一種用于凍存固體培養絲狀真菌的空心罩的制作方法
【技術領域】
[0001] 本實用新型屬于菌種保藏技術研究領域，具體涉及一種用于凍存固體培養絲狀真 菌的空心罩及凍存方法。
【背景技術】
[0002] 絲狀真菌是重要的微生物菌種資源，許多類群的絲狀真菌是科研或生產用菌株， 對人類生產生活產生了重要影響，具有較大的社會經濟價值。對絲狀真菌菌種資源的保藏 不僅保護了生物多樣性，更為人類研究和利用這些菌種起到了重要作用。目前，微生物的保 藏主要有以下四種方法：（1)液氮超低溫保藏法，該法同時適用于液體培養物和固體培養 物的保藏；（2)冷凍干燥保藏法，該法雖適用于液體和固體培養物的保藏，但兩類培養物均 需先制備成符合保藏要求的菌懸液；（3)-80°C低溫凍結保藏法，該法的操作同液氮超低溫 保藏法類似，僅是保藏條件（主要是溫度）不同；(4)定期移植保藏法，該法多用于固體培 養物的短期保藏，需定期對菌種復蘇和再保藏，費時費力。其中，液氮超低溫保藏法和-80°C 低溫凍結保藏法因操作簡易且保藏時間較長被廣泛應用于各類微生物的保藏。
[0003] 用于保藏的絲狀真菌多采用固體培養方式，主要因為固體培養易于真菌生長特 性的觀察，便于發現污染，從而提高保藏的質量。目前，進行固體培養絲狀真菌的保藏均 是劃取或挑取菌塊，或是制備成菌懸液然后進行凍存。PRO-LAB DIAGNOSTICS公司開發的 MICR0BANK凍存系統《用于固體培養絲狀真菌的凍存時也是按照上述操作，需要先將劃取 的菌塊或菌懸液加入凍存溶液中，然后再加入有孔珠子進行混勻，細胞附著于有孔珠子內 部和外部的表面。這類凍存方法均存在一定的缺陷和局限性，主要是因為：①劃取或挑取的 菌塊用于菌種保藏時，菌塊攜帶的培養基存在于凍存液中，進行菌種復蘇時會將這些培養 基帶入新的培養基中，對有特殊要求的菌種培養會產生不利影響；②固體培養的絲狀真菌 在制備菌懸液時污染風險較大，易導致保藏失敗。
[0004] 目前關于絲狀真菌的凍存方法已有報道，但經文獻檢索，未發現與本實用新型內 容相類同的公開文獻報道。 【實用新型內容】
[0005] 本實用新型的目的在于改進現有技術之不足，提供一種用于凍存固體培養絲狀真 菌的空心罩及使用該空心罩的操作方便、成本低廉且能夠滿足特殊培養要求的固體培養絲 狀真菌的凍存方法，為絲狀真菌的保藏提供技術支持。
[0006] 本實用新型第一方面涉及一種用于凍存固體培養絲狀真菌的空心罩3,其底部34 為一平面且其內部具有與所述底部34連通的空心33。
[0007] 在本實用新型優選的實施方案中，所述空心罩3為半球狀空心罩、圓臺狀空心罩、 圓柱狀空心罩、圓錐狀空心罩或長方體狀空心罩。
[0008] 在本實用新型優選的實施方案中，所述空心罩3的罩面32上布有棘刺31。該棘刺 31的形狀不受限制，直立狀、彎曲狀或多枝杈狀均可。
[0009] 在本實用新型優選的實施方案中，所述棘刺31的長度為lmm-4mm。
[0010] 在本實用新型優選的實施方案中，所述空心罩3的直徑在3mm~6mm之間。
[0011] 在本實用新型優選的實施方案中，所述空心罩3由樹脂材料制成。
[0012] 本實用新型第二方面涉及一種用于固體培養絲狀真菌的凍存方法，該方法包括下 述步驟：
[0013] a.制備固體培養基平板并接種待保藏絲狀真菌；
[0014] b.滅菌處理根據本實用新型第一方面所述的空心罩；
[0015] c.將所述空心罩底部向下置于待保藏絲狀真菌接種點周圍的固體培養基表面；
[0016] d.培養所述待保藏絲狀真菌，至絲狀真菌生長覆蓋所述空心罩的罩面或所述空心 罩罩面上的棘刺，得到長有所述待保藏絲狀真菌的空心罩；
[0017] e.將上述長有所述待保藏絲狀真菌的空心罩3轉移至凍存溶液中，混勻后將所述 待保藏絲狀真菌菌種凍存。
[0018] 其中，該凍存方法中涉及的固體培養基平板制備、滅菌、菌種接種、菌種培養、菌種 凍存等均采用本技術領域常規操作，本文不再贅述。
[0019] 在本實用新型優選的實施方案中，在上述步驟c中，所述空心罩與所述待保藏絲 狀真菌接種點的距離為0. 3cm~I. 0cm。
[0020] 在本實用新型優選的實施方案中，步驟e中轉移的所述長有所述待保藏絲狀真菌 的空心罩的數量為4-6個。
[0021] 當凍存的絲狀真菌需要進行復蘇時，按照常規操作復蘇菌種后直接取出所述空心 罩接種至相應的培養基即可。
[0022] 與現有技術相比，本實用新型的有益效果在于：
[0023] 1、本實用新型的用于凍存固體培養絲狀真菌的所述空心罩3的罩面32上布滿的 棘刺31既能夠起到附著菌絲的作用，又能起到轉移菌絲的作用，可直接用于菌種的液體凍 存，不需要劃取或挑取菌塊以及制備菌懸液等操作，有效避免了凍存時菌塊對固體培養基 的攜帶和制備菌懸液可能帶來的污染。
[0024] 2、本實用新型的用于凍存固體培養絲狀真菌的所述空心罩3由樹脂材料制成，可 以直接進行高溫滅菌，且可以反復使用，環保價廉。
[0025] 3、本實用新型的凍存方法具有操作方便、成本低廉且能夠滿足特殊培養要求的優 點，為絲狀真菌的保藏提供技術支持。
【附圖說明】
[0026] 圖1為本實用新型的用于凍存固體培養絲狀真菌的空心罩的結構示意圖。
[0027] 圖2為絲狀真菌在固體培養基上與所述空心罩共培養的示意圖。
[0028] 其中，各附圖標記具有以下含義：
[0029] 1-固體培養基；2-待保藏絲狀真菌接種點；3-空心罩；4-平板；31-棘刺；32-罩 面；33-空心；34-底部。
【具體實施方式】
[0030] 以下結合附圖和具體實施例進一步說明本實用新型的內容，但不應理解為對本實 用新型的限制。在不背離本實用新型精神和實質的情況下，對本實用新型方法、步驟或條件 所作的修改或替換，均屬于本實用新型的范圍。
[0031] 實施例1 :黃曲霉的凍存
[0032] 1.配制沙氏葡萄糖瓊脂培養基，高溫高壓滅菌后在超凈工作臺內倒入適量上述培 養基至無菌平板中，待其自然冷卻，得到沙氏葡萄糖瓊脂培養基固體平板；
[0033] 2.從凍存管或固體培養基平板上接種黃曲霉至所述沙氏葡萄糖瓊脂培養基固體 平板上；
[0034] 3.用鑷子將滅菌后的所述空心罩放置于黃曲霉接種點的周圍，得到共培養平 板（如圖2所示）；其中所述空心罩直徑4_，所述空心罩與所述黃曲霉接種點的距離為 1.0 cm ;其中，所使用的空心罩3如圖1所示，其為半球狀空心罩，其由樹脂材料制成，其底部 34為一平面且其內部具有與所述底部34連通的空心33,其罩面32上布有棘刺31。
[0035] 4.將所述共培養平板放置于26°C恒溫培養箱內培養3天~5天，至菌絲生長覆蓋 至所述空心罩罩面上的棘刺，得到覆蓋有菌絲的空心罩；
[0036] 5.吸取ImL 15% (v/v)甘油凍存液加入凍存管內，然后用無菌鑷子取4個~6個 所述覆蓋有菌絲的空心罩放入凍存液內；
[0037] 6.蓋上所述凍存管的管蓋，輕輕混勻數次后將所述凍存管放入程序降溫盒內，進 行后續的凍存操作完成菌種的凍存。
[0038] 實施例2 :淡紫擬青霉的凍存
[0039] 1.配制馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基，高溫高壓滅菌后在超凈工作臺內倒入適量上述 培養基至無菌平板中，待其自然冷卻，得到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基固體平板；
[0040] 2.從凍存管或固體培養基平板上接種淡紫擬青霉至所述馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養 基固體平板上；
[0041] 3.用鑷子將滅菌后的所述空心罩放置于淡紫擬青霉接種點的周圍，得到共培養平 板；其中所述空心罩直徑3mm，所述空心罩與所述淡紫擬青霉接種點的距離為0. 5cm ;
[0042] 4.將所述共培養平板放置于26°C恒溫培養箱內培養3天~5天，至菌絲生長覆蓋 至所述空心罩罩面上的棘刺空，得到覆蓋有菌絲的空心罩；
[0043] 5.將ImL 15% (v/v)甘油凍存液加入凍存管內，然后用無菌鑷子取4個~6個所 述覆蓋有菌絲的空心罩放入凍存液內；
[0044] 6.蓋上所述凍存管的管蓋，輕輕混勻數次后將所述凍存管放入程序降溫盒內，進 行后續的凍存操作完成菌種的凍存。
[0045] 其中，本實用新型實施例中涉及的黃曲霉（Aspergillus flavus)和淡紫擬青霉 (Paecilomyces Iilacinus)為常見的絲狀真菌，能夠從國內外的菌種保藏機構購買得到。
【主權項】
1. 一種用于凍存固體培養絲狀真菌的空心罩（3)，其特征在于，其底部（34)為一平面 且其內部具有與所述底部（34)連通的空心（33)。2. 根據權利要求1所述的空心罩，其特征在于，其為半球狀空心罩、圓臺狀空心罩、圓 柱狀空心罩、圓錐狀空心罩或長方體狀空心罩。3. 根據權利要求1或2所述的空心罩，其特征在于，所述空心罩的罩面（32)上布有棘 刺（31)〇4. 根據權利要求3所述的空心罩，其特征在于，所述棘刺（31)的長度為lmm-4mm。5. 根據權利要求1所述的空心罩，其特征在于，所述空心罩（3)的直徑在3mm~6mm之 間。
【專利摘要】本實用新型涉及一種用于凍存固體培養絲狀真菌的空心罩及凍存方法，屬菌種保藏技術研究領域。本實用新型是在現有固體培養絲狀真菌的凍存方法基礎上的改進。改進點在于：采用直徑大小在3mm～6mm之間、罩面布滿棘刺的空心罩與待保藏絲狀真菌在固體培養基表面共培養，至絲狀真菌生長覆蓋空心罩的罩面，將覆蓋待保藏絲狀真菌的空心罩移至凍存液中完成菌種凍存。本實用新型的罩面布滿棘刺的空心罩按常規方法用樹脂材料制成。本實用新型的有益效果在于：有效避免了菌塊對固體培養基的攜帶和制備菌懸液可能帶來的污染，具有操作方便，成本低廉，且能夠滿足特殊培養要求的優點，為絲狀真菌的保藏提供技術支持。
【IPC分類】C12M1/00, C12N1/14
【公開號】CN204918558
【申請號】CN201520531639
【發明人】米其利, 李雪梅, 桂永發, 管瑩, 朱洲海, 夭建華, 樓牧夢, 高茜, 陳建華
【申請人】云南中煙工業有限責任公司
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年7月21日