腫瘤壞死因子抑制多肽及其應用
【技術領域】：
[0001] 本發明涉及藥物領域，具體涉及用于預防和治療或預防類風濕性關節炎的腫瘤壞 死因子抑制多肽。
【背景技術】：
[0002] 類風濕關節炎（rheumatoidarthritis，RA)是臨床最常見的炎性關節病和主要致 殘因素之一。在全世界約為0.5%-1.0%，RA的發病在我國約為0.4%。RA可發生于任何 年齡，隨著年齡的增長，發病率也隨之增高。女性高發年齡為45-55歲，性別與RA發病關系 密切，男女之比約1: 3。RA是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對稱性、 多滑膜關節炎和關節外病變為主要臨床表現，屬于自身免疫炎性疾病。患者常以手部或腕 部疼痛及腫脹（特別是腕背部的腫脹）為首發癥狀，癥狀持續不緩解，普通的對癥治療雖可 以緩解癥狀，但常常由于用藥不規則或不足量而導致癥狀反復。病情進展時可以出現明顯 的晨僵，通常可達1小時以上，并不斷加重；同時出現一定的關節功能障礙。
[0003]TNF是一種在炎癥和免疫應答中自然出現的細胞因子。研究發現在RA患者的滑膜 液中，TNF水平升高，并在病理性炎癥和關節破壞方面起重要作用。目前治療類風濕關節炎 的生物藥物有阿達木單抗，是TNF-a的單克隆抗體。臨床研究表明阿達木單抗與甲氨蝶呤 合用，用于治療：對改善病情抗風濕藥（DMARDs)，包括甲氨蝶呤療效不佳的成年中重度活 動性類風濕關節炎患者。阿達木單抗與甲氨蝶呤聯合用藥，可以減緩患者關節損傷的進展 (X線顯示），并且可以改善身體機能。與傳統的藥物相比，這類藥物的療效強且持久，能有 效緩解疾病癥狀、影像學進展及功能水平，且安全性良好，適用于各種類風濕關節炎患者。 但是有阿達木單抗是大分子蛋白質。長期注射治療，一方面會引起過敏反應；另一方面，患 者體內會產生大量抗體，會中和阿達木單抗的作用，導致治療無效。
[0004] 小分子蛋白質或多肽就不容易誘發免疫變態反應，以及中和反應。因此，小分子TNF抑制多肽就能解決這一問題。
【發明內容】
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[0005] 本發明目的是針對現有TNF拮抗劑的特點，設計一種分子量小的TNF多肽拮抗劑， 可以避免產生抗原反應，更加適用于臨床的應用。
[0006] 本發明技術方案是提供一種腫瘤壞死因子抑制多肽，其序列為 RINDISHTQSVSSKQKVTG，及在治療或預防類風濕性關節炎藥物中的應用。可通過多種給藥方 式治療和預防類風濕關節炎疾病，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥 如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。
[0007] 有益結果：
[0008] 本發明中的腫瘤壞死因子抑制多肽序列RINDISHTQSVSSKQKVTG，可以靶向抑制TNF，抑制腫瘤壞死因子受體產生的生理或病理的效應，達到預防或治療類風濕性關節炎的 效果。
[0009] 發明人經過大量實驗獲知腫瘤壞死因子抑制多肽能夠抑制佐劑型大鼠類風濕關 節炎和DBA/1小鼠膠原型類風濕性關節炎的發展，體內實驗證明具有顯著的治療類風濕型 關節炎的效果。說明本發明設計的腫瘤壞死因子抑制多肽科學、合理、可行、有效，能作為治 療或預防類風濕性關節炎藥物。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1
[0011] 腫瘤壞死因子抑制多肽在膠原誘導小鼠關節炎動物模型體內免疫保護作用
[0012] 構建膠原型小鼠關節炎動物模型，研究腫瘤壞死因子抑制多肽對小鼠膠原誘導性 關節炎（collageninducedarthritis，CIA)的治療作用。采用小鼠作為受試動物，SPF 級DBA/1小鼠60只（由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司（Sino-BritishSIPPRLab. AnimalLtd)提供，動物生產許可證號碼：SCXK(滬）2008-0016)，雄性，7-8周齡，體重為 18-22g，隨機分成6組，分別是正常對照組，模型對照組，多肽低中高3個劑量組（0. 4,0. 8， 1.6mg/kg)和陽性藥對照組（甲氨蝶呤2mg/kg)。除正常組外，第0天各實驗組建立小鼠 CIA模型，方法是雞軟骨II型膠原（cII)用0.lmol/1醋酸溶解成4mg/ml的溶液，于4°C冰 箱過夜。實驗當天用II型膠原與含4mg/mlMyeobaeteriumtuberculosisstrainH37Rv的 完全弗氏佐劑（CFA)等體積充分乳化，待DBA/1小鼠麻醉后，于其尾部皮內每只注射乳化劑 50y1進行致敏，21d后用4mg/ml的II型膠原（cII)與不完全弗氏佐劑（IFA)等體積充分 乳化后以相同劑量的乳化劑于尾部進行再次免疫。造模第30d起皮下注射給藥：多肽的3 個劑量組（〇. 4,0. 8,1. 6mg/kg):每日兩次，連續10天；陽性藥對照組（甲氨蝶呤2mg/kg): 每五天一次，連續3次；正常對照組和模型對照組（生理鹽水）：連續10天。分別于造模后 第40天關節評分、分別檢測左右后足足踝直徑來觀察藥物對小鼠膠原型關節炎的影響。
[0013] 腫瘤壞死因子抑制多肽在膠原誘導小鼠關節炎動物模型體內免疫保護作用具體 結果如下：腫瘤壞死因子抑制多肽對小鼠膠原型關節炎關節腫脹度率的影響，陽性對照組、 腫瘤壞死因子抑制多肽高、中、低劑量組關節腫脹度率與模型組比較，均有極顯著性差異 (P〈0. 01)實驗結果具有統計學意義。腫瘤壞死因子抑制多肽對小鼠膠原型關節炎足爪腫脹 度率的影響，陽性對照組、腫瘤壞死因子抑制多肽高、中、低劑量組足爪腫脹度率與模型組 比較，均有極顯著性差異（P〈〇. 01)，實驗結果具有統計學意義。多肽對膠原型關節炎小鼠關 節評分的影響，多肽低、中、高劑量組四肢評分顯著低于模型對照組（P< 0.01)，與模型對 照組比較極顯著性差異，實驗結果具有統計學意義。
[0014] 表1腫瘤壞死因子抑制多肽對膠原型關節炎的影響（means土SD)
[0015] ? *P〈0. 05 ;#P〈0. 01 (和模型組比較）
[0016]
[0017] 結論：腫瘤壞死因子抑制多肽對小鼠膠原型關節炎具有治療作用。
[0018] 實施例2
[0019] 腫瘤壞死因子抑制多肽對佐劑型大鼠關節炎動物模型體內免疫保護作用
[0020] 構建佐劑型大鼠關節炎動物模型，研究多肽對佐劑性關節炎（Adjuvant arthritis，AA)大鼠的治療作用。采用大鼠作為受試動物，SPF級SD大鼠60只（由上海西 普爾-必凱實驗動物有限公司（Sino-BritishSIPPRLab.AnimalLtd)提供，動物生產許 可證號碼：SCXK(滬）2008-0016)，雄性，體重為140g-160g，隨機分成6組，分別是正常對照 組，模型對照組，腫瘤壞死因子抑制多肽低中高3個劑量組（0. 2,0. 4,0. 8mg/kg)和陽性藥 對照組（甲氨蝶呤lmg/kg)。除正常組外，第0天各實驗組建立大鼠AA模型，方法是在大鼠 的左側后足足跎注射含滅活的結核分枝桿菌（H37RA，10mg/ml)完全弗氏佐劑0.lml造成大 鼠佐劑性關節炎模型。造模第10天起皮下注射給藥：多肽的3個劑量組（0. 2,0. 4,0. 8mg/ kg):每日兩次，連續10天；陽性藥對照組（甲氨蝶呤lmg/kg):每五天一次，連續3次；正常 對照組和模型對照組（生理鹽水）：連續10天。分別于造模后第21天關節評分、分別檢測 左右后足足踝直徑來觀察藥物對大鼠佐劑型關節炎的影響。
[0021] 多肽在佐劑性大鼠關節炎動物模型體內免疫保護作用，具體結果如下：腫瘤壞死 因子抑制多肽對大鼠原發性關節炎左后足踝直徑的影響，大鼠陽性對照組、腫瘤壞死因子 抑制多肽的低、中、高劑量組左后足踝直徑與模型組比較，有極顯著性差異（P〈〇. 01);腫瘤 壞死因子抑制多肽對大鼠繼發性關節炎右后足踝直徑的影響，大鼠陽性對照組、腫瘤壞死 因子抑制多肽低、中、高劑量組右后足踝直徑與模型組比較，有顯著性差異（P〈〇. 05)。腫瘤 壞死因子抑制多肽對佐劑型關節炎大鼠關節評分的影響，多肽低、中、高劑量組四肢評分顯 著低于模型對照組（P< 〇. 05)，與模型對照組比較差異均有統計學意義。
[0022] 表2腫瘤壞死因子抑制多肽對佐劑型關節炎的影響（means土SD)
[0023]
[0025] ? *P〈0. 〇5 ;林P〈0. 01 (和模型組比較）
[0026] 結論：腫瘤壞死因子抑制多肽對AA大鼠關節炎具有治療作用。
【主權項】
1. 腫瘤壞死因子抑制多肽，其特征在于其序列為RINDISHTQSVSSKQKVTG。2. 權利要求1的抑制多肽在治療和預防類風濕關節炎疾病中的應用。3. 根據權利要求1-2任一所述抑制多肽的用途，其特征在于：可通過多種給藥方式治 療和預防類風濕關節炎疾病，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥 丸、膠囊等，鼻噴劑等。
【專利摘要】本發明涉及藥物領域，具體涉及具有抑制腫瘤壞死因子，能預防和治療類風濕性關節炎的多肽。其序列為RINDISHTQSVSSKQKVTG是全新的序列，本發明的有益效益是可用于治療類風濕性關節炎，具有潛在的新藥開發價值。
【IPC分類】A61K38/10, C07K7/08, A61P29/00, A61P19/02
【公開號】CN105111284
【申請號】CN201510563846
【發明人】羅瑞雪
【申請人】蘇州普羅達生物科技有限公司
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年9月8日