Cik細胞培養方法及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種CIK細胞培養方法及其應用，所述CIK細胞培養方法包括步驟：A）取外周血，并分離外周血單個核細胞；B）將單個核細胞接種到培養裝置中進行培養，對培養單個核細胞的培養液中加入細胞因子；C）培養14-28天，收獲CIK細胞。本發明用采用少因子體系進行CIK細胞培養，細胞擴增比例達到使用傳統擴增方法所獲得的比例，且因子的使用量較小，降低了細胞培養成本，增加了培養效果的穩定性。
【專利說明】CIK細胞培養方法及其應用
[0001]
【技術領域】
[0002]本發明屬于細胞培養領域，尤其是涉及一種CIK細胞培養方法及其應用。
【背景技術】
[0003]隨著腫瘤免疫 學的發展，越來越多的研究表明，殺傷細胞過繼免疫治療對于消除殘留的腫瘤病灶、促進患者免疫系統的重建具有良好的效果，并逐步成為化學治療和造血干細胞移植后清除殘留腫瘤細胞的重要治療手段。CIK細胞主要表達⑶3 +和⑶56 +表面分子，通過穿孔素和顆粒酶介導的細胞毒作用和增強IL-12、INF-y等細胞因子的作用來殺傷腫瘤細胞，在腫瘤發生、轉移和監視中顯示出重要的抗腫瘤和排斥腫瘤細胞的作用；經典的CIK細胞培養方法需要通過多種細胞因子的共同培養誘導，如IFN- Y、IL-2、抗⑶3Ab和IL-1 α等。
[0004]CIK細胞是一群來源于血液T細胞的異質性細胞群體，通過穿孔素和顆粒酶介導的細胞毒作用和增強IL-12、INF-y等細胞因子的作用來殺傷腫瘤細胞，⑶3 +⑶56 +細胞是其中主要的效應細胞。
[0005]Schmidt 于 1991 年建立的由 IL-1、IL-2、IFN-Y、Anti_CD3Ab 等細胞因子組成的“經典”的CIK擴增方案目前已被全球眾多的研究者所采納。近年以此為基礎，一些其他的細胞因子也開始被嘗試用于擴增CIK細胞，如Ant1-CD28、IL-15、IL-24、SCF、FLT3L等。
[0006]多因子的培養體系會增加免疫細胞過繼治療的費用，增大培養誘導過程中潛在的污染風險，同時也因為多種因子的使用使得培養效果可重復性和穩定性降低，因此探索建立有效的少因子CIK細胞培養體系十分必要。
[0007]
【發明內容】
[0008]本發明的目的在于提供一種少因子CIK細胞培養體系。
[0009]本發明采用的技術方案為:
一種CIK細胞培養方法，包括步驟:
A)取外周血，并分離外周血單個核細胞；
B)將單個核細胞接種到培養裝置中進行培養，對培養單個核細胞的培養液中加入細胞因子；
C)培養14-28天，收獲CIK細胞。
[0010]本發明用采用少因子體系進行CIK細胞培養，細胞擴增比例達到使用傳統擴增方法所獲得的比例，且因子的使用量較小，降低了細胞培養成本，增加了培養效果的穩定性。
[0011]【專利附圖】
【附圖說明】
[0012]圖1為實施例中不同細胞因子組合的CIK細胞集落形成圖。
[0013]
【具體實施方式】
[0014]下面結合具體實施例和附圖，對本發明作進一步詳細說明。
[0015]實施例1細胞培養
外周血用含肝素抗凝劑的無菌干燥瓶收集，采血量為50mL，4h內分選。采用Ficoll-Hypaque法分離單個核細胞，以IX IO6Cell /孔接種于24孔培養板,每孔終體積ImL(含150mL / LFCS、青一鏈霉素50U / mL的IMDM);根據因子培養體系的不同分組(共分6組，A組一 F組，每組6個重復孔)按本實驗室方法培養。開始每孔分別加入IL-2(80ng /mL)、IL-7 (40ng / mL)及 IL-12 (40ng / mL)的單因子組合(A 組:IL_7 ;B 組:(IL-12)、雙因子組合(C組:IL-7 + IL-12 ；D組:IL_2 + IL-7 ；E組:IL_2 + IL-12)和三因子組合(F組:IL-2 + IL-7 + IL-12)，詳見表1。在37°C，體積分數5% C02及飽和濕度的條件下培養，每隔3d半量換液及全量補充上述細胞因子，共培養21d收獲細胞。
[0016]表1各實驗組加入細胞因子的種類和濃度(ng / ml)
【權利要求】
1.一種CIK細胞培養方法，包括步驟: A)取外周血，并分離外周血單個核細胞； B)將單個核細胞接種到培養裝置中進行培養，對培養單個核細胞的培養液中加入細胞因子； C)培養14-28天，收獲CIK細胞。
2.如權利要求1所述的CIK細胞培養方法，其特征是:所述B)步驟中，加入的細胞因子為:IL-2，或者為IL-7，或者為IL-12，或者為IL_2、IL_7、IL-12中的兩種或者三種的組合。
3.如權利要求2所述的CIK細胞培養方法，其特征是:所述細胞因子的加入量為:IL-280ng / mL, IL-740ng / mL, IL-1240ng / mL。
4.如權利要求1所述的CIK細胞培養方法，其特征是:在培養過程中，每隔2-3天，半量換培養液及全量補充上述細胞因子。
5.一種生物制品，包括權利要求1-4任一項所述的CIK細胞培養方法制備得來的CIK細胞。·
【文檔編號】C12N5/0783GK103710307SQ201310693544
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月16日 優先權日:2013年12月16日
【發明者】姜舒, 羅朝霞, 劉穎斐, 楊順, 魏明軍 申請人:深圳市茵冠生物科技有限公司