一種尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體及其制備方法
【專利摘要】本發明屬于藥物制劑領域。本發明涉及尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體及其制備方法。本發明制備得到的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體可以實現增加藥物尿酸酶貯存穩定性，提高藥物尿酸酶的活性，同時降低過氧化氫的濃度。
【專利說明】一種尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫藥制劑領域，涉及尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體及其制備方法。
【背景技術】
[0002]高尿酸血癥是嘌呤代謝紊亂導致尿酸生成過多或腎臟排泄障礙所致。人體缺乏尿酸酶，可以運用外源性的尿酸酶來治療高尿酸血癥。尿酸酶以分子氧為受體催化尿酸分解為尿囊素、CO2和H2O2，尿囊素能通過腎臟直接排出體外，但是過氧化氫具有細胞毒性。而過氧化氫酶能催化過氧化氫生成氧氣和水。將尿酸酶和過氧化氫酶合用不僅能降低尿酸酶分解尿酸產生的過氧化氫的毒副作用，而且還能為尿酸酶分解尿酸提供氧氣。但是尿酸酶和過氧化氫酶自身存在半衰期短、穩定性差、易被酶降解及口服難以吸收等缺點。為了克服這些問題，將脂質體(Liposomes)作為尿酸酶和過氧化氫酶的載體。脂質體的雙分子層結構具有良好與生物膜的相似性，又可達到控制藥物釋放的目的，同時具有良好的給藥靶向性等特點，從而提高藥物的治療指數，減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒性。本發明制備得到的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體(Uricase and catalase liposomes, UCLP),可增加尿酸酶的貯存穩定性和尿酸酶的體內活性，同時降低副產物過氧化氫的濃度。為了減少給藥次數，提高患者的順應性，增加尿酸酶的貯存穩定性和尿酸酶的體內活性，保持較長時間的有效血藥濃度，同時降低副產物過氧化氫的濃度，有必要研制尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體。
[0003]經查詢專利及文獻，目前尚無尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體的任何研究報道。
【發明內容】
[0004]本發明所要解決的技術問題是提供尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體及其制備方法。尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體具有貯存穩定性好，體內尿酸酶活性高和過氧化氫濃度低等優點。本發明制備得到的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體可用于治療高尿酸血癥。本發明制備得到的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體能克服游離尿酸酶半衰期短、穩定性差、易被酶降解及口服難以吸收等缺點；其貯存穩定性比游離尿酸酶和單一尿酸酶脂質體好，靜脈注射后體內降尿酸能力更強和體內過氧化氫濃度更低等優點。本發明制備得到的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體可緩慢釋放尿酸酶，保持較長時間的有效血藥濃度，可以減少給藥次數，提高患者的順應性，降低峰濃度過高引起的副作用。本發明提供的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體制備工藝簡單，成本較低，易于控制，易于工業化生產。 [0005]本發明提供的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體，其特征在:制劑中尿酸酶含量為
0.2-0.8U/mL、過氧化氫酶含量為100-1000U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂1_3份，膽固醇1-3份，其中使用的緩沖液4種分別為:硼酸-硼砂緩沖液、Tris緩沖液、Tricine緩沖液Bicine緩沖液，緩沖液pH8~9，緩沖液離子強度25_150mM。本發明提供的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體，可以采用逆向蒸發法制備，步驟如下:稱取磷脂、膽固醇溶于三氯甲烷，待其充分溶解，在旋轉蒸發儀上揮干氯仿，即得均勻的薄膜；取適量乙醚將薄膜溶解，然后加入含有尿酸酶和過氧化氫酶的緩沖液，再超聲直至形成帶乳光的均勻分散體系，旋轉揮干乙醚，即得。
[0006]本發明提供的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體的貯存穩定性比游離尿酸酶和單一尿酸酶脂質體的穩定性好(圖1)。本發明提供的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體的藥效實驗結果表明尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體在治療高尿酸血癥方面比游離尿酸酶和單一尿酸酶脂質體的效果好(圖2)，同時能降低尿酸酶分解尿酸產生的過氧化氫濃度(圖3)。
[0007]本專利不同于通常研究報道的單一尿酸酶脂質體的配方。本發明首次在單一尿酸酶脂質體的配方中加入了過氧化氫酶，使尿酸酶和過氧化氫酶同時包載于脂質體內。將用本發明制備得到的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體靜脈注射入體內后，體內降尿酸能力比游離尿酸酶和單一尿酸酶脂質體明顯。分析原因可能如下:尿酸酶催化尿酸時需要氧氣，而過氧化氫酶分解過氧化氫會產生氧氣，不僅能降低過氧化氫的濃度，使反應向正向進行，而且還能為尿酸酶分解尿酸提供氧氣，形成一個循環反應體系。本發明制備得到的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體比較于單一尿酸酶脂質體，由于加入過氧化氫酶，使得過氧化氫濃度降低，繼而降低了由過氧化氫引起的毒副作用。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0008]圖1為本發明制得的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體的貯存穩定性
[0009]試驗條件:分別將游離尿酸酶、尿酸酶脂質體和尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體樣品放置于4°C的冰箱中，分別于第0，1，2，4，7，10，14，20，28天時測定樣品溶液中的尿酸酶的活性。[0010]圖2為本發明制得的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體治療高尿酸血癥時體內尿酸濃度
[0011]試驗條件:建立高尿酸血癥模型后，立即分別給予游離尿酸酶、單一尿酸酶脂質體和尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體治療，然后用尿酸試劑盒測定血清中尿酸濃度。
[0012]圖3為本發明制得的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體治療高尿酸血癥時體內過氧化氫濃度
[0013]試驗條件:建立高尿酸血癥模型后，立即分別給予游離尿酸酶、單一尿酸酶脂質體和尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體治療，然后用過氧化氫試劑盒測定血清中過氧化氫濃度。
【具體實施方式】
[0014]為了進一步說明本發明及其優點，給出了下列特定的實施例，應理解這些實施例僅有于具體說明而不是作為本發明范圍的限制。
[0015]實施例1:
[0016]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.25U/mL、過氧化氫酶含量為100U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂1.1份，膽固醇1份，三氯甲烷IOmL和乙醚10mL，使用的緩沖液為硼酸-硼砂緩沖液，緩沖液pH8.0,緩沖液離子強度25mM，緩沖液IOmL0
[0017]制備方法包括下列步驟:稱取磷脂、膽固醇溶于三氯甲烷，待其充分溶解，在旋轉蒸發儀上揮干氯仿，即得均勻的薄膜；取適量乙醚將薄膜溶解，然后加入含有尿酸酶和過氧化氫酶的緩沖液，再超聲直至形成帶乳光的均勻分散體系，旋轉揮干乙醚，即得。
[0018]實施例2:
[0019]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.5U/mL、過氧化氫酶含量為500U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2份，膽固醇2.3份，三氯甲烷30mL和乙醚30mL，使用的緩沖液為硼酸-硼砂緩沖液，緩沖液pH8.5，緩沖液離子強度90mM，緩沖液20mLo
[0020]制備方法基本同實施例1。
[0021]實施例3:
[0022]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.75U/mL、過氧化氫酶含量為900U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2.8份，膽固醇3份，三氯甲烷12mL和乙醚9mL，使用的緩沖液為硼酸-硼砂緩沖液，緩沖液pH9.0,緩沖液離子強度140mM，緩沖液IOmL0
[0023]制備方法基本同實施例1。
[0024]實施例4:
[0025]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.24U/mL、過氧化氫酶含量為550U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂1.2份，膽固醇2.2份，三氯甲烷24mL和乙醚15mL，其中使用的緩沖液為硼酸-硼砂緩沖液，緩沖液pH8.1，緩沖液離子強度IOOmM,緩沖液IOmL0
[0026]制備方法基本同實施例1。
[0027]實施例5:
[0028]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.49U/mL、過氧化氫酶含量為950U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2份，膽固醇3份，三氯甲烷23mL和乙醚15mL,使用的緩沖液為Bicine緩沖液，緩沖液pH8.6，緩沖液離子強度150mM，緩沖液15mL。
[0029]制備方法基本同實施例1。
[0030]實施例6:
[0031]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.5U/mL、過氧化氫酶含量為200U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2.2份，膽固醇1.3份，三氯甲烷30mL和乙醚30mL，使用的緩沖液為硼酸-硼砂緩沖液，緩沖液pH8.5，緩沖液離子強度50mM，緩沖液20mLo
[0032]制備方法基本同實施例1。
[0033]實施例7:
[0034]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.78U/mL、過氧化氫酶含量為800U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂1.1份，膽固醇1.1份，三氯甲烷IOmL和乙醚10mL，使用的緩沖液為Bicine緩沖液，緩沖液pH8.5，緩沖液離子強度IlOmM,緩沖液IOmL0
[0035]制備方法基本同實施例1。
[0036]實施例8:
[0037]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.5U/mL、過氧化氫酶含量為850U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂1.1份，膽固醇1.2份，三氯甲烷20mL和乙醚20mL，使用的緩沖液為Tris緩沖液，緩沖液pH8.9，緩沖液離子強度145mM，緩沖液10mL。
[0038]制備方法基本同實施例1。
[0039]實施例9:
[0040]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.3U/mL、過氧化氫酶含量為300U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2.1份，膽固醇2.2份，三氯甲烷IOmL和乙醚30mL，使用的緩沖液為硼酸-硼砂緩沖液，緩沖液pH9，緩沖液離子強度150mM，緩沖液IOmL0
[0041]制備方法基本同實施例1。
[0042]實施例10:
[0043]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.74U/mL、過氧化氫酶含量為1000U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2份，膽固醇2.3份，三氯甲烷30mL和乙醚10mL，其中使用 的緩沖液為Bicine緩沖液，緩沖液pH8，緩沖液離子強度55mM，緩沖液20mLo
[0044]制備方法基本同實施例1。
[0045]實施例11:
[0046]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.5U/mL、過氧化氫酶含量為500U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2.7份，膽固醇3份，三氯甲烷12mL和乙醚30mL，其中使用的緩沖液為Tricine緩沖液，緩沖液pH8.5，緩沖液離子強度lOOmM，緩沖液 20mL。
[0047]制備方法基本同實施例1。
[0048]實施例12:
[0049]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.5U/mL、過氧化氫酶含量為600U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2.8份，膽固醇2.9份，三氯甲烷SmL和乙醚20mL，其中使用的緩沖液為Bicine緩沖液，緩沖液pH8.1，緩沖液離子強度35mM，緩沖液20mLo
[0050]制備方法基本同實施例1。
【權利要求】
1.一種尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體，其特征在于:制劑中尿酸酶含量為0.2-0.8U/mL,過氧化氫酶含量為100-1000U/mL，制備制劑所用的緩沖液pH為8~9，離子強度為25~150mM，其余組分重量配比為:磷脂成分為I~3份，膽固醇為I~3份。
2.根據權利要求1所述的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體，其特征在于制備制劑所用的緩沖液是硼酸-硼砂緩沖液、Tris緩沖液、Bicine緩沖液，離子強度為25~150mM，pH值范圍在8~9。
3.根據權利要求1所述的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟:稱取磷脂、膽固醇溶于三氯甲烷，待其充分溶解，在旋轉蒸發儀上揮干氯仿，即得均勻的薄膜；取乙醚將薄膜溶解，然后加入含有尿酸酶和過氧化氫酶的緩沖液，再超聲直至形成帶乳光的均勻分散體系，旋轉揮干乙醚，即得。
4.根據權利要求1所述的尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體，其特征在于:平均粒徑小于I μ m,比較于天然尿酸酶和單一尿酸酶脂質體，尿酸酶復合過氧化氫酶脂質體中尿酸酶貯存穩定性增加，尿酸 酶體內催化活性增加，分解尿酸時產生的過氧化氫含量降低。
【文檔編號】A61K38/44GK103977396SQ201410242161
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年5月26日 優先權日:2014年5月26日
【發明者】張景勍, 周云莉, 張敉, 胡雪原, 何丹, 張永紅 申請人:重慶醫科大學