專利名稱：酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法
技術領域：
本發明涉及一種巖藻聚糖硫酸酯的制備方法，尤其是一種提取率高的酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法。
背景技術：
巖藻聚糖硫酸酯(fucoidan)是一種存在于褐藻中的特殊硫酸多糖，國內外研究表明其具有抗凝血、降血脂、抗腫瘤、抗病毒，增強機體免疫機能等多種生物學活性。由于海帶在我國養殖區域廣泛，產量巨大，占世界產量的89％左右，因此海帶已成為巖藻聚糖硫酸酯的主要生產原料之一，而目前的生產方法之有酸解和蒸煮兩種。酸解法破環性大，環境污染較嚴重且目的性差、提取率低；蒸煮法雖然克服了酸解法所具有的破環性大、污染嚴重等缺點，但是其提取率更低。
發明內容
本發明是為了解決現有技術所存在的提取率低的缺點，提供一種無污染、破壞性小、提取率高的酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法。
本發明的技術解決方案是一種酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于有如下步驟a.將纖維素酶和果膠酶，按重量比例為2～6∶1配制成復合纖維素酶；b.以褐藻為原料，向原料中加入原料重量10～20倍的水，并加入原料重量0.23～0.34％的復合纖維素酶，在pH為6.0～8.0的條件下酶解50～80分鐘，然后以90～100℃水浴加熱3～4小時，降至室溫，離心得上清液；c.在上清液中加入乙醇產生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入乙醇產生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
所述的褐藻為海帶或裙帶菜。
所述的乙醇濃度為95％。
本發明是將纖維素酶和果膠酶按比例配制成復合纖維素酶，對褐藻進行酶解并蒸煮以提取巖藻聚糖硫酸酯，克服了現有酸解法破壞性大、污染嚴重的缺點，對提取后所剩原料的綜合利用價值無任何影響；同時其目的性強，提取率高，其提取率在現有技術的基礎上提高0.37～2.40％；所配制的復合纖維素酶價格低廉，降低了提取巖藻聚糖硫酸酯的成本，所提取的巖藻聚糖硫酸酯可制備具有抗凝血、降血脂、抗腫瘤、抗病毒，增強機體免疫機能的保健產品或作為藥品的先導物。本發明操作簡單、可操作性強，適合工業化生產。
具體實施例方式實施例1a.取0.46g纖維素酶和0.22g果膠酶，混合配制成0.68g復合纖維素酶；b.稱200g干海帶為原料，向干海帶中加入原料重量18倍(3600g)的水，并加入所配制的復合纖維素酶(占原料重量的0.34％)，在pH為8.0的條件下酶解50分鐘，然后以94℃水浴加熱4小時，降至室溫，離心得上清液；c.在上清液中加入乙醇使其產生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入乙醇直至產生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中為巖藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道爾頓，重量為原料重量的1.2％。
實施例2a.取0.44g纖維素酶和0.08g果膠酶，混合配制成0.52復合纖維素酶；b.稱200g干海帶為原料，向干海帶中加入原料重量13倍(2600g)的水，并加入所配制的復合纖維素酶(占原料重量的0.26％)，在pH為6.0的條件下酶解80分鐘，然后以100℃水浴加熱3.5小時，降至室溫，離心得上清液；c.在上清液中加入95％乙醇使其產生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入95％乙醇直至產生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中為巖藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道爾頓，重量為原料重量的1.2％。
實施例3a.取0.48g纖維素酶和0.16g果膠酶，混合配制成0.64g復合纖維素酶；b.稱200g干海帶為原料，向干海帶中加入原料重量20倍(4000g)的水，并加入所配制的復合纖維素酶(占原料重量的0.32％)，在pH為7.0的條件下酶解60分鐘，然后以96℃水浴加熱3.5小時，降至室溫，離心得上清液；
c.在上清液中加入95％乙醇使其產生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入95％乙醇直至產生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中為巖藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道爾頓，重量為原料重量的1.3％。
實施例4a.取2g纖維素酶和1g果膠酶，混合配制成3g復合纖維素酶；b.稱1000g干裙帶菜為原料，向干裙帶菜中加入原料重量15倍(15000g)的水，并加入所配制的復合纖維素酶(占原料重量的0.3％)，在pH為6.0的條件下酶解70分鐘，然后以98℃水浴加熱3.5小時，降至室溫，離心得上清液；c.在上清液中加入95％乙醇使其產生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入95％乙醇直至產生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中為巖藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道爾頓，重量為原料重量的6％。
實施例5a.取0.36g纖維素酶和0.1g果膠酶，混合配制成0.46g復合纖維素酶；b.稱200g干海帶為原料，向干海帶中加入原料重量10倍(2000g)的水，并加入所配制的復合纖維素酶(占原料重量的0.23％)，在pH為7.0的條件下酶解80分鐘，然后以100℃水浴加熱3小時，降至室溫，離心得上清液；c.在上清液中加入95％乙醇使其產生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入95％乙醇直至產生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中為巖藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道爾頓，重量為原料重量的1.2％。
權利要求
1.一種酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法，其特征是有如下步驟a.將纖維素酶和果膠酶，按重量比例為2～6∶1配制成復合纖維素酶；b.以褐藻為原料，向原料中加入原料重量10～20倍的水，并加入原料重量0.23～0.34％的復合纖維素酶，在pH為6.0～8.0的條件下酶解50～80分鐘，然后以90～100℃水浴加熱3～4小時，降至室溫，離心得上清液；c.在上清液中加入乙醇產生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入乙醇產生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
2.根據權利要求1所述的酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于所述的褐藻為海帶或裙帶菜。
3.根據權利要求1或2所述的酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于所述乙醇的濃度為95％。
全文摘要
本發明公開一種酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法，是將纖維素酶和果膠酶，按重量比例為2～6∶1配制成復合纖維素酶；以褐藻為原料，向原料中加入原料重量10～20倍的水，并加入原料重量0.23～0.34％的復合纖維素酶，在pH為6.0～8.0的條件下酶解50～80分鐘，然后以90～100℃水浴加熱3～4小時，降至室溫，離心得上清液；在上清液中加入乙醇產生沉淀，離心得上清液；在c步驟所得上清液中加入乙醇產生沉淀，收集沉淀；乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。克服了現有酸解法破壞性大、污染嚴重的缺點，對提取后所剩原料的綜合利用價值無任何影響；同時其目的性強，提取率高，其提取率在現有技術的基礎上提高0.37～2.40％；所配制的復合纖維素酶價格低廉，降低了提取巖藻聚糖硫酸酯的成本。
文檔編號C12N9/42GK1763212SQ20051004758
公開日2006年4月26日 申請日期2005年10月28日 優先權日2005年10月28日
發明者汪秋寬, 何云海, 陳勇, 張澤宇, 康平, 謝智芬 申請人:大連水產學院