為流動 相；5、取松潘烏頭總堿170mg溶于45mL的下相中，超聲助溶20min，移入100mL的容量 瓶中，加下相至100mL刻度，搖勻得松潘烏頭總堿溶液；6、用高速逆流色譜分離松潘烏頭總堿溶液制備生物堿設定螺旋柱線圈的旋轉速度850r/min，主機溫度25°C。進樣前檢測上樣液總堿溶 液中松烏甲素的含量為6. 85mg，其它同實施例1 ；逆流出峰后每5mL收集一管并編號，用高效液相色譜HPLC檢測每管中的松烏甲素 含量；經第一次HSCCC粗分，獲得松烏甲素含量81. 10%的生物堿；7、高速逆流色譜分離生物堿制備高純度松烏甲素將第一次HSCCC粗分所獲得的生物堿，溶于50mL的下相中，超聲助溶15min，移入 100mL的容量瓶中，加下相至100mL刻度，搖勻得生物堿溶液；以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充滿管道后，打開主機設定轉速為 900r/min，主機溫度20°C ；其它同實施例1 ；逆流出峰后每5mL收集一管并編號，用高效液相色譜HPLC檢測每管中的松烏 甲素含量；第14管中干物質量為1. 74mg,松烏甲素含量1. 632mg,純度93. 78%，回收率 23.87%。第15管中干物質量為1.95mg，松烏甲素含量1. 941mg，純度99. 54%，回收率 28. 33% o實施例31、取過60 80目標準篩的松潘烏頭根粉280g，盛于5000ml的細口瓶中，加入重 量百分比濃度12%氨水300ml ；2、用重量百分比濃度60%乙醇3500ml作為提取溶劑，用超聲波提取器超聲浸提 兩次；第一次提取時間20min，提取溫度65°C，浸提后，傾出浸提液，補加重量百分比濃度 60%乙醇1500ml，進行第二次浸提，第二次提取時間15min，提取溫度75°C，浸提后，傾出浸 提液；合并兩次所得浸提液；3、將浸提液過濾，于旋轉蒸發器將濾液濃縮，回收溶劑，用重量百分比濃度4%的 鹽酸萃取3次，合并萃取液；加氨水調pH值至9，氯仿萃取3次，回收溶劑后產生白色沉淀， 靜置過濾，干燥恒重得松潘烏頭總生物堿33. 13g ；4、將石油醚乙酸乙酯甲醇水，按照體積比為18 24 20 16配比混合， 充分搖勻后，在室溫下靜置9h分層為上、下相，分離兩相，上相作為固定相，下相作為流動 相；5將松潘烏頭總堿180mg溶于50mL的下相中，超聲助溶20min，移入100mL的容量 瓶中，加下相至lOOmL刻度，搖勻得松潘烏頭總堿溶液；
6、用高速逆流色譜分離松潘烏頭總堿溶液制備生物堿設定螺旋柱線圈的旋轉速度750r/min，主機溫度20°C。進樣前檢測上樣液總堿溶 液中松烏甲素的含量為7. 85mg，其它同實施例1 ；逆流出峰后每5mL收集一管并編號，用高效液相色譜HPLC檢測每管中的松烏甲素 含量；經第一次HSCCC粗分，獲得松烏甲素含量80. 01%的生物堿；7、高速逆流色譜分離生物堿制備高純度松烏甲素將第一次HSCCC粗分所獲得的生物堿，溶于55mL的下相中，超聲助溶20min，移入 100mL的容量瓶中，加下相至100mL刻度，搖勻得生物堿溶液；以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充滿管道后，打開主機設定轉速為 800r/min，主機溫度25°C ；其它同實施例1 ；逆流出峰后每5mL收集一管并編號，用高效液相色譜HPLC檢測每管中的松烏甲素 含量；最高純度99. 11%。實施例41、稱取實施例3所得的松潘烏頭總生物堿190mg ；2、將石油醚乙酸乙酯甲醇水，按照體積比為17 22 20 13配比混合， 充分搖勻后，在室溫下靜置9h分層為上、下相，分離兩相，上相作為固定相，下相作為流動 相；3、將松潘烏頭總堿190mg溶于60mL的下相中，超聲助溶20min，移入100mL的容量 瓶中，加下相至100mL刻度，搖勻得松潘烏頭總堿溶液；4、用高速逆流色譜分離松潘烏頭總堿溶液制備生物堿設定螺旋柱線圈的旋轉速度900r/min，主機溫度26°C。進樣前檢測上樣液總堿溶 液中松烏甲素的含量為8. 29mg，其它同實施例1 ； 逆流出峰后每5mL收集一管并編號，用高效液相色譜HPLC檢測每管中的松烏甲素 含量；經第一次HSCCC粗分，獲得松烏甲素含量79. 45%的生物堿；7、高速逆流色譜分離生物堿制備高純度松烏甲素將第一次HSCCC粗分所獲得的生物堿，溶于55mL的下相中，超聲助溶30min，移入 100mL的容量瓶中，加下相至100mL刻度，搖勻得生物堿溶液；以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充滿管道后，打開主機設定轉速為 800r/min，主機溫度25°C ；其它同實施例1 ；逆流出峰后每5mL收集一管并編號，用高效液相色譜HPLC檢測每管中的松烏 甲素含量；第14管中干物質量為2. 535mg,松烏甲素含量2. 38mg,純度93. 89%，回收率 28.71%。第15管中干物質量為2. 103mg，松烏甲素含量2.09mg，純度99. 38%，回收率 25. 21%。實施例51、取過60 80目標準篩的松潘烏頭根粉250g，盛于5000ml的細口瓶中，加入重 量百分比濃度8%氨水300ml ；2、用重量百分比濃度80%乙醇3000ml作為提取溶劑，用超聲波提取器超聲浸提 兩次；第一次提取時間20min，提取溫度55°C，浸提后，傾出浸提液，補加重量百分比濃度 80%乙醇1000ml，進行第二次浸提，第二次提取時間15min，提取溫度65°C，浸提后，傾出浸
9提液；合并兩次所得浸提液；3、將浸提液過濾，于旋轉蒸發器將濾液濃縮，回收溶劑，用重量百分比濃度3%的 鹽酸萃取3次，合并萃取液；加氨水調pH值至11，氯仿萃取2次，回收溶劑后產生白色沉淀， 靜置過濾，干燥恒重得松潘烏頭總生物堿31. 79g ；4、將正己烷乙酸乙酯甲醇水，按照體積比為1 2. 25 2. 1 1. 1配比混 合，充分搖勻后，在室溫下靜置15h分層為上、下相，分離兩相，上相作為固定相，下相作為 流動相；5、取松潘烏頭總堿180mg溶于55mL的下相中，超聲助溶25min，移入100mL的容量 瓶中，加下相至lOOmL刻度，搖勻得松潘烏頭總堿溶液；6、用高速逆流色譜分離松潘烏頭總堿溶液制備生物堿設定螺旋柱線圈的旋轉速度850r/min，主機溫度26°C。進樣前檢測上樣液總堿溶 液中松烏甲素的含量為7. 10mg，其它同實施例1 ；逆流出峰后每5mL收集一管并編號，用高效液相色譜HPLC檢測每管中的松烏甲素 含量；經第一次HSCCC粗分，獲得松烏甲素含量81. 26%的生物堿；7、高速逆流色譜分離生物堿制備高純度松烏甲素將第一次HSCCC粗分所獲得的生物堿，溶于50mL的下相中，超聲助溶20min，移入 100mL的容量瓶中，加下相至100mL刻度，搖勻得生物堿溶液；以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充滿管道后，打開主機設定轉速為 900r/min，主機溫度20°C ；其它同實施例1。
權利要求
一種松烏甲素的制備方法，其特征在于，包括兩大步驟第一，從松潘烏頭提取總生物堿；1.1 取過60～80目標準篩的松潘烏頭根粉300g，盛于5000～10000ml的細口瓶中，加入重量百分比濃度8～15％氨水300ml；1.2 用重量百分比濃度60～80％乙醇3000～6000ml作為提取溶劑，用超聲波提取器超聲浸提兩次；第一次浸提后，傾出浸提液，補加800～1500ml提取溶劑，進行第二次浸提并傾出浸提液，合并兩次所得浸提液；每次提取時間10～30min，提取溫度50～75℃；1.3 將浸提液過濾，于旋轉蒸發器將濾液濃縮，回收溶劑，用重量百分比濃度1～5％的鹽酸萃取3次，合并萃取液；加氨水調pH值至7～11，氯仿萃取2～4次，回收溶劑后產生白色沉淀，靜置過濾，干燥恒重得松潘烏頭總生物堿；第二，用高速逆流色譜(HSCCC)將總生物堿分離制備目標化合物松烏甲素；2.1 準備兩相溶劑系統將正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水，按照體積比為1∶2～2.3∶2～2.3∶1～1.2配比混合，或將石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇∶水，按照體積比為17～19∶22～24∶17～20∶13～16配比混合，充分搖勻后，在室溫下靜置8～12h分層為上、下相，分離兩相，上相作為固定相，下相作為流動相；2.2 準備松潘烏頭總堿溶液取松潘烏頭總堿150～180mg溶于40～80mL的下相中，超聲助溶15～30min，移入50mL～100mL的容量瓶中，加下相至刻度，搖勻得松潘烏頭總堿溶液；2.3 高速逆流色譜分離松潘烏頭總堿溶液制備較高含量的生物堿以10mL/min的流速泵入固定相，待固定相充滿管道后，打開主機設定螺旋柱線圈的旋轉速度為700～900r/min，使螺線管順時針旋轉，當達到設定轉速時，以2mL/min的流速泵入流動相；當流動相從主機出口流出時，開始進松潘烏頭總堿溶液，進樣量為5mL，流速1mL/min，檢測波長282nm，主機溫度20～30℃；進樣前檢測松潘烏頭總堿溶液中松烏甲素的含量，逆流出峰后每5mL收集—管并編號，用高效液相色譜檢測每管中的松烏甲素含量；經第一次HSCCC粗分，獲得松烏甲素含量79.1～83.5％的生物堿；2.4 高速逆流色譜分離生物堿制備高純度松烏甲素將第一次HSCCC粗分所獲得的生物堿，溶于30～40mL的下相中，超聲助溶15～30min，移入50mL的容量瓶中，加下相至50mL刻度，搖勻得生物堿溶液；以10mL/min的流速泵入固定相，待固定相充滿管道后，打開主機設定螺旋柱線圈的轉速為700～900r/min，使螺線管順時針旋轉，當達到設定轉速時，以2mL/min的流速泵入流動相；當流動相從主機出口流出時，開始進生物堿溶液，進樣量為5mL，流速1mL/min，檢測波長282nm，主機溫度20～30℃；逆流出峰后每5mL收集—管并編號，用高效液相色譜檢測每管中的松烏甲素含量；最高純度的松烏甲素達到99.65％。
全文摘要
一種松烏甲素的制備方法，包括兩大步驟第一，從松潘烏頭提取總生物堿；取過60～80目標準篩的松潘烏頭根粉300克，盛于細口瓶中，加入重量百分比濃度8～15％氨水300ml；用％乙醇作為提取溶劑，用超聲波提取器超聲浸提兩次；浸提液過濾濃縮，鹽酸萃取；氯仿萃取2～4次，回收溶劑，靜置過濾，干燥恒重得松潘烏頭總生物堿；第二，用高速逆流色譜將總生物堿分離制備目標化合物松烏甲素；準備兩相溶劑系統；取松潘烏頭總堿溶于下相得松潘烏頭總堿溶液，以10mL/min的流速泵入固定相；經兩次分離得最高純度99.65％的松烏甲素。本發明既適用于制備對照品，科研和小規模實驗，也適用于產業化生產，達到節能降耗，減排增效的清潔生產目的。
文檔編號C07D221/22GK101851202SQ20101016725
公開日2010年10月6日 申請日期2010年5月7日 優先權日2010年5月7日
發明者馬學毅 申請人:蘭州大學