專利名稱：一種便于使用的抗草甘膦轉基因大豆pcr-elisa檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種試劑盒，具體涉及一種用于抗草甘膦轉基因大豆PCR-ELISA檢測的試劑盒。
背景技術：
目前在對轉基因大豆進行轉基因定性檢測的過程中，需要對試劑進行提前的配制，費時、費力。且進行轉基因定性檢測所使用的試劑大部分都需要低溫保存，因此在使用時需要取冰盒，將試劑放置在冰上，以防止試劑失效。但每次使用都要另取冰盒，較為繁瑣。
實用新型內容本實用新型是要解決進行抗草甘膦轉基因大豆PCR-ELISA檢測過程復雜、繁瑣的問題，提供一種便于使用的抗草甘膦轉基因大豆PCR-ELISA檢測試劑盒。本實用新型便于使用的抗草甘膦轉基因大豆PCR-ELISA檢測試劑盒包括PCR預混液試劑瓶、上游引物試劑瓶、下游引物試劑瓶、陽性對照試劑瓶、陰性對照試劑瓶、鏈霉親和素試劑瓶、牛血清白蛋白試劑瓶、探針試劑瓶、超純水試劑瓶、變性溶液試劑瓶、PBST緩沖液試劑瓶、雜交液試劑瓶、碳酸鹽緩沖液試劑瓶、TBTS緩沖液試劑瓶、發色底物試劑瓶、終止液試劑瓶、外盒體和內盒體，所述內盒體為中空結構，內盒體的上表面設有十六個凹槽，十六個凹槽呈矩形設置，PCR預混液試劑瓶、上游引物試劑瓶、下游引物試劑瓶、陽性對照試劑瓶、陰性對照試劑瓶、鏈霉親和素試劑瓶、牛血清白蛋白試劑瓶、探針試劑瓶、超純水試劑瓶、變性溶液試劑瓶、PBST緩沖液試劑瓶、雜交液試劑瓶、碳酸鹽緩沖液試劑瓶、TBTS緩沖液試劑瓶、發色底物試劑瓶和終止液試劑瓶的底部分別各對應插裝在凹槽內。本實用新型與現有技術相比具有以下效果:本實用新型的內盒體的空腔內可裝入水、碎冰或冰袋，若裝入水，冷凍后內盒體的空腔內即為冰，這樣試劑瓶放入試劑盒中即可保持低溫，將本實用新型的試劑盒于室溫下使用則無需另取冰盒，省時、省事；使用本實用新型進行抗草甘膦轉基因大豆PCR-ELISA檢測實驗，操作簡便快捷、實驗效率高、結果穩定；本實用新型結構簡單、成本低，適于實驗室中使用。
圖1為本實用新型的整體結構示意圖；圖2為內盒體上表面的俯視圖；圖3為圖2中A-A方向的剖面圖。
具體實施方式
具體實施方式
一:結合圖1、圖2和圖3說明本實施方式，本實施方式便于使用的抗草甘膦轉基因大豆PCR-ELISA檢測試劑盒包括PCR預混液試劑瓶1、上游引物試劑瓶2、下游引物試劑瓶3、陽性對照試劑瓶4、陰性對照試劑瓶5、鏈霉親和素試劑瓶6、牛血清白蛋白試劑瓶7、探針試劑瓶8、超純水試劑瓶9、變性溶液試劑瓶10、PBST緩沖液試劑瓶11、雜交液試劑瓶12、碳酸鹽緩沖液試劑瓶13、TBTS緩沖液試劑瓶14、發色底物試劑瓶15、終止液試劑瓶16、外盒體17和內盒體18，所述內盒體18為中空結構，內盒體18的上表面設有十六個凹槽18-1，十六個凹槽18-1呈矩形設置，PCR預混液試劑瓶1、上游引物試劑瓶2、下游引物試劑瓶3、陽性對照試劑瓶4、陰性對照試劑瓶5、鏈霉親和素試劑瓶6、牛血清白蛋白試劑瓶7、探針試劑瓶8、超純水試劑瓶9、變性溶液試劑瓶10、PBST緩沖液試劑瓶11、雜交液試劑瓶12、碳酸鹽緩沖液試劑瓶13、TBTS緩沖液試劑瓶14、發色底物試劑瓶15和終止液試劑瓶16的底部分別各對應插裝在凹槽18-1內。
具體實施方式
二:本實施方式所述內盒體的上表面凹槽18-1的深度小于試劑瓶的高度。其它組成和連接關系與具體實施方式
一相同。工作原理: 利用本實用新型進行抗草甘膦轉基因大豆PCR-ELISA檢測實驗的操作步驟如下:步驟一、向每個反應管中加入I μ L上游引物試劑瓶2的溶液、I μ L下游引物試劑瓶3的溶液、IOyL PCR預混液試劑瓶I的溶液、1.5 μ L模板DNA和36.5 μ L超純水試劑瓶9的溶液；向陽性對照反應管中加入I μ L上游引物試劑瓶2的溶液、I μ L下游引物試劑瓶3的溶液、10 μ L PCR預混液試劑瓶I的溶液、1.5 μ L陽性對照試劑瓶4的溶液和36.5 μ L超純水試劑瓶9的溶液；向陰性對照反應管中加入I μ L上游引物試劑瓶2的溶液、I μ L下游引物試劑瓶3的溶液、10 μ L PCR預混液試劑瓶I的溶液、1.5 μ L陰性對照試劑瓶5的溶液和36.5 μ L超純水試劑瓶9的溶液；步驟二、將反應管放入PCR儀中進行反應，反應條件為:預變性95°C 3min，變性95°C 30sec，退火 58°C 30sec,延伸 72°C 30sec，共 35 個循環，后延伸 72°C 3min, 4°C保溫，獲得PCR產物；步驟三、將鏈霉親和素試劑瓶6的溶液用碳酸鹽緩沖液試劑瓶13的溶液至IOmg/L,包被酶標板，100 μ L/孔，4°C過夜，第二天用TBTS緩沖液試劑瓶14的溶液洗三次，用牛血清白蛋白試劑瓶7的溶液封閉酶標板，37°C孵育2h ；步驟四、用TBTS緩沖液試劑瓶14的溶液稀釋PCR產物，然后取80 μ L加入微孔板中，37°C孵育lh，再用TBTS緩沖液試劑瓶14的溶液洗滌4次，微孔板中加入80 μ L變性溶液試劑瓶10的溶液，室溫變性15min，然后用PBST緩沖液試劑瓶11的溶液洗滌4次；步驟五、將50 μ L探針試劑瓶8的溶液和50 μ L雜交液試劑瓶12的溶液混合，在酶標板中探針和雜交液的混合溶液，雜交溫度50°C，時間為lOmin，雜交后用TBTS緩沖液試劑瓶14的溶液洗酶標板3次；步驟六、用TBS稀釋的堿性磷酸酶標記抗地高辛抗體，每孔加入100 μ L, 37V反應45min，用TBTS緩沖液試劑瓶14的溶液洗酶標板3次，加入100 μ L發色底物試劑瓶15的溶液于37°C顯色，加入50 μ L終止液試劑瓶16的溶液；步驟七、用酶標儀測定OD值，觀察結果。
權利要求1.一種便于使用的抗草甘膦轉基因大豆PCR-ELISA檢測試劑盒，其特征在于該試劑盒包括PCR預混液試劑瓶(I)、上游引物試劑瓶(2)、下游引物試劑瓶(3)、陽性對照試劑瓶(4)、陰性對照試劑瓶(5)、鏈霉親和素試劑瓶￠)、牛血清白蛋白試劑瓶(7)、探針試劑瓶(8)、超純水試劑瓶(9)、變性溶液試劑瓶(10)、PBST緩沖液試劑瓶(11)、雜交液試劑瓶(12)、碳酸鹽緩沖液試劑瓶(13)、TBTS緩沖液試劑瓶(14)、發色底物試劑瓶(15)、終止液試劑瓶(16)、外盒體(17)和內盒體(18)，所述內盒體(18)為中空結構，內盒體(18)的上表面設有十六個凹槽(18-1)，十六個凹槽(18-1)呈矩形設置，PCR預混液試劑瓶(I)、上游引物試劑瓶(2)、下游引物試劑瓶(3)、陽性對照試劑瓶(4)、陰性對照試劑瓶(5)、鏈霉親和素試劑瓶(6)、牛血清白蛋白試劑瓶(7)、探針試劑瓶(8)、超純水試劑瓶(9)、變性溶液試劑瓶(10)、PBST緩沖液試劑瓶(11)、雜交液試劑瓶(12)、碳酸鹽緩沖液試劑瓶(13)、TBTS緩沖液試劑瓶(14)、發色底物試劑瓶(15)和終止液試劑瓶(16)的底部分別各對應插裝在凹槽(18-1)內。
2.根據權利要求1所述的一種便于使用的抗草甘膦轉基因大豆PCR-ELISA檢測試劑盒，其特征在于所述內盒體的上表面凹槽(18-1)的深度小于試劑瓶的高度。
專利摘要一種便于使用的抗草甘膦轉基因大豆PCR-ELISA檢測試劑盒，涉及一種試劑盒。要解決進行抗草甘膦轉基因大豆PCR-ELISA檢測過程復雜、繁瑣的問題。試劑盒包括PCR預混液試劑瓶、上游引物試劑瓶、下游引物試劑瓶、陽性對照試劑瓶、陰性對照試劑瓶、鏈霉親和素試劑瓶、牛血清白蛋白試劑瓶、探針試劑瓶、超純水試劑瓶、變性溶液試劑瓶、PBST緩沖液試劑瓶、雜交液試劑瓶、碳酸鹽緩沖液試劑瓶、TBTS緩沖液試劑瓶、發色底物試劑瓶、終止液試劑瓶、外盒體和內盒體。本實用新型用于抗草甘膦轉基因大豆PCR-ELISA檢測實驗。
文檔編號G01N33/53GK203021575SQ20132003907
公開日2013年6月26日 申請日期2013年1月24日 優先權日2013年1月24日
發明者仇有文, 張明輝, 袁肖寒, 高學軍, 曲波, 于艷波, 甄貞, 李璐, 劉營, 敖金霞 申請人:東北農業大學