構（實施例1)。
[0026]圖2HPLC-MS/MS檢測exosome相關蛋白：3批樣本中分別含有197、180、279種蛋白，其中三樣本共同含有96種蛋白，包括CD9、CD81、Alix、⑶44、CD29 (實施例1)。
[0027]圖3實施例2中治療組與損傷對照組小鼠激光損傷后第1、3、7、14,21,40和60天ERG明暗適應a波與b波振幅。其中，A圖：暗適應a波振幅（各時間點p值均〈0. 05)B圖：暗適應b波振幅（各時間點p值均〈0. 05) C圖：明適應a波振幅（第14、21和60天，p值〈0. 05)D圖：明適應b波振幅（除第3天外，p值均〈0. 05)。
[0028]圖4實施例2中激光損傷后第1、3、7、14天損傷對照組（A、B、C、D)與治療組（E、F、G、H)視網膜組織學切片HE染色X20。第1天可見視網膜全層隆起，損傷部位組織增厚，結構紊亂。第3天可見外核層出現缺損區域，大量炎癥細胞浸潤。第7天可見內核層及色素上皮層細胞向外核層迀移。第14天可見激光斑形態趨于穩定。各個時間點，組織完整性治療組均優于損傷對照組。
[0029]圖5實施例2中激光斑參數測量結果的統計結果：激光斑直徑㈧及外核層完全缺損區直徑（B)治療組與損傷對照組第3、7和14天均有統計學差異（p〈0. 05)。
[0030]圖6實施例2中激光損傷后第1、3、7和14天治療組和損傷對照組TUNEL染色結果X20。4個時間點治療組凋亡細胞少于損傷對照組。
[0031 ] 圖7實施例2中激光斑周圍凋亡細胞數統計結果：激光損傷后第1、3、7和14天治療組與損傷對照組凋亡細胞數差異有統計學意義（P值均〈0. 05)。
[0032]圖8實施例3中不同時間點exosome治療組與對照組炎癥反應臨床評分比較結果Ο
[0033]圖9實施例3中視網膜石蠟切片HE染色：其中A、對照組第15天，表現為炎性細胞浸潤，光感受器層嚴重受損，各層均有不同程度的變性、不規整。B、治療組第15天，視網膜不規整程度較輕。C、對照組第21天，炎性細胞減少，可見光感受器層破壞灶。D、治療組第21天，網膜受損輕微，接近于正常。
[0034]圖10實施例3中造模后第15及21天組織病理學評分，從圖10可以看出，治療組顯著低于模型對照組。
[0035]圖11實施例3中免疫組織化學染色法檢測視網膜⑶68的表達：A、對照組第15天，⑶68大量陽性表達可見巨噬細胞侵潤破壞視網膜全層。B、治療組第15天，⑶68在外核層少量陽性表達，視網膜結構損傷較輕。C、對照組第21天，⑶68在光感受器層有少量陽性表達。D、治療組第21天，⑶68陽性表達較少，視網膜較完整。
[0036]圖12實施例3中免疫組織化學染色法檢測視網膜iNOS的表達：A、對照組第15天，可見視網膜各層尤其內核層iNOS高度表達。B、治療組第15天，iNOS表達較少。C、對照組第21天，在光感受器層仍可見陽性表達，但較第15天顏色較淺。D、治療組第21天，iNOS微量表達，網膜接近于正常。
[0037]圖13實施例3中流式細胞儀檢測對照組與exosome治療組眼部⑶4+T細胞亞群比例：CD4+T細胞、IFN- γ +CD4+T細胞、IL-17+CD4+T細胞和Foxp3+CD4+T細胞在眼部細胞中的比例。治療組CD4+T細胞浸潤減少、IFN- γ +CD4+T細胞、IL-17+CD4+T細胞和Foxp3+CD4+T細胞比例減少。
[0038]圖14實施例3中在免疫后第12天、第15天和第21天對各組大鼠進行視網膜視覺電生理檢測，暗適應3. 0a波與b波治療組振幅明顯高于對照組，差異有統計學意義（a波t = 3. 938、2· 726、3· 201，Ρ〈0· 05，b 波 t = 8· 942、8· 161、9· 086，Ρ〈0· 05)。明適應 3. 0a 波在第15天和21天治療組與對照組差異有統計學意義（t = 5. 426、2. 463，P〈0. 05)，明適應3. 0b波在第15天治療組與對照組差異有統計學意義（t = 4. 466，P〈0. 05)
[0039]圖15實施例4中治療組與損傷對照組小鼠視網膜脫離后第1、3、7、14和28天ERG暗適應a波與b波振幅。A圖：暗適應0. 01a波振幅（各時間點p值均〈0. 05) B圖：暗適應0. 01b波振幅（除第28天，其余各時間點P值均〈0. 05) C圖：暗適應3. 0a波振幅（除第3天，其余各時間點P值〈0. 05) D圖：暗適應3. 0b波振幅（各時間點P值均〈0. 05)。
[0040]圖16實施例4中網脫損傷后第1、3、7、14、28天損傷對照組（A、C、E、G、I)與治療組（B、D、F、H、J)視網膜組織學切片HE染色X20。第1天可見網膜全層組織無明顯變化，RPE層顯著脫離。第3天可見網脫處外核層水腫明顯，少量炎癥細胞浸潤。第7天可見外核層細胞水腫減輕，但內核層細胞數量及層數明顯變少。第14天可見RPE重新貼附于神經上皮層，炎癥反應幾乎消失，組織形態趨于穩定。第28天可見對照組外核層內核層細胞排列紊亂，治療組各層細胞排列較為整齊，輕度水腫。各個時間點，組織完整性治療組均優于損傷對照組。
[0041 ] 圖17實施例4中免疫組織化學染色GFAP :A，對照組第7天，GFAP陽性表達于視網膜各層，視網膜各層水腫程度較嚴重。B，治療組第7天，GFAP陽性表達較對照組顯著減少，各層視網膜結構破壞。C，對照組第14天，GFAP少量陽性表達于外核層，內核層。D，治療組第14天，GFAP僅極少量表達于內核層，各層細胞結構穩定。
【具體實施方式】
[0042]下面結合具體實施例對本發明作進一步說明。
[0043]實施例1 :
[0044]人臍帶間充質干細胞（humanumbilical cordmesenchymal stem cell，hucMSC)來源的外泌體（exosome)的分離純化和鑒定
[0045]1.人臍帶間充質干細胞來源的外泌體的分離純化方法，包括如下步驟：
[0046](1)人臍帶間充質干細胞的分離培養：取無菌新生兒新鮮臍帶，經磷酸鹽緩沖液(PBS)反復沖洗后，剪成直徑約l_2mm的組織塊；經2型膠原酶和胰酶消化依次后，將上清液離心，取細胞沉淀放入培養瓶，使用含10%胎牛血清DMEM/F12培養基，5% C02、37°C飽和濕度培養；去除非貼壁細胞，在貼壁細胞80%融合后0. 25%胰蛋白酶消化進行傳代培養；
[0047](2)間充質干細胞條件培養基的收集：取3-5代的間充質干細胞無血清培養48h ;收集培養上清液；0. 22 μ m無菌膜過濾得到間充質干細胞條件培養基；
[0048](3) exosome分離純化包括：收集過濾的間充質干細胞條件培養基4°C，1000g離心lOmin，收集上清；收集的上清液4°C，2000g離心20min，收集上清；收集的上清液4°C，10000g離心30min，收集上清；收集的上清液，110000g離心70min，棄上清，使用磷酸鹽緩沖液重懸沉淀；再次110000g離心70min，棄上清，少量磷酸鹽緩沖液重懸沉淀，0. 22 μ m濾膜過濾除菌，得到人臍帶間充質干細胞來源的外泌體（hucMSC-exosome)。
[0049]2. hucMSC-exosome 的鑒定
[0050](1)掃描電鏡觀察exosome的一般形態：取懸置均勾的exosome溶液，樣品經脫水、干燥、粘樣、導電處理，在掃描電鏡下觀察微粒形態，并拍攝電鏡照片，隨機選取20個exosome，根據標尺記錄其直徑。掃描電鏡下觀察，可見exosome直徑約為50?100